气相色谱法测定黑水缬草挥发油中乙酸龙脑酯的含量
【摘要】目的建立黑水缬草挥发油中乙酸龙脑酯的含量测定方法。方法采用气相色谱法，萘为内标物，DB-l7毛细管柱，载气为氦气，电子轰击（EI）离子源检测器。结果在该色谱条件下，乙酸龙脑酯在进样量0.109 6～1.753 6 μg范围内呈良好线性关系，r=0.999 6；乙酸龙脑酯的加样回收率为101.33％，RSD=1.79%。结论该法能准确测定黑水缬草挥发油中乙酸龙脑酯的含量。【关键词】气相色谱法 黑水缬草挥发油 乙酸龙脑酯
Determination of Bornyl Acetate in Valeriana amurensis Volatile Oil by Gas Chromatography
Abstract:ObjectiveTo establish the method for determination of bornyl acetate in Valeriana amurensis volatile oil by Gas Chromatography．MethodsThe GC system consisted of DB-17capillary column, helium as the carrier gas and EI as the detector．Naphthalene was used as internal standard substance in the analysis method. ResultsThe standard curve of bornyl acetate was linear over the range of 0.109 6～1.753 6 μg，r=0.999 6．The mean recovery of bornyl acetate was 101.33％，RSD=1.79%. ConclusionThe method can accurately determine the content of bornyl acetate in Valeriana amurensis volatile oil．
Key words:GC；Valeriana amurensis volatile oil；Bornyl acetate
黑水缬草为败酱科缬草属药用植物，具有安心神、祛风湿、行气血、止痛的功效,主治心神不安,心悸失眠,癫狂,脏躁,风湿痹痛,脘腹胀痛,痛经,经闭,跌打损伤［1～3］。挥发油成分是黑水缬草重要的药效物质基础，其中乙酸龙脑酯为缬草属植物挥发油中共有的特征性成分，具有镇静、镇痛、抗炎、止泻等药理作用［4～6］。王淑梅等［7］对复方缬草合剂中乙酸龙脑酯进行了定性鉴别。但关于缬草属植物挥发油中乙酸龙脑酯的含量测定方法未见报道，本实验采用气相色谱法建立了乙酸龙脑酯的含量测定方法，并对不同采收时期黑水缬草挥发油中乙酸龙脑酯含量进行测定。
1仪器与试药
QP5050A型气质联用色谱仪（日本岛津公司）；AB-N电子分析天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司) ；微量移液器（大龙医疗设备有限公司）。
黑水缬草样品（采自黑龙江省大兴安岭呼玛地区,经都晓伟教授鉴定为正品）；乙酸龙脑酯对照品(中国药品生物制品检定所，批号110759-200303)；萘、甲醇为色谱纯。
2方法与结果
2.1色谱条件DB-17石英毛细管柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm)；载气为高纯度氦气；流速20 ml/min；柱前压63 kPa；初始温度80℃（保持2 min ），以3℃/min的速率升至150℃（保持3 min），接着以10℃/min的速率升至220℃（保持25 min）；气化室温度180℃；电子轰击（EI）离子源检测器，电子能量70 eV，加速电压0.8 kPa；检测器温度250℃；分流比为20∶1；质量扫描范围50～500 m/z；扫描速度0.5 s/dec。
2.2试液的制备
2.2.1对照品溶液的制备精密称取乙酸龙脑酯对照品适量，加甲醇制成2.192 0 mg/ml溶液。
2.2.2内标溶液的制备精密称取萘适量，加甲醇制成2.007 7 mg/ml溶液。
2.2.3供试品溶液的制备称取黑水缬草药材适量，按2005版《中国药典》附录XD挥发油测定法甲法提取挥发油，精密吸取黑水缬草挥发油0.1 ml置于25 ml容量瓶中，加入内标溶液5 ml，用甲醇稀释至刻度，摇匀。
2.3线性关系考察精确吸取对照品溶液0.1，0.2，0.4，0.8，1.6 ml,分别置于2 ml容量瓶中，各加内标溶液0.4 ml,用甲醇稀释至刻度。分别精密吸取1 μl,注入气相色谱仪测定，由对照品进样量与对照品/内标峰面积之比值进行回归，得标准曲线:Y=0.406 5X-0.001 1，r=0.999 6（n=5）。结果表明乙酸龙脑酯进样量在0.109 6～1.753 6 μg范围内线性关系良好。 .4精密度实验取线性实验项下第3点对照品溶液连续进样6次，计算对照品与内标峰面积之比的平均值为1.154 3，RSD=0.69%。
2.5重现性实验对同一批样品从取样开始重复测5次，测定平均含量为0.1382 g/ml，RSD=2.04％。
2.6稳定性实验精密吸取供试品溶液1 μl，进样测定，记录样品与内标峰面积之比值，每隔1 h测1次，6 h内7次测定平均含量为0.140 4 g/ml，RSD=0.91％。
2.7加样回收率实验精密吸取已知含量的样品5份，各加入一定量的乙酸龙脑酯，测定并计算加样回收率。结果见表1。表1加样回收率测定结果（略）
2.8样品测定取黑水缬草不同采收时期样品5批，按供试品溶液制备项下平行制备5份样品溶液，每份样品进样1 μl ，测定乙酸龙脑酯含量。结果见表2，色谱图见图1。表2样品含量测定结果（略）
3结论
该方法采用萘为内标物，灵敏、准确、重现性好，能够准确测定黑水缬草挥发油中乙酸龙脑酯的含量，可用于黑水缬草药材的品质评价。
从样品测定结果可以看出，不同采收时期样品挥发油中乙酸龙脑酯含量略有差异，果熟期达到最高值，枯萎期含量有所下降。故若以乙酸龙脑酯含量为定量指标来评价黑水缬草挥发油，应以果熟期采收为最佳。
【参考文献】
［1］刘 娥,孙宝俊,徐 明,等.黑水缬草一专多能［J］.植物杂志, 1999,3:11.
［2］陈 磊,秦路平,郑汉臣.缬草的化学成分、植物资源和药理活性［J］.药学实践杂志,2000,18(5):277.
［3］郄建坤,屈会化,栾新慧.缬草属植物化学成分及药理研究概况［J］.中国药学杂志,2002,37(10):729.
［4］黄宝康,郑汉臣,秦路平.缬草镇静催眠的物质基础［J］.药学服务与研究,2006,6(3):165.
［5］吴晓松,李晓光,肖 飞,等.砂仁挥发油中乙酸龙脑酯镇痛抗炎作用的研究［J］.中药材,2004,27(6):438.
［6］李晓光,叶富强,徐鸿华.砂仁挥发油中乙酸龙脑酯的药理作用研究［J］.华西药学杂志,2001,16(5):356.
［7］王淑梅,殷立新,王川平.复方缬草合剂的制备及质量控制［J］.华西药学杂志,2000 ,15(5):400. .4精密度实验取线性实验项下第3点对照品溶液连续进样6次，计算对照品与内标峰面积之比的平均值为1.154 3，RSD=0.69%。
2.5重现性实验对同一批样品从取样开始重复测5次，测定平均含量为0.1382 g/ml，RSD=2.04％。
2.6稳定性实验精密吸取供试品溶液1 μl，进样测定，记录样品与内标峰面积之比值，每隔1 h测1次，6 h内7次测定平均含量为0.140 4 g/ml，RSD=0.91％。
2.7加样回收率实验精密吸取已知含量的样品5份，各加入一定量的乙酸龙脑酯，测定并计算加样回收率。结果见表1。表1加样回收率测定结果（略）
2.8样品测定取黑水缬草不同采收时期样品5批，按供试品溶液制备项下平行制备5份样品溶液，每份样品进样1 μl ，测定乙酸龙脑酯含量。结果见表2，色谱图见图1。表2样品含量测定结果（略）
3结论
该方法采用萘为内标物，灵敏、准确、重现性好，能够准确测定黑水缬草挥发油中乙酸龙脑酯的含量，可用于黑水缬草药材的品质评价。
从样品测定结果可以看出，不同采收时期样品挥发油中乙酸龙脑酯含量略有差异，果熟期达到最高值，枯萎期含量有所下降。故若以乙酸龙脑酯含量为定量指标来评价黑水缬草挥发油，应以果熟期采收为最佳。
【参考文献】
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［3］郄建坤,屈会化,栾新慧.缬草属植物化学成分及药理研究概况［J］.中国药学杂志,2002,37(10):729.
［4］黄宝康,郑汉臣,秦路平.缬草镇静催眠的物质基础［J］.药学服务与研究,2006,6(3):165.
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［7］王淑梅,殷立新,王川平.复方缬草合剂的制备及质量控制［J］.华西药学杂志,2000 ,15(5):400.
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