巨细胞病毒感染与婴儿肺炎及支气管肺发育不良的关系

jz066520 · 发表于 2014-6-1 13:10:52

摘要】  目的：探讨人巨细胞病毒感染与婴儿肺炎、支气管肺发育不良的关系。方法：采用酶联免疫吸附法(ELISA)，免疫组化法、荧光定量PCR技术对符合临床诊断标准的婴儿肺炎患儿66例，支气管肺发育不良患儿10例，血、尿、咽拭分泌物及其母亲血、尿和乳汁进行检测，同时检测33例健康儿童及其母亲。结果：血CMVIgM阳性率婴儿肺炎组60.6%，其母亲48.5%，支气管肺发育不良60%，其母亲40%。对照组阳性率15%，其母亲6%。患儿尿HCMV抗原阳性率婴儿肺炎组71.2%，其母亲乳汁74.2%，支气管肺发育不良70%，其母亲乳汁70%，对照组阳性率18%，其母亲乳汁21%。荧光定量PCR检测婴儿肺炎组血CMVDNA阳性率57.6%，尿CMVDNA阳性率57.6%，咽拭分泌物CMVDNA阳性率53%，支气管肺发育不良组血CMVDNA阳性率50%，尿CMVDNA60%，咽拭40%，对照组血CMVDNA阳性率3%，尿CMVDNA6%，咽拭CMVDNA3%。结论：巨细胞病毒感染是婴儿肺炎、支气管肺发育不良的重要病原之一，可以通过母婴垂直传播，做到早期诊断以利治疗。巨细胞病毒感染与婴儿肺炎及支气管肺发育不良有直接相关性

【关键词】  巨细胞病毒感染; 婴儿肺炎; 支气管肺发育不良

巨细胞病毒感染是由人巨细胞病毒引起的人类感染性疾病。成人感染常呈无症状感染，但在免疫抑制人体和幼小婴儿可出现明显症状。婴幼儿感染其临床表现多种多样，其症状性感染包括全身各器官受累，以神经系统受累最严重，可引起胎儿畸形，严重危及胎儿生命。肺是婴幼儿巨细胞病毒感染的重要靶器官之一。近年来，随着医学界对巨细胞病毒研究的重视，巨细胞肺炎更加受到关注，为进一步了解婴儿肺炎、支气管肺发育不良患儿中巨细胞感染的情况。因此，我们采用ELISA检测血CMVIgM，免疫组化检测抗CMVsp阳性细胞，荧光定量PCR技术检测血、尿、咽拭CMVDNA探讨巨细胞病毒与婴儿肺炎，支气管肺发育不良的关系。

　　1 对象与方法

　　1.1 对象

　　2007年9月～2009年9月武汉市儿童医院呼吸内科住院婴儿肺炎66例(男39例，女27例)，年龄<1个月10例，1～3个月20例，3～6个月16例，6月～1岁20例。临床表现为反复咳喘，伴或不伴发热，两肺听诊细湿罗音和哮鸣音，呼气延长呼吸困难，胸片有各种改变，大部分两肺纹理增多，伴有点片状阴影，也可为间质性肺炎改变，少数可成栗粒样改变。均符合《诸福棠实用儿科学》(7版)CMV肺炎的诊断标准[1]。根据以下标准[2，3]选择2007年9月～2009年9月新生儿内科住院支气管肺发育不良10例(男8例，女2例)：早产儿低体重儿，有或无机械通气治疗时，吸氧时间≥28d纠正胎龄36周仍需氧疗，伴有持续性或进行性呼吸功能不全及肺部典型的X线表现(双肺纹理增粗，透亮度差，呈毛玻璃样，局限性肺气肿或囊腔样改变);并根据纠正胎龄36周，出院时用氧与否分成轻、中、重三级。患儿入院当日或次日抽取母子不抗凝的新鲜静脉血1ml立即送检，患儿12h新鲜尿液及母亲新鲜乳汁(≥100ml)留于清洁容器中，立即送检。

　　1.2 方法

　　CMVIgM检测试剂盒(Zeus公司生产);鼠抗CMV(1：50PBS稀释，北京中山有限公司生产);过氧化物酶标记的链霉卵白素染色试剂盒﹙简称SPTM﹚ ，以PV9000通用型二步法检测试剂盒为例，北京中杉金桥生物技术有限公司生产，荧光定量PCR技术检测CMVDNA，仪器为Roche公司的Lightcycle荧光定量仪，试剂盒由中山大学达安基因股份有限公司提供。

　　2 结果

　　婴儿肺炎、支气管肺发育不良与CMV感染的关系表1 婴儿肺炎、支气管肺发育不良血CMVIgM检测结果比较表2 婴儿肺炎、支气管肺发育不良CMVSPTM检测结果比较表3 婴儿肺炎、支气管肺发育不良血CMVDNA、尿CMVDNA、咽拭CMVDNA检测结果比较巨细胞病毒与婴儿肺炎及支气管肺发育不良有直接相关性，分别与对照组相比，经χ2检测，有统计学差异(P<0.05,见表1～3)。

　　3 讨论

　　3.1 妊娠与巨细胞病毒感染

　　人巨细胞病毒属疱疹病毒科B亚科，是疱疹病毒科中基因组最大的病毒，在人群中感染广泛，其感染率与经济水平相关，发展中国家感染率为80%～100%，发达国家也多达60%～80%[4～6]。并具有高度种属特异性，人是巨细胞病毒的唯一宿主，巨细胞病毒感染在我国流行广泛，健康人群感染巨细胞病毒后，由于机体免疫功能正常，潜伏在细胞内的病毒处于静息状态，育龄妇女巨细胞感染常为无症状的隐形感染，其体液包括鼻咽分泌物、乳汁、子宫颈分泌液、尿液中含有巨细胞病毒，人体血管内皮细胞和平滑肌细胞可能是主要潜伏部位，循环淋巴细胞、单核细胞、上皮细胞、成纤维细胞都可能潜伏巨细胞病毒，妇女怀孕后，机体内分泌、生殖等多个系统均要发生相应的代谢变化，妊娠后免疫力下降，潜伏状态的巨细胞病毒再活化而引起发病，可以成为巨细胞病毒的传染源，母婴传播是小儿巨细胞病毒感染的主要途径[7]。其先天性感染率为10%[8],母体原发性感染巨细胞病毒后导致胎儿先天性巨细胞感染的最可能次序是;母亲病毒血症，胎盘感染和血源性播散至胎儿，本组研究中患儿母亲的血CMVIgM、血 CMVDNA，及尿CMVDNA，检测阳性即说明这一点。

　　3.2 母乳与巨细胞病毒感染

　　母乳虽然含有多种营养成分和各种抗体，是配方奶粉不可比拟的，但母乳作为体液的一部分也可以传播病原体。目前我国母乳排毒率为13.3%～18.2%.,这些乳汁排毒的母亲可将病毒传播给婴儿[9]，母乳的安全性是一个不可忽视的问题，本研究婴儿肺炎组母乳HCMV抗原阳性率71.2%，支气管肺发育不良达70%，均说明感染的母乳是婴儿产后巨细胞病毒感染都是主要来源。

　　3.3 小婴儿与巨细胞病毒感染

　　小婴儿是一个机体免疫功能低下的群体，尤其是新生儿，早产儿极易引起多系统播散性疾病或单一组织器官损害，肺为CMV最易感染的器官[10]，本组66例婴儿肺炎中1-6个月36例占54%，与文献报道一致[11]。冯凤仪等[12]研究发现CMV感染患儿体液免疫功能基本正常，CMV感染主要影响细胞免能，CMV可在单核巨噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞复制，其中单核巨噬细胞最易感染。本研究婴儿肺炎组发病以1～6月居多，支气管肺发育不良均为早产儿与上述文献报道相符。

　　3.4 巨细胞病毒诊断方法主要依据实验室检查

　　其诊断方法目前包括：病毒培养，血清特异性抗体检测，抗原血症检测，组织病理学检测，DNA的PCR检测，CMVRNA检测。病毒培养时间长，限制了临床上的使用，血清特异性抗体检测可间接证实体内巨细胞病毒的存在，目前国际上主要是pp65抗原检测和CMVDNA的定量检测。血细胞中的pp65阳性提示产毒新性感染，对CMV感染有早期诊断作用，是公认的标准方法。但其方法较繁琐复杂，实验室条件要求高，定量可以存在一定的人为误差。而对于婴儿患者，我们把尿液、鼻咽分泌物作为临床检测的材料，更具有无创伤性，取材方便的优点，利于被患儿家长接受。对照组婴儿尿液标本中也存在尿CMVDNA阳性，提示巨细胞病毒潜伏性的感染，当机体免疫抑制时，潜伏病毒可活化增值，形成产毒性的感染，所以对于尿CMVDNA阳性而无临床症状的婴幼儿应定期追踪观察。.5 巨细胞病毒造成的肺部病变

　　小儿肺炎是我国儿童的第一位死亡原因[13]，其病因分为细菌性和病毒性，小儿巨细胞肺炎的发病率正在逐年上升，病情重病程长，严重危害婴儿的身体健康。巨细胞病毒在肺内引起的病理生理改变主要是细支气管，尤其是毛细支气管周围炎，小支气管壁粘膜的炎症，充血，水肿可造成细支气管部分或完全性阻塞，所以临床上出现呼吸困难，喘憋，肺部哮鸣音，肺炎是全身巨细胞包涵体病的一部分。支气管肺发育不良是慢性肺疾病的最常见形式，典型的病理改变，包括：上皮损伤、肺实质纤维化和局部肺气肿，病理改变以肺泡和气道结构严重破坏，肺严重纤维化为主要特征。近年来根据对支气管肺发育不良患儿的组织病理研究发现其气道损伤，间质纤维化较轻，主要是肺泡数减少，体积增大及肺泡结构简单化，其机制为外界因素所致的肺泡和肺血管发育停滞[14]。目前大多数学者认为：支气管肺发育不良的高危因素主要与早产、高浓度氧、气压伤、感染、长时间机械通气、长时间吸氧等因素有关。宫内感染时胎儿肺暴露在高浓度炎症介质中，这些炎症介质或细菌通过胎儿胃肠道，气道和脐带使胎儿感染，炎症介质通过影响肺泡上皮细胞的完整性，使正常的肺泡发育停滞导致支气管肺发育不良[15]，亦发现病原体如巨细胞病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒等与支气管肺发育不良的发病相关。本组研究发现巨细胞病毒也是支气管肺发育不良的重要病原之一，与文献一致。

　　巨细胞病毒感染对儿童健康重要影响和对优生优育使其成为全球共同关注的公共卫生问题,儿科医师应充分重视巨细胞病毒的致病作用，对孕妇进行巨细胞病毒血清学检查，早期和准确诊断儿童CMV感染，减少出生缺陷。婴幼儿巨细胞病毒感染的主要传染源为母亲，感染的母亲往往是无症状的感染，宫内通过胎盘，出生时通过产道。出生后经乳汁传播给婴儿，有效切断母婴传播途径是非常必要的，防止或减少婴儿巨细胞病毒的感染。

【参考文献】
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　　9 董永绥，方峰. 巨细胞病毒感染. 见胡亚美，江载芳主编诸福棠实用儿科学.第1版. 北京：人民卫生出版社， 2002，816～821.

　　10 潘家华，陈名武，陈三举，等.婴儿巨细胞病毒感染31例临床及治疗观察.中国微生态杂志，2003，15(5)：293～294.

　　11 傅文永，成焕吉，邹映雪.小儿病毒性肺炎的病原学诊断治疗.新医学，2001，32(5)：268～269.

　　12 冯凤仪，上官明.活动性巨细胞病毒感染患儿免疫状态的变化及其意义.右江民族医学院报，2006，28(1)：34～36.

　　13 张梓荆.病毒性肺炎的现状与对策.中华儿科杂志，1997，35(8)：977.

　　14 朱雪萍，肖志梅，丁晓春，等.早产儿支气管肺发育不良的高危因素及预防对策.中国实用儿科杂志，2007，22(9)： 664～665.

　　15 Speerip inflammation and bronchopulnonery dysplasial semin Neonatol， 2003，8(1)：29～38.

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