大山楂丸中总黄酮的含量测定

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【摘要】  目的建立大山楂丸中总黄酮的含量测定方法。方法采用分光光度法，以槲皮素为对照品，对其进行络合显色，在510 nm波长处测定吸收度，从而测定大山楂丸中总黄酮的含量。结果线性范围在0.020 004 ～ 0.100 02 mg·ml-1 (r=0.999 3)之间，平均回收率为96.02%，RSD= 1.22% (n=5 )。结论该法简便易行、重现性好、结果可靠，可用于该制剂的质量控制。

【关键词】  大山楂丸 总黄酮 分光光度法

　　Abstract：ObjectiveTo establish ultraviolet spectrophotometry for the content determination of Total Flavones in Dashanzha Pill.MethodsQuercetin was selected as reference material, and the samples were determined at 510 nm.ResultsThe linear range for quercetin was 0.020 004 ～ 0.100 02 mg·ml-1(r= 0.999  3). The recovery rate was 96.02%; RSD= 1.22% (n=5 ).ConclusionThis method is easy to handle with good accuracy and reproducibility, and is suitable for the quality control of Dashanzha Pill.

　　Key words：Dashanzha Pills;  Total Flavones;  Spectrophotometry
   
　　大山楂丸由山楂、神曲、麦芽组成，具有开胃消食的功能，用于食积内停所致的食欲不振、消化不良、脘腹胀闷。主要化学成分有多种黄酮、有机酸、维生素及各种消化酶等。本实验采用分光光度法对总黄酮进行含量测定。现将结果报道如下。

　　1  仪器与试药
   
　　UV-1800紫外分光光度计（北京瑞利），槲皮素对照品（中国药品生物制品检定所），大山楂丸（北京同仁堂制药厂），水为本院实验中心自制纯化水，其他试剂均为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  对照品溶液制备精密称取槲皮素对照品20 mg，置100 ml容量瓶中，加入95%乙醇50 ml溶解，再以50%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得0.2 mg/ml的对照品溶液。

　　2.2  供试品溶液制备取105℃干燥2 h的大山楂丸约6.5 g，精密称定，置索氏提取器中，加入95%乙醇130 ml,回流提取1.5 h。将提取液定量转移至250 ml容量瓶中，补加蒸馏水至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

　　2.3  标准曲线的制备精密量取对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml，分别置于10 ml容量瓶中。分别加入50%乙醇使成5 ml；精密加入5%NaNO2溶液0.3 ml，摇匀，放置6 min；加入10%Al(NO3)3溶液0.3 ml，摇匀，放置6 min；加入1 mol/L NaOH溶液4 ml;分别用50%乙醇稀释至刻度，摇匀，放置15 min。以第1瓶作空白，于510 nm处分别测其吸光度，以对照品浓度为横坐标，以吸收度为纵坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程。结果见表1。
   
　　计算回归方程得Y= 4.854X - 0.005 1，r= 0.999 3。结果表明，槲皮素在0.020 004 ～ 0.100 02 mg·ml-1范围内呈良好的线性关系。

　　2.4  稳定性实验取同一供试品溶液，分别于配制后0，15，30，45，60 min，依照“2.3”项方法测定吸收度，分别为0.284，0.283，0.281，0.280，0.278，RSD= 0.85%。实验结果提示：供试品溶液制备后1 h内稳定，吸收度无明显变化。

　　2.5  精密度实验取同一供试品溶液5份，依照“2.3”项方法测定吸收度，分别为0.281，0.278，0.285，0.277，0.280，RSD=1.11%。

　　2.6  重复性实验取同一批样品（批号6015193）5份，每份各6.5 g，依2.2项方法制备供试品溶液。精密吸取1 ml供试品溶液，依“2.3”项方法测定，结果分别为22.906，23.066，22.513，22.434，22.276 mg·g-1，平均含量为22.639 mg·g-1，RSD= 1.47%。2.7  回收率实验精密称取5份已知含量的样品（批号6015193），精密加入对照品适量，依“2.2”项方法制备供试品溶液。精密吸取1ml供试品溶液，依“2.3”项方法测定，计算回收率，结果表明，回收率的重现性好。结果见表2。

　　表1  线性范围考察结果（略）

　　表2  回收率测定结果（略）

　　2.8  样品含量测定精密量取供试液1 ml置10 ml容量瓶中，加入50%乙醇使成5 ml；照“2.3”项方法，自“精密加入5%NaNO2溶液0.3 ml”起，依法操作，另精密量取5 ml 50%乙醇，照“2.3”项方法，自“精密加入5%NaNO2溶液0.3 ml”起，依法操作，制成空白溶液。在波长510 nm处，以空白溶液校正基线，测定供试液的吸光度值，代入回归方程，计算供试液中总黄酮的含量。结果见表3。

　　表3  大山楂丸总黄酮含量测定结果（略）

　　3  讨论
   
　　目前，文献报道总黄酮的含量测定方法，主要有紫外分光光度法，HPLC法，荧光光度法等［1～5］。本实验采用分光光度法测定大山楂丸中总黄酮的含量，简便易行、重现性好、结果可靠，为缺少昂贵设备的研究机构提供了相应的研究手段。
   
　　本实验以槲皮素为标准品，经全波长扫描确定最大吸收波长510 nm为检测波长。
   
　　通过考察样品的提取方式，发现索氏提取法优于超声提取。
   
　　通过考察索氏提取样品的时间，发现提取1.5 h，基本能提尽样品中的总黄酮。

【参考文献】
  　　［1］ 宋永强,谌乐刚.分光光度法测定裸花紫珠片中总黄酮含量［J］.海南医学,2005,16（6）:152.

　　［2］ 谢 鸣,彭镰心,刘 超,等.紫外分光光度法测定夏枯草微丸中总黄酮的含量［J］.西南民族大学学报,2006,32（1）:136.

　　［3］ 杨书良.HPLC测定双果胶囊中总黄酮的含量［J］.中国中药杂志,2004,29（6）:586.

　　［4］ 文红梅,王业盈,彭国平,等.HPLC法测定蒲黄中总黄酮的含量［J］.现代中药研究与实践,2006,20（3）:41.

　　［5］ 黄锁义,龙 凤,梁 宇,等.荧光光度法测定榕树叶总黄酮含量的研究［J］.时珍国医国药,2006,17（6）:983.