Ecadherin和HSP70在肝细胞癌中的表达

jz066520 · 发表于 2014-6-2 10:31:46

         作者：魏嘉梁佳包翠芬苏荣健

【摘要】  目的：探讨Ecadherin和HSP70在不同分化程度HCC中的表达情况以及两者的相关性。方法：采用免疫组织化学方法，检测41例肝癌组织及5例癌旁正常肝脏组织中Ecadherin和HSP70的表达情况。结果： Ecadherin在正常肝脏组织中呈高表达，而在HCC中表达降低且与分化程度有关，部分低分化的HCC组织中表达缺失(P<0.05);HSP70在HCC中表达升高，与正常组比较差异有显著性，且与分化程度有关。相关性分析发现Ecadherin和HSP70在HCC中的表达成负相关(r=-0.322，P<0.05)。结论： HCC中，Ecadherin 表达降低，HSP70表达升高，提示两者在HCC侵袭和转移中存在一定的相关性。

【关键词】  Ecadherin; HSP70; 肝细胞癌; 相关性

肝细胞癌(human hepatocellular carcinoma,HCC)早期侵袭和转移是肝癌手术后复发的主要原因之一，研究HCC侵袭和转移机制已成为肝脏肿瘤防治领域的热点问题[1]。本研究应用免疫组化方法观察上皮钙粘蛋白(Ecadherin)和分子伴侣热休克蛋白70(Heat Shock Protein 70,HSP70)在不同分化程度HCC中的表达情况，探讨Ecadherin和HSP70对HCC侵袭和转移的影响。

　　1 材料和方法

　　1.1 材料与试剂

　　收集北京301医院2006年8月～2007年12月具有完整临床及病理资料的肝脏手术切除癌组织和癌旁正常肝脏组织，患者平均年龄51岁。癌旁正常肝脏组织5例，HCC组织41例，其中高分化11例，中分化22例，低分化8例，所有病例术前都未接受放疗、化疗等相关治疗。Ecadherin、HSP70鼠抗人单克隆抗体购于Santa Cruz公司。

　　1.2 方法

　　标本经10%中性福尔马林固定,常规石蜡包埋, 切片厚度5μm。石蜡切片常规脱蜡至水。采用高压法进行抗原热修复,自然冷却后取出切片以充分暴露抗原，免疫组化Envision法染色，DAB显色。阴性对照用PBS替代一抗。

　　1.3 结果判定

　　光镜下每张切片在肝癌组织中随机选取10个高倍视野，每个视野计数100个细胞,并对细胞染色强度及阳性细胞比例进行评分。染色强度分级如下：无着色为0，淡棕黄色为1，棕黄色及更深颜色为2。阳性细胞数分级为：阳性细胞数<10%为0，11%～25%为1，26%～50%为2，>51%为3。两项相加结果大于2为阳性表达病例。

　　1.5 统计学分析

　　采用SPSS13.0统计学软件进行χ2检验和相关分析。检验水准均为P=0.05。

　　2 结果

　　2.1 HCC中Ecadherin的表达

　　Ecadherin阳性表达定位于细胞膜。肝癌中阳性表达率为34.15%(14/41)，癌旁正常组织阳性表达率为80%(4/5)，两者比较差异具统计学意义(P<0.05)。在不同分化程度的肝癌中，低分化者阳性表达率低(12.50%)，高分化者阳性表达率高(72.73%)，两者比较差异具统计学意义(P<0.05)。

　　2.2 HCC中HSP70的表达

　　HSP70阳性表达定位于细胞质和细胞核。肝癌中阳性表达率为53.66%(22/41)，癌旁正常组织阳性表达率为0%(0/5)，两者比较差异具统计学意义(P<0.05)。在不同分化程度的肝癌中，低分化者阳性表达率高(75%)，高分化者阳性表达率低(27.27%)，两者比较差异具统计学意义(P<0.05)。

　　2.3 Ecadherin和HSP70在HCC中表达的相关性

　　对41例HCC标本中Ecadherin和HSP70的表达进行Bivariate相关分析,Kendall's 相关系数r=-0.322,P<0.05。据此推测Ecadherin和HSP70在HCC组织不同分化程度中存在一定的相关性。表1 Ecadherin和HSP70在不同分化程度HCC中的表达注：▲为高分化与低分化组比较的χ2/P值; △为高分化与中分化组比较的χ2/P值; ★为中分化与低分化组比较的

　　χ2/P值; ☆为正常与肝细胞癌组的比较的χ2/P值。3 讨论

　　肿瘤细胞的侵袭和转移是恶性肿瘤的主要生物学特征，也是肿瘤患者致死的主要原因，它是一个多因素，多步骤并且涉及细胞间相互作用的复杂病理生理过程。LiottaL A[2]首先提出肿瘤侵袭转移的三步学说，即粘附、降解和移动。也就是肿瘤细胞间粘附下降，同时肿瘤细胞与细胞外基质中层粘连蛋白和纤维连接蛋白相粘附，并释放各种水解酶类，破坏其粘附部位的组织，使肿瘤细胞得以向纵深移动，远距离转移。

　　Ecadherin是一组介导同种细胞相互粘附的钙依赖性的跨膜糖蛋白，维持组织结构的完整性及极性，当Ecadherin的表达下降或者由于其他因素损害了Ecadherin的粘附功能时，肿瘤细胞就易于脱离原发灶，开始向周围组织侵袭，并为肿瘤的远处转移提供了必要的条件。研究表明，在结肠癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌、食管癌、皮肤癌、肾癌中，Ecadherin的异常表达程度与上述肿瘤病理分级密切相关,随着其分化程度的下降,其表达率也逐渐降低。本实验进一步证实了在不同分化程度的HCC中，Ecadherin的表达随着分化程度的降低而降低，在部分低分化病例中还出现了Ecadherin缺失现象。这说明了Ecadherin在侵袭转移过程中确实起着十分重要的作用，Ecadherin的丧失或低表达是HCC肝癌获得高侵袭能力的因素之一。

　　热休克蛋白(HSP)是细胞应激原特别是环境高温诱导下所生成的一组蛋白质，长期以来一直认为HSP70作为“分子伴侣”维护蛋白质正常构象，调整蛋白质的折叠、装配、转运和降解，并参与应激状态下的细胞保护。近来研究表明[3～5]大部分肿瘤细胞内HSP70表达增加，与肿瘤的发生发展及转归密切相关。还有结果显示HSP70在恶性肿瘤组织中的高表达是细胞增生的标志，在细胞周期中起重要作用，且表达的量与恶性程度相关[6]。本实验结果显示，低分化组HSP70的表达显著高于高分化组，可见HSP70蛋白的表达与HCC的分化程度密切相关(P<0.05)。

　　本实验结果还显示，在癌旁正常组织中，Ecadherin呈高表达，而HSP70表达较低;而在HCC中，随着肿瘤恶性程度的增高，Ecadherin的表达逐渐降低而HSP70的表达逐渐增高。相关性分析发现Ecadherin和HSP70呈负相关。研究表明，Ecadherin在维持细胞结构的完整性中具有重要的作用，当表达降低或缺失时，肿瘤细胞侵袭和转移的能力增强;而HSP70与肿瘤的发生发展与转归密切相关，肿瘤形成过程中缺氧和营养不足，而需要较多的HSP70使其不断增殖。此结果提示在上皮-间叶性转化过程中，Ecadherin和HSP70存在一定的因果关系，并且相互作用导致肿瘤细胞的侵袭和转移。但两者相互作用的机制还有待于进一步研究。

【参考文献】
  　1 侯振江,张宗英,单保恩.基质金属蛋白酶在肝癌研究中的进展. 国外医学.临床生物化学与检验学分册,2005,26(8)：517～519.

　　2 LiottaL A. Tumor invasion and metastasesrole of the extracellular matrix:Rhoads Memorial Award Lecture.Cancer Res,1986,46(l):1～7.

　　3 Todryk SM ，Gough MJ，Pockley AG .Facets of heat shock protein 70 show immunotherapeutic potentia1.Immunology,2003,110:1～9.

　　4 Gross C,Hansch D, Gastpar R,et a1.Interaction of heat shock protein 70 peptide with NK cells involves the NK receptor CD94. Biol chem,2003,384:267～279.

　　5 Shin BK, Wang H, Yim AM,et a1.Global profiling of the cell surface proteome of cancer cells uncovers an abundance of proteins with chaperone function.J Biol Chem,2003,278:7607～7616.

　　6 Hu W, Wu W, Yeung SC, et al. Increased expression of heat shock protein 70 in adherent ovarian cancer and mesothelioma following treatment with manumycin,afarnesyl transferase inhibitor.Anticancer Res,2002,22(2A): 665～672.

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