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[药学] 马棘不同提取部位对小鼠镇痛作用的研究

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发表于 2014-8-19 22:05:07 | 显示全部楼层 |阅读模式
【摘要】  目的研究马棘(Indigofera Pseudotinctoria Matsum,IPM)不同提取部位对小鼠的镇痛作用。方法用两种不同提取方法(溶剂萃取法和大孔吸附树脂梯度洗脱分离法)对马棘进行提取,制备样品,通过小鼠醋酸扭体法(acetic acid writhing ,AW)及热板法(hotplate,HP)筛选镇痛有效部位。结果溶剂萃取法(solvent extraction,SX)和大孔吸附树脂梯度洗脱分离法(gradient elution separation with macroporous resin ,MGS)所提取样品均对醋酸引起的小鼠扭体反应有明显的抑制作用;SX提取物镇痛有效物质主要集中在正丁醇部分、石油醚部分、水部分;MGS提取物能明显延长小鼠热板的痛阈时间,其镇痛有效物质主要集中在300 ml·L-1和900ml·L-1的乙醇洗脱部分以及沉淀物部分。结论 马棘对实验小鼠具有明显的镇痛疗效;初步筛选了马棘镇痛作用有效部位的研究方法。

【关键词】  马棘 提取部分 镇痛 有效部位

  Research of Analgsic Effects of Different Extraction Parts from Indigofera Pseudotinctria Matsum in Mice

  Abstract:ObjectiveTo research the analgesic effects of different extraction parts.MethodsThose parts of the IPM were extracted by two means,such as solvent extraction(SX)and gradient elution separation with macroporous resin (MGS). Those utility parts of analgesic effects were optimized by the acetic acid writhing (AW) and hot plate (HP) in mice.ResultsThe writhing responses were inhibited obviously in mice by those extracted samples which from the IPM by the SX and MGS. The main active substance was centralized to n-butanol,petroleum and water fractions. The pain threshold time of hot plate was extended obviously by the MGS extract in mice,its analgesic substance was centralized to 300 ml·L-1,900 ml·L-1elution fractions in alcohol and sediments fractions.ConclusionThe IPM has analgesic effect obviously in experimental mice. A research method has been screened preliminarily for the active position of analgesic effect of the IPM.

  Key words:Indigofera Pseudotinctoria Matsum(IPM);  Extraction parts;  Analgesia;  Effect position

    马棘(Indigofera Pseudotinctoria Matsum ,IPM)为豆科植物马棘的干燥根皮,又名一味药、铁扫帚、马胡梢、野绿豆。含蒎立醇(Pinicol)、黄酮类(Flavona)、酚、鞣质、环烯醚萜类、三萜皂苷类、β-类甾醇以及多种微量元素等[1]。性甘、微苦,平。用于清热利湿、消食除积、祛痰止咳,具有清热解毒之功效,可治疗扁桃体炎、疟疾、疔疮痈肿、烫伤、烧伤等[1,2]。民间用于跌打损伤、风湿痹痛、出血。还有报道马棘具有明显的镇痛作用,并研究了其镇痛有效部位。现报道如下。

  1  材料与方法

  1.1  动物及材料昆明种小鼠,体重18~22 g,由湖北省实验动物中心提供(医动字第21-68号);酮洛芬(ketoprofen,浙江湖州市合成药厂生产,湖北省医药公司经销,050811),吐温-80(上海申隆药业,050712);D101大孔树脂(天津海光化工有限公司);石油醚、醋酸乙酯、正丁醇、乙醇、醋酸均为分析纯,构于湖北省医药公司;马棘皮药材采自湖北省建始县,经鉴定为豆科植物马棘(Indigofera Pseudotinctoria Matsum,IPM)全草的根茎皮。YLS-6B智能热板仪(安徽淮北正华生物仪器设备有限公司制造)。BS110S电子天平(沈阳龙腾电子有限公司生产)。

  1.2  方法

  1.2.1  溶剂萃取法分离样品按文献[4,5]称取马棘皮药材粗粉200 g,加950 ml·L-1乙醇回流提取3次,第1次10倍量溶剂,回流2 h,第2次和第3次8倍量溶剂,回流1.5 h,合并提取液,减压浓缩,回收乙醇至无醇味,得100 ml浓缩液,浓缩液加1倍量水混悬后依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇分别萃取3次,100 ml/次,合并萃取液,回收溶剂得样品石油醚部分8.1 g(A)、醋酸乙酯部分1.8 g(B)、正丁醇部分9.4 g(C)、萃取剩余部分为水部分23.5 g(D)。以254 ml,20 ml·L-1吐温-80溶解,为母液备用。

  1.2.2  大孔吸附树脂梯度洗脱分离样品按文献[4,5]称取马棘药材粗粉200 g,置渗漉器内,800 ml·L-1乙醇浸泡过夜后开始收集渗漉液,至流出液薄层层析(TLC)检测无斑点为止,减压浓缩渗漉液,回收乙醇至无醇味,加1倍量水混悬静置过夜,析出油脂状沉淀物,减压抽滤,得油脂状沉淀物6.4 g(E),滤液浓缩至50 ml,经大孔吸附树脂柱,以蒸馏水、100,300,500,700和900 ml·L-1乙醇水溶液梯度洗脱,经TLC检测,合并相似部分,得水洗脱部分7.8 g(F),100 ml·L-1与300 ml·L-1部分合并为300 ml·L-1乙醇洗脱部分16.4 g(G)、其余部分合并为900 ml·L-1乙醇洗脱部分7.1 g(H)。以1810 ml,20 ml·L-1吐温-80溶解,母液备用。

  1.2.3  醋酸扭体法取小鼠120 只,随机分为12组,每组10只,♂、♀各半。分别ig相应样品液,其方法是:阴性对照组吐温-80(20 ml·L-1)20 g·kg-1,阳性对对照组酮洛芬5 mg·kg-1,样品A120  mg·kg-1,样品B30  mg·kg-1,样品C160 mg·kg-1,样品D480  mg·kg-1,样品E15  mg·kg-1,样品F20  mg·kg-1,样品G 40 mg·kg-1,样品H15  mg·kg-1。给药后1 h,各组小鼠分别ip 6  ml·L-1醋酸溶液10 ml·kg-1,记录小鼠开始扭体时间及5~15 min内扭体次数。

  1.2.4  热板法选痛阈值在5~30 s的雌性小鼠120只,随机分为12组,每组10只。测各鼠痛阈值两次(取均值)后,分别ig相应样品液,其方法是:阴性对照组吐温-80(20 ml·L-1)仍为20 g·kg-1,其他均ig醋酸扭体法中相应样品剂量的4倍。各组ig样品液1,2和3 h分别测定各鼠痛阈值两次(取均值)。

  1.2.5  统计方法所有数据用(±s)表示,用软件SPSS10.0进行方差分析及Dunnett t检验;方差不齐资料,用非参数秩和检验进行组间比较。 2  结果

  2.1  IPM对醋酸引起小鼠扭体反应的影响结果显示:萃取法中石油醚萃取部分、正丁醇萃取部分、水部分,小鼠扭体次数明显少于吐温-80组(阴性对照组)而多于酮络酚组(阳性对照组)(P<0.05或P<0.01);大孔吸附树脂分离法中沉淀物部分、水洗脱部分、300和900 ml·L-1乙醇洗脱部分小鼠扭体次数明显少于吐温-80组(阴性对照组)而多于酮络酚组(阳性对照组)(P<0.05或P<0.01);萃取法中正丁醇萃取部分,小鼠开始出现扭体时间明显迟于吐温-80组而长于酮络酚组(P<0.05或P<0.01)。结果见表1~2。表1  IPM萃取法分离样品对小鼠醋酸扭体反应的影响(略)表2  大孔树脂法分离样品对小鼠醋酸扭体反应的影响(略)

  2.2  IPM对小鼠热板痛阈的影响结果显示,萃取法中水部分组(D/1920)给药后1,2及3 h痛阈显著高于吐温-80组和酮络酚/20组(P<0.05,P<0.01);大孔吸附树脂分离法中E/60和H/60及G/160组药后3 h痛阈明显高于吐温-80组和酮络酚/20组(P<0.05或P<0.01)。结果见表3~4。表3  IPM萃取法分离样品对小鼠热板法痛阈的影响(略)表4  大孔树脂法对小鼠热板法痛阈的影响(略)

  3  讨论

    马棘又名一味药,生于海拔1130~1300 m的山坡林缘及灌木丛中,广泛分布于我国江苏、湖北、广西、四川等地。主要成分有蒎立醉(Pinicol)、黄酮类(Flavona)、酚、鞣质、环烯醚萜类、三萜皂苷类、三萜皂苷类、β-类甾醇以及多种微量元素等。具有清热解毒之功效,可治疗扁桃体炎、疟疾、疔疮痈肿、烫伤、烧伤等[1,6]。民间用于跌打损伤、风湿痹痛、出血。还有报道马棘具有抗氧化、抗衰老、清除氧自由基作用[2,3]。本研究发现马棘提取成分具有明显的镇痛作用。为进一步明确其作用机制及化学成分与药效之间 的相关性,本研究通过化学分离方法将马棘主要化学组分分成几部分,筛选有效部位予以阐明其作用机制。现就其结果讨论如下:

  3.1  马棘不同溶剂提取部位与药效的关系本研究对马棘醇提取物水混悬后,用不同极性溶剂由小到大依次萃取得脂溶性组分(石油醚部分)[4,7],环烯醚萜类(醋酸乙酯部分)[4],黄酮类及苷类(正丁醇部分)[5,8],水部分(糖类)。各样品药效试验结果表明,黄酮类及苷类可明显延长扭体反应初始出现时间,明显的抑制由醋酸引起的小鼠扭体反应,但对热刺激性疼痛影响甚微;石油醚萃取部分和水部分可减少小鼠扭体次数,其中水部分分组明显提高了热刺激在3 h时引起的疼痛阈值;醋酸乙酯萃取部分抑制疼痛作用不明显。其原因:一者可能是各组分含有不同化学成分而导致药效不同所致,也可能是萃取不完全,组分间还有类似化学成分而所致;二者可能是药理试验方法本身存在误差,尤其是热板法,误差较大,出现假阳性率高[4,9]。

  3.2  马棘两种提取方法比较大孔吸附树脂洗脱分离法具有选择性好、吸附容量大、吸附迅速及解吸容易等优点,适宜大规模的中药现代化生产[4,10]。本研究对溶剂萃取法和大孔吸附树脂分离法分离的样品通过TLC鉴别发现,后者沉淀物部分、900 ml·L-1乙醇洗脱部分、300 ml·L-1乙醇洗肿部分、水洗脱部分组分分别与前者石油醚部分、醋酸乙酯部分、正丁醇部分、水部分相似。研究结果显示,两种提取方法中除热板法实验结果差异较大外,其他各组分对小鼠扭体反应实验结果基本一致,其原因有待于进一步研究。

  3.3  马棘有效部位筛选法本研究用中药化学提取分离手段与药理实验密切结合,方法快速、简捷,结果可靠,初步完成了马棘镇痛有效部位的筛选,通过药效实验初步确定了马棘化学成分分离,为进一步研究其镇痛有效单体及镇痛机制奠定了基础。

【参考文献】
    [1]杨海涛,李志洲.铁扫帚中主要有效成分的分析[J].宝鸡文理学院学报,2006:26(3):204.

  [2]李星彩,杨海涛.铁扫帚中微量元素的测定[J].微量元素与健康研究,2006,23(2):68.

  [3]杨海涛,李志洲,李星彩.铁扫帚中总多糖提取工艺的研究[J].氨基酸和生物资源,2005,27(4):78.

  [4]林天慕,顾 宜,方坤泉,等.藏药独一味两种方法提取组分对小鼠镇痛作用的影响[J].第四军医大学学报,2003,24(5):444.

  [5]孙文基.天然药物成分提取分离与制备[M].天津:中国医药科技出版社,1999:207.

  [6]张永利,朱伟英.马棘皮的生药鉴定[J].中药材,2001,24(1):28.

  [7]洪鼎桥.铁扫帚应用二则[J].中国民间疗法,2002,10(3):60.

  [8]Liang ZD .Studies on Tibetan medicinal herb Du-Yi-Wei Lamiophlomis rotate (Benth.) kudo[J].Lanzhou Yixueyuan Xuebao (J Lanzhou Med Col),1987,40(2):47.

  [9]Pinsky C,Dua AK,Labella FS,Petidase inhibitors reduce opiate narcotic withdrawal signs,including seizure activity in the rat[J].Brain Res 1982,243:301.

  [10]Maestroni GJM,Conti A,Beta-endorphin and dynorphin mimic the circadian immuoenhancing and anti-stress effects of melalonin[J].Int J Immunophrmaoo,1989,11:333.

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海!外直播 abre.ai/9bbb 禁闻视频 v.ht/sssf 前天看了一份调查CCTV在全国的收视率,东三省最高87%,然后依次下降到广东的5%。我看得笑起来了,活脱脱的一个经济倒排序,看得越多脑子越残!不如看这个..  发表于 2022-10-13 17:06
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