睡莲花总酚酸超声提取工艺研究

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【摘要】  目的以药材中总酚酸含量为评价指标，优选维药睡莲花超声提取最佳工艺。方法单因素实验考察乙醇浓度、料液比、超声提取时间、超声次数，超声功率对药材中总酚酸含量的影响，并通过正交实验确定最佳提取条件。结果乙醇浓度、料液比、超声提取时间对总酚酸的提取率有显著影响。结论超声提取维药睡莲花中酚酸类化合物的最佳提取工艺条件为：乙醇浓度70%,料液比1∶20,超声功率30W，提取时间40 min。

【关键词】  睡莲花 酚酸 超声提取 正交试验

　　Study on Ultrasonic Extraction Technologies of Nymphaea candida Presl.

　　Abstract:ObjectiveTo optimize the ultrasonic extraction condition for Nymphaea candida Presl.. MethodsOptimized conditions (ethanol concentration，materia/extraction solution ratio，ultrasonic time and extraction times) were determined by the single factors experiments and orthogonal test.ResultsThe remarkable factors to affect the extraction of total phenolic acids in Nymphaea candida Presl. were ethanol concentration，materia/extraction solution ratio，ultrasonic time.ConclusionThe optimum extraction conditions of total phenolic acids were：70% ethanol，materia/extraction solution ratio 1∶20，ultrasonic time 40minutes.

　　Key words:Nymphaea candida Presl.；  Phenolic acid；  Ultrasonic extraction；  Orthogonal test

    维药睡莲花为睡莲科(Nymphaeceae)植物雪白睡莲Nymphaea candida Presl.的干燥花，具有清热解毒、镇静安神的作用。主要用于小儿急、慢惊风，热症引起的头痛、热感、咳嗽。在维吾尔民间用药历史悠久，是维吾尔医常用的单方或复方抗病毒药中的主要成分［1,2］。国外学者研究发现其同属植物含有多种酚类化合物，我们通过化学成分研究发现维药睡莲花中也含有酚类化合物。酚类化合物的生物活性广泛而温和，具有抗菌、消炎、抑制血小板聚集、抗凝及血栓形成等作用［3,4］。本研究采用单因素实验及正交实验法考察乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数对维药睡莲花总酚酸超声提取效果的影响，以确定其最佳超声提取条件，从而为合理开发利用维药睡莲花资源提供科学依据。

　　1  材料与仪器

　　1.1  材料与试剂

　　睡莲花产自新疆阿克苏，提取前先进行晒干、粉碎处理；没食子酸对照品（由中国药品生物制品鉴定所提供，批号：110831－200302），其余试剂均为分析纯。

　　1.2  仪器

　　紫外分光光度仪（SHMADZU，UV-2501PC），电子天平（Sartorliux），超声提取仪（天津奥特赛恩斯仪器有限公司，AS10200BDT），真空干燥仪(上海精宏仪器设备有限公司，DZF-6050型)。

　　2  方法与结果

　　2.1  标准曲线制备精密称取没食子酸对照品7.5 mg置于50 ml容量瓶中，加入甲醇溶解稀释至刻度作为储备液，吸取3.5 ml于25 ml容量瓶中，加入甲醇稀释至刻度配制成21.0 μg/ml对照品溶液。精密吸取对照品溶液 0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml，分别置于25 ml容量瓶中，加入甲醇5.0 ml，0.3%十二烷基硫酸钠2.0 ml，0.6%三氯化铁与0.9%铁氰化钾混合液（1∶0.9）1.0ml，暗处放置5min，再加入0.1 mol/L HCl稀释至刻度，暗处放置20 min，显色剂作空白在最大吸收波长720 nm处测定吸收度，其回归方程为：Y=0.355 6X+0.144 6，相关系数r=0.999 4。

　　2.2  超声条件下不同因素对酚酸类化合物提取率的影响

　　2.2.1  乙醇浓度对酚酸类化合物提取率的影响

　　在5 g药材粉末中，分别加入15倍量50%，60%，70%，80%，90%乙醇超声提取，超声温度为20℃，超声时间为15 min,超声频率为40 Hz，超声功率为30 W超声处理，考察乙醇浓度对睡莲花总酚酸提取率的影响。结果见图1。

    由图1可以看出，随着乙醇浓度的升高，维药睡莲花总酚酸提取率呈上升趋势，乙醇浓度在70％时提取率最高。但当浓度进一步增加，提取率反而降低。

　　2.2.2  乙醇用量对酚酸化合物提取率的影响

　　在5 g药材粉末中，分别加入70%乙醇40，60，80，100，120 ml超声提取，超声温度为20℃，超声时间为15 min，超声频率为40 Hz，超声功率为30 W超声处理，考察乙醇用量对酚酸类化合物提取率的影响。结果见图2。

    由图2可以看出维药睡莲花中总酚酸的提取率随溶剂用量的增加而增加，乙醇用量在20倍时提取率最高。但当溶剂用量进一步增加，提取率反而降低。　　2.2.3  提取时间对酚酸类化合物提取率的影响

　　在5 g药材粉末中，分别加入15倍量70％乙醇，超声温度为20℃，超声频率为40 Hz，超声功率为30 W分别超声处理10，20，30，40，50 min，考察超声提取时间对睡莲花总酚酸提取率的影响。结果见图3。

　　从维药睡莲花总酚酸的提取效果（图3）看，随着提取时间从10 min到60 min，提取开始阶段，总酚酸的提取率随提取时间的延长而增加较快，在40 min时达最高；提取后期提取速度逐渐减慢，提取率呈下降趋势。

　　2.2.4  超声功率对酚酸类化合物提取率的影响在5g药材粉末中，加入15倍量70%乙醇，超声温度为20℃，超声时间为30 min，超声频率为40 Hz，超声功率分别为30，90，150，210，270 W超声处理，考察超声功率对睡莲花酚酸类化合物提取率的影响。结果见图4。

    图4表明，在频率、时间和温度固定时，超声波的电功率对维药睡莲花总酚酸的提取率影响不大。

　　2.2.5  提取次数对酚酸类化合物提取率的影响

　　在5 g药材粉末中，分别加入15倍量70％乙醇，超声温度为20℃，超声时间为30 min，超声频率为40 Hz，超声功率为30 W，超声处理1，2，3，4，5次，考察提取次数对睡莲花总酚酸提取率的影响。结果见图5。

    由图5可以看出维药睡莲花中总酚酸的提取率随提取次数的增加而呈上升趋势。

　　2.2.6  正交实验通过以上单因素，进行正交实验，以获取最佳提取工艺。见表1。表1  超声提取维药睡莲花总酚酸L9(34)正交实验因素水平（略）

    通过正交实验可以得到维药睡莲花中总酚酸的最佳提取工艺为A2B3C3，即：20倍量的70％乙醇超声提取40 min。

　　2.3  不同提取方法提取率比较

　　2.3.1  水煎煮法称取药材粉末5 g，加入20倍水煎煮两次，40 min/次，提取液合并、浓缩、干燥。按“2.1”项下的方法测定药材中总酚酸含量为0.21%。

　　2.3.2  回流提取法称取药材粉末5 g，加入20倍70%乙醇回流提取两次，40 min/次，提取液合并、浓缩、干燥。按“2.1”项下的方法测定药材中总酚酸含量为0.44%。

　　2.3.3  超声提取法称取药材粉末5 g，加入20倍70%乙醇超声提取2次，40 min/次，提取液合并、浓缩、干燥。按“2.1”项下的方法测定药材中总酚酸含量为1.0%。

　　3  讨论

    本文研究了维药睡莲花总酚酸的提取工艺，单因素及正交实验结果显示乙醇浓度、乙醇用量及超声提取时间对超声提取酚酸类化合物有显著影响，同时确定了提取条件的最佳组合应为A2B3C3，即乙醇浓度为70％，料液比为20倍，超声功率30 W，提取时间为40 min。

    与传统的提取方法比较，超声提取法明显优于水煎煮法和回流提取法。水煎煮法和回流提取法需要加热、费时，而超声提取法操作简单、省时，提取效率高。

【参考文献】
  　　［1］刘勇民.维吾尔药志，上册［M］.乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社,1994：541.

　　［2］新疆植物志编辑委员会.新疆植物志，第2卷［M］.乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1992：222.

　　［3］吴寿金，赵 泰，秦永祺.现代中草药成分化学［M］.北京：中国医药科技出版社，2002：135.

　　［4］齐 典，金哲雄.植物多酚在保健食品方面的应用［J］.黑龙江医药，2006，19（2）：120.