浅谈HPLC法测定异烟肼注射液含量

打盹的憨包子 · 发表于 2014-2-17 16:41:45

【摘要】目的建立用HPLC法测定异烟肼注射液含量的方法。方法HPLC法，采用HypersilBDSC18柱，以乙腈 0.075mol·L-1磷酸二氢钠溶液(体积比5∶95)为流动相，流速为1.0mL·min-1，检测波长262nm。结果异烟肼在 9.90～99.00μg·mL-1浓度范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9999)，平均回收率100.3%(RSD=1.0%)。结论本法操作简便，快速准确，重复性好，可作为本品质量控制方法。

　　【关键词】HPLC法;异烟肼注射液;异烟肼

　　异烟肼注射液为抗结核药，卫生部药品标准采用溴酸钾滴定法测定异烟肼含量[1]。本文参照文献[2]建立了HPLC法测定异烟肼注射液的含量，试验结果表明，本法操作简便，快速准确，重复性好，可用于异烟肼注射液含量测定。

　　1仪器与试药

　　1.1仪器Agilent1100液相色谱仪(安捷伦公司)，HypersilBDSC18柱(菲罗门公司)，TU1901型紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)，AG285电子天平(梅特勒-托利多公司)。

　　1.2试药异烟肼对照品(质量分数99.4%，批号T2006236，广州白云山明兴制药有限公司提供)。异烟肼注射液(批号 061101，061102，061103;规格2mL∶100mg，广州白云山明兴制药有限公司生产)。乙腈(色谱纯，德国默克公司)，磷酸二氢钠(分析纯)，水(注射用水，广州白云山明兴制药有限公司自制)。

　　2方法与结果1对照品溶液的制备取异烟肼对照品约100mg，精密称定，置 100mL量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液(0.9900mg·mL-1);精密量取2mL，置50mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得质量浓度为0.03960mg·mL-1的对照品溶液。2供试品溶液的制备精密量取异烟肼注射液2mL(约相当于异烟肼100mg)，置 100mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取2mL，置50mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。3空白对照溶液的制备除异烟肼外，按处方采用 “2.2”项下的方法制备空白对照溶液。4色谱条件与系统适用性试验色谱柱为HypersilBDSC18柱(200mm×4.6mm，5μm)，流动相为乙腈0.075mol·L-1磷酸二氢钠溶液(体积比5∶95)，流速为1.0mL·min-1，检测波长为262nm，柱温为30℃，进样量为 20μL。分别将对照品溶液、供试品溶液与空白对照溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。理论板数以异烟肼峰计算应不低于6000。空白对照溶液在异烟肼峰处无干扰。结果见图1。

　　图1对照品(A)、样品(B)及空白对照(C)高效液相色谱图(1.异烟肼)　略5线性关系考察分别精密量取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL对照品贮备液，置50mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，依法测定，记录色谱图，以峰面积(A) 为纵坐标、质量浓度(ρ)为横坐标计算得回归方程：A=32.697ρ-14.975，r=0.9999。结果表明，异烟肼在 9.90～99.00μg·mL-1范围内线性关系良好。6精密度试验取对照品溶液，连续重复进样5次，结果峰面积的RSD为0.04%，表明方法精密度良好。7重复性试验取同一批号异烟肼注射液(061101)5份，依法测定，计算，结果异烟肼含量的RSD为0.4%，表明方法重复性较好。8稳定性试验取供试品溶液于0、3、6、12、24、48h分别依法测定，记录色谱图，结果峰面积的RSD为0.6%，表明供试品溶液在48h内稳定。9回收率试验精密量取已知含量为1.023mg·mL-1的异烟肼注射液(批号061101)1.0mL，置50mL量瓶中，分别精密加入对照品贮备液 (0.9900mg·mL-1)0.8、1.0、1.2mL，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，依法测定。结果见表1。

　　表1异烟肼回收率试验结果　略10样品测定取本品，按“2.2”项下的方法制备供试品溶液，依法测定，记录色谱图，按外标法计算异烟肼含量。同时采用溴酸钾法测定含量。结果见表2。

　　表2样品测定结果略

　　3讨论1测定波长的选择照紫外可见分光光度法，取对照品溶液在200～400nm的波长范围内扫描，绘制吸收光谱图，测得异烟肼的最大吸收波长为 262nm;另取空白对照溶液在此范围内扫描，发现在异烟肼最大吸收峰处无干扰，故选择262nm为检测波长。2流动相的选择曾选用不同比例的甲醇0.075mol·L-1磷酸二氢钠溶液、乙腈0.025mol·L-1磷酸二氢钠溶液、乙腈0.075mol·L-1磷酸二氢钠溶液为流动相进行试验，发现以乙腈0.075mol·L-1磷酸二氢钠溶液(体积比5∶95)为流动相的测定结果比较理想，故确定以此为流动相。3本法与现有药品标准方法的比较经试验，本文方法与溴酸钾法[1]测定异烟肼注射液的含量结果无显着差异，且本法灵敏度高，专属性强，快速准确，重复性好，可用于异烟肼注射液含量测定。

　　【参考文献】

　　[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准：化学药品及制剂第一册[D].1989：41.

　　[2]杜兴.高效液相色谱法测定复方异烟肼片中各组分的含量[J].中国药事，15(2)：116.

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