平喘宁颗粒中黄芩苷的含量测定

amy54321 · 发表于 2014-8-19 22:07:31

【摘要】  目的建立平喘宁颗粒中黄芩苷的含量测定方法，制定该制剂的定量质控标准。方法以甲醇4%磷酸水溶液（55∶45）为流动相，检测波长为280 nm。结果测得黄芩苷的线性范围为12.25～125.2 μg/ml ，r=0.999 9,平均回收率为98.8%，RSD为1.43%。结论建立了本制剂中黄芩苷的含量测定方法，该法具有准确、灵敏、专属性强，重现性好，无明显干扰等优点，是控制该品内在质量的较理想方法。

【关键词】  平喘宁颗粒高效液相色谱黄芩苷

平喘宁颗粒是由黄芩、白果、地龙、桑白皮等10味中药组成的中药复方制剂，为正在研制的中药新药，本方具有清热平喘、止咳化痰之功效，对支气管哮喘、喘息型支气管哮喘、肺气肿等多种呼吸道疾病具有很好的疗效。黄芩为本方中的君药，为控制本品的内在质量，制订定量质控标准，参考相关文献［1～4］，按中药新药申报的技术要求，研究制定了该药物的含量测定方法。现报道如下。

　　1  仪器与试药

高效液相色谱仪（泵：美国Waters 510，Waters 2487检测器）。色谱柱为日本岛津公司shimpack CLCODS,6.0 mm×150 mm，超纯水（millipore公司纯水器），所用甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯，黄芩苷对照品购于中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号为07159909。

　　2  方法与结果

　　2.1  样品溶液的制备

　　2.1.1  供试品溶液的制备取装量差异项下的本品适量，研细，取0.5 g，精密称定，加70%乙醇40 ml，加热回流2 h，放冷，滤过，滤液置100 ml量瓶中，用少量70%乙醇洗涤滤纸和残渣于量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

　　2.1.2  对照品溶液的制备取在60℃减压干燥4 h的黄芩苷对照品适量于50 ml量瓶中，精密称定为15.65 mg，加甲醇使溶解，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液，其浓度为0.313 mg/ml；精密量取对照品储备液2 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液，其浓度为62.6 μg/ml。

　　2.1.3  黄芩药材溶液的制备取黄芩药材中粉0.3 g，精密称定，加70%乙醇40 ml，加热回流3 h，放冷，滤过，滤液置100 ml量瓶中，用少量70%乙醇洗涤滤纸和残渣，加70%乙醇至刻度，摇匀，精密量取1～10 ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，作为黄芩药材溶液。

　　2.1.4  缺黄芩空白溶液的制备按处方比例准确称取除黄芩以外的其它各味药材，模拟本品的制备工艺和供试品溶液的制备方法，制成缺黄芩空白溶液。

　　2.2  色谱条件与系统适用性实验色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为柱填充剂（日本岛津公司 Shimpack CLCODS柱，6.0 mm×150 mm）；甲醇0.4%磷酸水溶液（55∶45）为流动相；流速1.0 ml/min；检测波长280 nm；温度为室温；理论塔板数按黄芩苷计算不应少于2 000。

　　2.3  含量测定

　　2.3.1  最大吸收波长的选择分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，在200～400 nm范围内检测。结果表明，对照品溶液、供试品溶液均在280 nm处有相同的最大吸收峰，故检测波长确定为280 nm。

　　2.3.2  空白干扰实验分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液与缺黄芩空白溶液各10 μl，注入液相色谱仪，在280 nm处检测，结果表明黄芩苷对照品溶液和供试品溶液在该波长处均有最大吸收峰，而缺黄芩空白溶液在该波长处未见明显色谱峰出现（见图1），表明本测定无明显干扰。

　　2.3.3  线性关系考察精密吸取上述对照品储备溶液适量，用甲醇配制成浓度分别为12.52，31.3，62.6，93.9，125.2 μg/ml的溶液，精密吸取以上对照品溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积积分值，结果见表2。以峰面积积分值（A）为纵坐标，黄芩苷进样量（μg/ ml）为横坐标，绘制标准曲线，结果进样量在12.25～125.2 μg/ml范围内线性关系良好，对所得数据进行回归分析，得回归方程y=110 884x-28 837，相关系数r=0.999 9。表1  线性关系考察结果（略）　2.3.4  精密度实验精密吸取供试品溶液10 μl，连续进样5次，测定峰面积积分值，计算精密度，结果供试品5次测定的RSD为1.15%，表明精密度良好。

　　2.3.5  稳定性实验精密吸取供试品溶液10 μl，每隔2 h进样测定1次，共进样测定5次，其峰面积积分值在测定时间8 h内基本不变，供试品5次测定的RSD为2.25%，表明稳定性良好。

　　2.3.6  重复性实验取同一批样品（20050807）6份，按含量测定项下，依法测定黄芩苷的含量，结果6次测定的平均含量为17.15 mg/g，其RSD为1.52%，表明重现性良好。2.3.7  回收率实验取同一批样品（20050807），共取5份，分别加入黄芩苷4.05 mg（配成浓度为1.35 mg/ml的溶液，准确加入3 ml），按以上方法测定样品中黄芩苷的含量，并计算回收率，结果5次测得的平均回收率为98.82%，RSD为1.43%。结果见表2。表2  回收率实验结果（略）

　　2.3.8  样品测定分别精密吸取对照品溶液与3批供试品溶液各10 μl ，注入液相色谱仪，测定，并计算各批样品中黄芩苷的含量。结果见表3。表3  3批样品中黄芩苷的含量测定结果（略）

　　2.3.9  3批黄芩药材中黄芩苷的测定按《中国药典》2005年版（Ⅰ部）第211页中黄芩中黄芩苷的含测方法对3批黄芩药材进行了测定，结果各批黄芩药材中黄芩苷的含量均符合《中国药典》2005年版（Ⅰ部）对黄芩苷含量不应低于8.0%的规定（本研究所用黄芩中黄芩苷含量为11.0%）。各批样品的测定结果见表4。表4  3批黄芩药材中黄芩苷的含量测定结果（略）

　　3  讨论

通过方法学的系统考察和3批样品的含量测定，建立了平喘宁颗粒中黄芩苷的HPLC含量测定方法，测得3批样品中黄芩苷的含量分别为 17.93，16.32，17.06 mg/g，样品回收率为98.82%，RSD为1.43%。

本含量测定中供试品溶液的制备，采用70%乙醇提取液直接点样测定，该法具有简便、准确、灵敏度高、专属性强，重现性好，无明显干扰等优点，是控制本品内在质量的理想方法。同时也可作为其它制剂中相同成分测定的参考。

【参考文献】
  　　［1］傅桂兰.HPLC法测定黄芩及复方制剂中黄芩甙的含量［J］.中国中药杂志，1994，19(12)：731.

　　［2］郭平，李章万，蒋学华，等.HPLC测定12种中药制剂中黄芩甙含量［J］.药物分析杂志，1995，15(5)：13.

　　［3］成永武，薛杉春，冯中平，等.高效液相色谱法测定喉痹冲剂中黄芩甙的含量［J］.中成药，1994，16(9)：51.

　　［4］王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究［M］.北京：中国医药科技出版社，1994：226，260，276.

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