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【摘要】 目的优选温胆滴丸的提取工艺。方法以总氨基酸和陈皮苷含量为指标，以水为提取溶媒，采用正交实验法，来考察提取时间、提取次数与溶剂倍数对温胆滴丸提取效果的影响。结果最佳提取条件为：以12倍量水提取3次，1.5 h/次。结论该提取工艺稳定，提取效率高，适合工业化生产。
【关键词】 温胆滴丸 总氨基酸 橙皮苷 正交实验 提取工艺
Abstract：ObjectiveTo establish the optimal extraction technology for Wendan Dripping Pills. MethodsUsing the orthogonal design, observed the effect of extractive time, extractive number and solvent amount on the extraction results, with the content of the total amino acids and aurantiamarin as the indexes. ResultsThe best extraction condition is that the crude drug is added 12 times amount water and extracted for 3 times, each time for 1.5 hours. ConclusionThis extraction technology is stable and can be used in industrial production.
Key words：Wendan Dripiing Pills; The total amino acids; Aurantiamarin; Orthogonal test; Extraction technology
温胆滴丸是沈阳药科大学教研室新研制的中药六类新药之一，由陈皮、甘草、枳实、生姜等多味中药组成，具有清胆和胃、除痰止呕等功效，用于胆虚痰热上扰，大病后, 虚烦不得眠。其汤剂目前广泛用于神经系统、心脑血管系统、消化系统、呼吸系统疾病。为发挥其最大疗效，按照《新药审批办法》中对中药新药相关研制要求，对其提取工艺进行了如下研究。
1 仪器与试药
1.1 仪器 JASCO高效液相色谱仪(PΜ-1580泵，ΜV-1575紫外-可见检测器，AS-1555自动进样器，JCO-1565 智能柱温箱，BORWIN Chromatography software工作站)，紫外分光光度计（日立UV－2000）。
1.2 试药药材购于广东省医药公司；精氨酸对照品购于北京化学试剂公司；对照品橙皮苷由中国药品生物制品检定所提供；甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 含量测定［1，2］
2.1.1 橙皮苷含量测定色谱条件：色谱柱为Irreg μlar-H C18柱（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇醋酸水（30∶4∶6）；检测波长283 nm，柱温35℃；流速1 ml/min。理论塔板数以橙皮苷峰计不低于2 500。
标准曲线的绘制：精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成0.11 mg/ml的溶液，作为对照品溶液。分别吸取对照品溶液2，5，10，15，20，25 μl，按上述色谱条件进行测定。以橙皮苷对照品进样量为横坐标，以对照品峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线。计算得线性回归方程为Y＝163 112X + 32 380（r =0.999 8）。结果表明，橙皮苷含量在0.55～2.75 μg之间呈良好的线性关系。
精密度实验：精密吸取对照液10 μl，重复进样6次，测定峰面积。测得RSD为0.54%，表明精密度良好。
加样回收率实验：取橙皮苷对照品适量，置于已知含量的供试品中，按上述色谱条件测定，计算加样回收率。结果平均回收率为99.68%， RSD为1.32%。
2.1.2 总氨基酸含量测定
标准曲线的绘制：分别精密吸取对照品溶液（21.5 μg/ml）1，1.5，2，2.5，3，3.5 ml于50 ml量瓶中，随行空白一份，分别加入5.0 ml pH 5.8磷酸盐缓冲溶液，1.0 ml 2%茚三酮溶液，摇匀后置沸水浴煮沸15 min，取出以流水冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀，显色，在568 nm下测定吸收度。以对照品精氨酸浓度（μg/ml）为横坐标，以吸收度为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为Y = 16.419X-0.549 5(r= 0.999 7)。结果表明精氨酸在29.4～94.6 μg/ml线性关系良好。 精密度实验：精密吸取精氨酸对照品溶液（21.5 μg/ml）2 ml于50 ml量瓶中，测定其吸收度。测得RSD为1.2%（n=6）。
加样回收率实验：精密吸取精氨酸对照品适量，置于已知含量的供试品中，按上述测定方法测定，计算加样回收率。结果平均回收率为98.5%,RSD为1.88%。
2.2 正交实验结果［3］
2.2.1 因素水平的确定确定提取时间、提取次数、溶剂倍数为3个考察因素，每因素采用3水平。见表1。
表1 提取工艺考察因素水平（略）
2.2.2 实验安排 分别取处方量药材40 g，按 表2正交实验表安排实验，水提液浓缩至100 ml，取样，测定橙皮苷和总氨基酸的含量。
2.2.3 实验结果 根据正交表，共进行9次实验，结果见表2。方差分析见表3。
表2 L9(34)正交实验结果（略）
表3 方差分析（略）
以橙皮苷和总氨基酸的含量为指标。方差分析结果表明，A，B，C三因素对橙皮苷和总氨基酸的提取均无显著性影响。由极差R值大小可知，影响因素主次次序都为：B(提取次数)＞A(提取时间)＞C(溶剂倍数)。故选择A3B3C3组成最佳实验方案，及以12倍量水提取3次，1.5 h/次。
2.2.4 最佳工艺的验证取处方药材3份，每份40 g，按上述最佳工艺进行提取，测定橙皮苷和总氨基酸的含量。结果见表4。
表4 温胆滴丸最佳提取工艺验证结果（略）
由表4可知，3次验证实验橙皮苷和总氨基酸的含量均高于正交实验，说明该工艺是稳定可行的。
3 结论
经过正交设计实验确定温胆滴丸的最佳提取工艺为12倍量水提取3次,1.5 h/次。经过对最佳提取工艺的验证实验表明该工艺稳定，提取效率高，可以应用于工业化生产。
【参考文献】
［1］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：132.
［2］ 熊胜元，李洪刚. 高效液相色谱法测定藿香正气口服液中橙皮苷含量［J］.中国药业，2004，13（3）：45.
［3］ 杨树勤，周有尚，倪旱雨，等.卫生统计学［M］.北京：人民卫生出版社，1996:153. |
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发表于 2014-8-19 18:24:13
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