丹参多酚盐治疗多脏器功能不全的实验研究

jz066520 · 发表于 2014-6-1 13:11:19

      作者：穆德广金发光楚东岭孙瑞琳

【摘要】  目的：探讨丹参多酚盐体内治疗多脏器功能不全的作用。方法：健康大耳白兔24只，随机分为正常对照组、内毒素组、丹参多酚盐干预组，每组8只。内毒素组经耳缘静脉静推LPS(1ml/kg)，12h后再由耳缘静脉注射一次LPS(1ml/kg)，复制SIRS/MODS动物模型;对照组耳缘静脉静推等量生理盐水;丹参多酚盐干预组于0h, 12h经耳缘静脉推注LPS(1ml/kg)并于第一次注入内毒素后6h，12h，18h静推丹参多酚盐(50mg/kg)。于24h时间点测定各组动物血清肿瘤坏死因子α (TNFα) 、白细胞介素1(IL1)、白细胞介素6(IL6)、血小板活化因子(PAF)。光镜下观察各组动物脏器病理学变化。结果：丹参多酚盐干预组与内毒素组相比, IL1、IL6、PAF、TNFα均较内毒素组有不同程度降低。丹参多酚盐干预组脏器损伤组织学改变较内毒素组明显减轻。结论：丹参多酚盐具有治疗多脏器功能不全的作用，为防治MODS提供了实验依据。

【关键词】  多脏器功能不全综合症; 丹参多酚盐注射液; 内毒素; 炎症介质

在全身性炎症反应综合症/多器官功能障碍综合症(SIRS/MODS)发病过程中，机体产生大量有害炎症介质，其中白细胞介素1(IL1)、肿瘤坏死因子α (TNFα)发挥核心作用，造成组织器官病理变化。我们通过内毒素所致感染性多器官功能障碍综合症动物模型，观察丹参多酚盐治疗多脏器功能不全的作用。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　丹参多酚酸盐购于上海绿谷集团。大耳白兔(购自第四军医大学动物中心)，内毒素(LPS)购于Sigma公司;兔TNFα、 IL1、PAF定量ELISA试剂盒购于上海森雄科技实业有限公司，IL6定量ELISA试剂盒购于第四军医大学免疫教研室。

　　1.2 方法

　　健康雄性兔24只,平均体重2kg。随机分为3组,正常对照组、内毒素组、丹参多酚盐干预组。3组动物均从耳静脉给相应药物。内毒素组于第0h及12h分别给予脂多糖(LPS)1mg/kg;正常对照组推注等量生理盐水;丹参多酚盐组:第一次静推LPS后6、12、18h分次静推丹参多酚盐50mg/kg。

　　1.3 观察指标与检测方法

　　分别在正常对照组注入生理盐水，内毒素组及丹参多酚盐干预组注入内毒素后于24h时间点将全部动物放血活杀,采集静脉血，离心分离上清，血清采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子α (TNFα)、白细胞介素1(IL1)、白细胞介素6(IL6)、血小板活化因子(PAF)。取出肺、肾、各一小块组织,将标本置入4%的多聚甲醛液中固定,石蜡包埋、切片,HE染色后光镜观察并照相。

　　1.5 统计学处理

　　数据用均数±标准差(±s)表示,用SPSS11.OR软件进行统计分析，组间比较采用t检验。

      2 结果

　　2.1 肉眼观察结果

　　正常对照组:兔外观及各项体征正常;内毒素组:兔出现皮温升高、呼吸窘迫、反应迟钝、口唇发绀,部分动物口唇有粉红色泡沫液体溢出,各脏器均有不同程度肿胀、表面大小不等暗红色斑片状病灶,部分动物腹腔内有血性积液，SIRS/MODS动物模型复制成功。

　　2.2 血清TNFα和IL6水平检测结果

　　表1显示,与正常对照组比较,内毒素组TNFα及IL6有明显升高,丹参多酚盐干预组与内毒素组比较IL6和TNFα均有不同程度降低,但仍高于对照组。表1 血清中TNFα、IL6含量变化　注：* P<0.05，与对照组比较; # P<0.05，与致伤组比较。

　　2.3 血清IL1和PAF水平检测结果

　　表2显示,与正常对照组比较,内毒素组IL1、PAF有明显升高,丹参多酚盐干预组与内毒素组比较IL1和PAF均有不同程度降低,但仍高于对照组。表2 血清中IL1、IL6、PAF含量变化注： * P<0.05，与对照组比较;# P<0.05，与致伤组比较。

　　2.4 病理学改变

　　内毒素组:光镜下肺、肾等脏器微血管内红细胞聚集,微血栓形成。丹参多酚盐干预组：镜下肺、肾等脏器炎症反应较致伤组明显改善，微血栓明显减少。

　　光镜下，内毒素组肺组织肺泡壁增厚，肿胀，肺泡萎陷闭合，大量炎症细胞侵润，微血管内红细胞聚集，微血栓形成。丹参多酚盐干预组肺泡壁增厚及肺泡萎陷程度较内毒素组减轻，炎症细胞侵润及微循环障碍明显改善。

　　光镜下内毒素组可见肾小球毛细血管丛扩张充血，肾小管上皮浊肿，透明变性，整个肾脏组织伴有中性粒细胞和单核细胞浸润，同时伴有广泛的微血栓形成。肾间质可有水肿及灶状炎性细胞浸润。丹参多酚盐干预组见肾脏组织充血，水肿减轻明显，炎性细胞浸润较轻。　　3 讨论

　　研究表明,TNFα 在SIRS/MODS发病机制中起重要作用[1～4]。TNFα可进一步促进IL1 、IL6、PAF等的生成和释放使炎症放大，促进NO释放引起低血压，促进中性粒细胞(PMN)和血管内皮细胞(VEC)的粘附分子表达使引起两种细胞间的粘附和相互作用等。TNFα 还可引起发热反应和促进肝脏产生急性期反应蛋白，促进PMN和VEC的组织因子(TF)表达，从而引起凝血系统、补体系统、激肽系统和纤溶系统的连锁式激活。

　　血小板活化因子(PAF)是一种重要的血管活性物质,在SIRS/MODS引起的病理改变过程中起重要作用[5,6]。PAF由白细胞、血小板及微血管内皮细胞等产生。PAF可以引起微血管通透性的改变。其作用机制包括:促进NO的合成和释放、TAX2的产生和IL1的合成和释放。PAF还可引起中性粒细胞聚集,进而增强微血管的通透性。PAF可通过激活白细胞、促进氧自由基的产生,进而调高粘附分子,并促使白细胞的粘附、聚集增强,继之以更多的氧自由基生成。

　　内毒素作用机体后，诱导上述细胞因子和炎症介质的产生，并相互作用，引起一系列级联放大的瀑布效应，最终导致成为SIRS/MODS发生、发展。

　　丹参多酚盐的有效活性成份为丹参乙酸镁,具有抗血小板积聚、抗凝、活血化瘀、消炎止痛等作用，是治疗心脑血管疾病的常用药。丹参多酚盐是否可以减少致炎因子发挥抗炎作用,国内外未见到报道。在本实验中,我们观察家兔经耳缘静脉静推内毒素后，兔出现皮温升高、呼吸窘迫、反应迟钝、口唇发绀,部分动物口唇有粉红色泡沫液体溢出,各脏器均有不同程度肿胀、表面大小不等暗红色斑片状病灶,部分动物腹腔内有血性积液，表明SIRS/MODS动物模型复制成功。

　　家兔经耳缘静脉静推内毒素后，给予丹参多酚盐治疗后，动物一般状况较内毒素组明显改善。病理学显示，内毒素组试验动物的肺、肝、肾脏明显充血水肿，炎症细胞大量侵润，组织细胞出现肿胀坏死，微血管内红细胞聚集，微血栓形成。给予丹参多酚盐治疗组动物上述脏器的病理改变明显改善，表明丹参多酚盐能有效治疗内毒素诱导的MODS。

　　本试验中家兔注入内毒素后，细胞因子及炎症介质TNFα、IL1、IL6和PAF明显升高，最终导致家兔SIRS/MODS的发生和发展。而丹参多酚盐治疗组的家兔，血清中TNFα、IL1、IL6和PAF较内毒素组显著降低(P<0.05)，组织损伤明显改善，表明丹参多酚盐可体内中和内毒素的毒性作用，有效治疗内毒素诱导的SIRS/MODS，为临床治疗SIRS/MODS提供了理论和实验依据。

【参考文献】
  　1 Malleo G, Mazzon E, Siriwardena AK, et al. Role of tumor necrosis factoralpha in acute pancreatitis: from biological basis to clinical evidence. Shock，2007，28(2):130～140.

　　2 Taniguchi T, Kidani Y, Kanakura H, et al. Effects of dexmedetomidine on mortality rate and inflammatory responses to endotoxininduced shock in rats. Crit Care Med，2004， 32(6):1322～1326.

　　3 Bohrer H, Qiu F, Zimmermann T, et al. Role of NFkappaB in the mortality of sepsis. J Clin Invest，1997，100(5):972～985.

　　4 Kim PK, Deutschman CS. Inflammatory responses and mediators. Surg Clin North Am，2000，80(3):885～894.

　　5 Prescott SM, McIntyre TM, Zimmerman GA. Platelet-activating factor: a phospholipid mediator of inflammation. In Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates, Gallin JI, Snyderman R. Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, PA, 1999， 387～389.

　　6 唐皓,熊艳,李玉杰等.SIRS与MODS患者外周血单核细胞环氧化酶与血小板活化因子的关系研究. 中国危重病急救医学， 2006, 18(11)： 687～690.

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[临床医学] 丹参多酚盐治疗多脏器功能不全的实验研究