不同产地岩黄连中总生物碱和脱氢卡维丁的比较研究
【摘要】目的建立岩黄连中总生物碱和脱氢卡维丁的含量测定方法，并探讨不同产地岩黄连二者含量。方法以脱氢卡维丁为对照，分光光度法测定总生物碱含量；RPHPLC法测定脱氢卡维丁含量，以LichrosopherC18柱为分析柱， 0.01 mo1/LKH2PO4水溶液(用磷酸调pH=3)乙腈(75∶25)为流动相，检测波长347 nm，柱温30℃，流速1.0 ml/min。结果广西和贵州产的岩黄连药材总生物碱和脱氢卡维丁含量较高，且广西产的药材两者含量较稳定。结论 所建立的方法操作简便快速，结果准确可靠。测定的不同产地样品中，以广西产的药材质量较好且稳定。【关键词】岩黄连 生物碱 脱氢卡维丁 高效液相色谱
Study of Total Alkaloids and Dehydrocavidine in Corydalis Saxicola Bunting from Different Areas
Abstract:ObjectiveTo establish a method for the content determination of total alkaloids and dehydrocavidine in Corydalis saxicola Bunting , and analyze the two contents from different areas. MethodsDehydrocavidine as the standard and using ultraviolet spectrophotometer to determine the content of total alkaloids. HPLC was performed on the Lichrospher- C18column; 0.01mo1/L KH2PO4 (pH=3) - CH3CN (75∶25) served as mobile phase and the detection wavelength was at 283 nm, the column temperature at 30℃ and the flow rate being 1.0 ml/min, to determine the content of dehydrocavidine.ResultsThe contents of total alkaloids and dehydrocavidinefrom Guangxi and Guizhou were higher, and these two contents from Guangxi were more stable.ConclusionThis method is simple, sensitive, specific and can be used for the quality control of Corydalis saxicola Bunting, and the quality from Guangxi is better and stable.
Key words:Corydalis saxicola Bunting； Alkaloids ；Dehydrocavidine；HPLC
岩黄连为罂粟科植物石生黄堇Corydalis saxicola Bunting的全草，因其具有近似黄连的功效，且生长于岩缝中或岩石旁，故得此名，是黔、桂高寒山区珍贵的中草药材。本品味苦、性凉，具有清热解毒、利湿、止痛止血之功效，主治肝炎、口舌糜烂、火眼、目豁、痢疾、腹泻、腹痛、痔疮出血等［1］。岩黄连中主要有效成分是以脱氢卡维丁为代表的生物碱类化合物。而这类化合物具有潜在的抗HBV活性和肝保护活性。
本研究首次采用分光光度法和HPLC法对我国广西、贵州、四川3个主要产地的岩黄连中总生物碱和脱氢卡维丁的量进行测定。结果证明，采用分光光度法和HPLC法分析测定岩黄连药材中总生物碱和脱氢卡维丁的量，方法可行，结果稳定，为岩黄连药材的质量评价和控制及资源的综合利用提供了有效的方法和依据。
1仪器与材料
Agilemt1100系列高效液相色谱仪，VWD检测器，Chemstation system工作站，752紫外-可见分光光度计。
脱氢卡维丁对照品(中国药品生物制品检定所，111667-200401)。
岩黄连购自药材市场，产地分别为广西、贵州、四川。经本院中药鉴定教研室陈建伟教授鉴定，均为罂粟科植物石生黄堇CorydalissaxicolaBunting的全草。
2方法与结果
2.1总生物碱的测定
2.1.1供试品溶液的制备将岩黄连药材粉碎，过20目筛，取粉末约0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入1%HCl的甲醇溶液25 ml，称定，超声处理40 min，冷却后补足重量，摇匀，过滤，取续滤液1～25 ml量瓶中，用1%HCl的甲醇溶液定容，作为供试品溶液。
2.1.2测定波长的选择对照品溶液及供试品溶液在200～700 nm扫描，发现均在347 nm处有最大吸收峰，以此作为检测波长。
2.1.3线性范围考察精密称取脱氢卡维丁对照品13.0 mg，置25 ml量瓶中，用1%HCl的甲醇溶液定容至25 ml，配成0.52 mg/ml的贮备液。精密量取上述贮备液1.0 ml置10 ml量瓶中，加入1%HCl的甲醇溶液至刻度，摇匀，配制成每毫升含有52μg对照品溶液。分别取对照品溶液0.50，1.00，1.50，2.00，2.50 ml于10 ml量瓶，加入1%HCl的甲醇溶液至刻度，摇匀后于347 nm处测吸光度。以浓度为纵坐标，以吸光度为横坐标进行线性回归，得回归方程Y=64.62X -0.021，r=0.999 2，线性范围为2.6～13.0 μg/ml。
2.1.4精密度实验取浓度为7.8 μg/ml对照品溶液，重复操作5次，测得吸光度，RSD为0.5%。
2.1.5供试品溶液稳定性实验取同一供试品溶液，分别于0，1，2，4，6，8，12，24 h进行显色测定，吸光度的RSD为0.9%，表明供试品溶液在24 h内基本稳定。
2.1.6重复性实验称取同一批样品(广西岩黄连) 粗粉6份，按上述方法制备样品并测定含量，测得总生物碱的RSD为1.1%。
2.1.7加样回收率实验精密称取已测知含量的岩黄连(广西岩黄连)粗粉9份，每3份一组，按样品中总生物碱含量的120%，100%，80%3个水平分别精密加入脱氢卡维丁对照品溶液，然后按供试品溶液的制备项下制备，测定结果，平均加样回收率为99.3%，RSD=2.3%。
2.2脱氢卡维丁含量测定
2.2.1色谱条件Lichrosopher C18色谱柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相： 0.01 mo1/L KH2PO4水溶液(用磷酸调pH=3)乙腈(75∶ 25)，流速1.0 ml/min，检测波长347 nm，柱温30℃，进样量10 μl，理论板数按脱氢卡维丁计不低于3 000。色谱图见图1。
2.2.2供试品溶液的制备将岩黄连药材粉碎，过20目筛，取粉末约0.1 g，精密称定，置25 ml量瓶中，加入1%HCl的甲醇溶液约20 ml，超声处理40 min，冷却后定容，摇匀，过微孔滤膜(0.45 μm)，取续滤液作为供试品溶液。
2.2.3线性范围考察
精密称取脱氢卡维丁对照品13.0 mg，置25 ml量瓶中，用1%HCl的甲醇溶液定容至25 ml，配成0.52 mg/ml的贮备液。分别取贮备液0.50，1.00，1.50，2.00，2.50 ml于10 ml量瓶，加入1%HCl的甲醇溶液至刻度，分别吸取不同浓度的对照品溶液进样，以浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标， 进行线性回归，得回归方程Y=33.05X-34.12，r=0.999 7。可见脱氢卡维丁在26～130 μg/ml范围内呈良好的线性关系。
2.2.4精密度实验
取浓度为78 μg/ml对照品溶液，重复进样5次，测得峰面积，RSD为0.72%。
2.2.5供试品溶液稳定性实验取同一供试品溶液，分别于0，1，2，4，6，8，12，24 h进样，测得峰面积，RSD为1.21%，表明供试品溶液在24 h内基本稳定。
2.2.6重复性实验称取同一批样品(广西岩黄连) 粗粉6份，按上述方法制备样品并测定含量，测得脱氢卡维丁含量的RSD为1.73%。
2.2.7加样回收率实验
精密称取已测知含量的岩黄连(广西岩黄连)粗粉9份，每3份一组， 按样品中脱氢卡维丁含量的120%，100%，80%3个水平分别精密加入脱氢卡维丁对照品溶液，然后按供试品溶液制备方法制备，测定结果，平均加样回收率为100.3%，RSD=2.1%。
2.3样品测定
将不同产地岩黄连样品，分别按总生物碱及脱氢卡维丁测定方法测定，计算含量。结果见表1。表1不同产地岩黄连的总生物碱及脱氢卡维丁含量（略）
3.1对照品的选择岩黄连药材中含有脱氢卡维丁、盐酸小檗碱、黄连碱、脱氢阿卟卡维丁、脱氢异阿卟卡维丁、脱氢斯氏紫堇碱、巴马丁、四氢巴马丁等多种生物碱，但脱氢卡维丁又名岩黄连碱，为岩黄连中特有成分，且在药材中含量较高，又比较容易得到，故选择测定药材中脱氢卡维丁的含量，并以脱氢卡维丁为对照测定药材中总生物碱的含量。实验证明此方法可以有效的对岩黄连药材的质量进行控制。
3.2样品溶液制备方法的考察根据岩黄连中所含生物碱类化合物的性质，选择了盐酸、醋酸、磷酸的甲醇溶液为提取溶剂， 其中盐酸的甲醇提取效率较高，提取方法考察了热回流、冷浸、索氏提取、超声提取等，以冷浸法提取效率最低，其它三种基本一致，考虑操作的简便易行，因此本实验采用了盐酸甲醇超声提取。同时又利用正交试验法对提取次数、提取时间、提取溶剂的用量、盐酸的浓度进行考察，确定了本文的提取方法。
3.3岩黄连总生物碱和脱氢卡维丁的含量广西、贵州、四川是岩黄连的主要产区，通过实验比较发现，四川产的岩黄连总生物碱和脱氢卡维丁的含量都明显低于另外两个产地，而广西和贵州产的相差不大，只是广西产的脱氢卡维丁含量略高于贵州产的，另外广西产的质量较为稳定。
【参考文献】
［1］国家中医药管理局中华本草编委会.中华本草，第3册［M］.上海：上海科学技术出版社，1999：639.
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