河北香菊总黄酮的富集与含量测定

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【摘要】  目的测定香菊总黄酮含量。方法采用大孔吸附树脂富集，60%乙醇洗脱，得总黄酮，采用紫外分光光度法进行含量测定。结果操作简便，总黄酮的平均含量为37.35%。结论富集率较高且稳定，测定方法准确可靠。

【关键词】  河北香菊 总黄酮 富集

　　Concentration and Determination of the Flavonoid of Hebei Balmy Chrysanthemum

　　　Abstract:ObjectiveTo determine the flavonoid. MethodsUsing macroporous resin column chromatogram, to get 60% ethanol fraction. Using UV spectrum to determine the flavonoid of this part. Results The mean content of the flavonoid was 37.35%. Conclusion The rate of concentration is high and stable, the method of determination is reliable.

　　Key words:Hebei balmy chrysanthemum;  Flavonoid;  Concentrate

    菊花作为药食同源中药，具有疏风清热，平肝明目，解毒，降压之功效［1］。屈原的离骚就有“夕餐秋菊之落英”之句。菊花因其清爽的口感在中国文化中很受欢迎，在人们日常生活中广泛用作保健茶饮。有研究表明［2］，菊花挥发油解热，总黄酮降压，是其疏风清热、平肝明目的物质基础。河北香菊是河北省农科院培育的药用菊花新品种，是目前国内唯一浓香型菊花，其挥发油及总黄酮含量均明显高于其它同类产品，营养保健价值及药用价值均很大，开发前景广阔。故本文对河北香菊总黄酮的富集工艺进行了研究，并采用紫外分光光度法进行了总黄酮含量测定。为河北香菊药用及营养保健价值的进一步开发利用提供科学依据。

　　1  材料与方法

　　1.1  材料

　　紫外分光光度计（日本岛津UV-2201）； D101型大孔吸附树脂（天津市友昌工贸有限公司）；甲醇（分析纯，天津永大试剂公司）；金合欢素-7-O-β-D-葡萄糖苷对照品为本实验室自制（纯度为99.2%）；河北香菊为河北省农科院药植所提供。

　　1.2  方法［3，4］

　　1.2.1  对照品溶液的制备精密称取金合欢素-7-O-β-D-葡萄糖苷对照品5.06 mg,置于50 ml容量瓶中，加入甲醇使之溶解，稀释至刻度摇匀，即得对照品溶液。

　　1.2.2  测定波长的选择取对照品溶液2 ml置于25 ml容量瓶中,定容，摇匀。将溶液加入比色皿中，于200～800 nm波长范围内进行全波长扫描，分别于328，269.3，208 nm有吸收峰。用同样的方法测得供试品溶液分别于328，208 nm有吸收峰。

　　1.2.3  标准曲线的绘制精密吸取上述对照品溶液1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5 ml分别置于25 ml容量瓶中，定容，摇匀，置于比色皿中，于选定的波长下测定吸收值A。用最小二乘法得回归方程，并测定线性范围。

　　1.2.4  总黄酮的富集称取一定质量干燥河北香菊，加入8倍量70%乙醇，于80℃下热回流1.5 h,滤出溶液后，再加入7倍量70%乙醇，于80℃下热回流1.5 h，合并滤液并适当浓缩，将上述浓缩液，滴加到大孔吸附树脂色谱柱上用蒸馏水洗脱，直至流出液Molish反应呈阴性，再用3 000 ml 60%乙醇洗脱（约10个柱体积），收集洗脱液，回收溶剂，并进一步浓缩至干膏，即得70%乙醇提取物经大孔吸附树脂60%乙醇洗脱部位（简称60%乙醇部位）。如此制得3批此干膏。

    精确称取上述干膏4.5 mg，用甲醇制成25 ml溶液，从中精确吸取2.0 ml置于25 ml容量瓶中，用甲醇定容，即得供试品溶液。　1.2.5  方法学验证

    精密度实验：精密吸取对照品溶液2.0 ml置于25 ml容量瓶中，以甲醇定容。于选定波长下，重复5次测定其吸收值。

    回收率实验：精密称取已恒重的上述干膏5份，每份4 mg左右，分别精密加入1 mg左右对照品，按“1.2.4”项方法制备溶液，在选定的波长下测定吸收值，计算平均回收率及RSD。

    重复性实验：精密称取“1.2.4”项制备干膏4.5 mg。按“1.2.4”项制备供试品溶液于选定波长下重复5次测定吸收值 。

    稳定性实验：取同一供试品溶液分别于0，2，4，8，12，24，48 h测定吸收值。

    样品含量测定：精密称取3批，每批3份，按1.2.4项制备的60%乙醇部位干膏，共9份，每份约4.5 mg，并按1.2.4项制备供试品溶液，于选定波长下测定吸收值，计算含量。

　　2  结果

　　2.1  测定波长的选择

　　对照品和供试品的共有吸收峰328 nm为检测波长。

　　2.2  标准曲线和线性范围以对照品质量浓度（X,μg/ml）为横坐标,以吸收值（Y）为纵作标，绘制标准曲线，进行线性回归分析，得回归方程为Y=0.039 60+0.049 51X,r=0.999 2，线性范围2.048～16.192 μg/ml。

　　2.3  精密度实验   

　　取某一浓度对照品溶液，重复测定5次，RSD值为0.36%。

　　2.4  加样回收率实验加样回收率实验结果表明，金合欢素-7-O-β-D-葡萄糖苷对照品的平均回收率为98.32%，RSD为0.57%。结果见表1。表1  加样回收率实验结果（略）

　　2.5  重复性实验

　　重复性实验结果表明，第3批干膏中总黄酮含量为38.10%，RSD为0.13%。

　　2.6  稳定性实验 稳定性实验结果表明，样品溶液在48 h内稳定性良好，RSD值为0.67%。

　　2.7  样品含量的测定3批60%乙醇部位干膏总黄酮含量分别为36.90%，37.28%，37.88%。平均值为37.35%，RSD值分别为0.21%，0.50%，0.89%。结果见表2。表2 样品中总黄酮的含量测定结果（略）

　　3  结论

    本文探讨了60%乙醇部位总黄酮的富集工艺。结果发现，利用大孔吸附树脂富集，60%乙醇洗脱10个柱体积，所得总黄酮含量稳定且富集率较高，降压效果显著。该方法可以推广使用；本文采用紫外分光光度法测定了60%乙醇部位总黄酮含量，该方法精密度高，重现性好，测定结果准确，为此部位的进一步开发利用提供基础性研究。



【参考文献】
  　　［1］贾凌云，孙 毅，王春阳，等.菊花总黄酮提取工艺研究［J］.中药材，2003，26（1）：36.

　　［2］戴 敏，刘青云,李道中，等.菊花解热、降压作用的物质基础［J］.中药材，2001,24（7）：505.

　　［3］刘金旗，吴德林，王 兰，等.菊花中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定［J］.中成药，2001，23（1）：53.

　　［4］彭少平，李 竣，芦金清.正交设计研究金菊花总提物及总黄酮提取工艺［J］.湖北中医学院学报，2002，4（2）：29.