维药白刺总黄酮对亚急性衰老模型小鼠抗氧化作用的研究

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【摘要】  目的考察唐古特白刺果总黄酮对衰老模型小鼠氧化能力的影响。方法用D-半乳糖制备衰老模型小鼠，以酶标法测定小鼠血清和肝组织中MDA,SOD,GSH-PX指标的变化。结果白刺果中总黄酮能显著降低衰老小鼠血清和肝组织MDA水平，同时可提高SOD和GSH-PX活力水平。结论唐古特白刺果总黄酮具有抗氧化作用。

【关键词】  唐古特白刺 总黄酮 抗氧化

　　Research on the Anti-oxidative Effect of Total Flavonoids of Uighur Medicine's Nitraria tangutorun Bobr.  in Subacute Aging Model Mice

　　Abstract：ObjectiveTo study the effect of anti-oxidative in subacute aging model mice with total flavonoids of Uighur medicine's Nitraria tangutorun Bobr.MethodsThe aged mice were induced by ip D(+)-galactose for 8 weeks. Determined malondialdehyde (MDA) superoxide dismutase (SOD) , glutathione peroxidase (GSH-PX) in the mice's serum and Hepar with model 680 Microplate Spectrophotometer. ResultsTotal flavonoids of Uighur medicine's Nitraria tangutorun Bobr. not only had significant inhibition effect on MDA levels but also increased the ratio of SOD activity and GSH-PX activity.ConclusionThe total flavonoids of Uighur medicine's Nitraria tangutorun Bobr. has good anti-oxidative effect.

　　Key words：Nitraria tangutorum Bobr;  Total flavonoids;  Anti-oxidative effect

    D-半乳糖致小鼠亚急性衰老模型因其衰老变化明显,模型稳定,在抗衰老研究中被广泛应用［1］。一般认为,D-半乳糖引起的代谢紊乱使机体过氧化反应增强是其致老化反应的重要因素。唐古特白刺Nitraria tangutorun Bobr.为中国特有种,是蒺藜科典型的旱生荒漠植物，具有耐干旱，耐盐碱，能适应高温低寒的特点。唐古特白刺资源丰富，分布广泛，是新疆防风固沙的优良野生树种［2］。唐古特白刺的果实在新疆作为维吾尔民间药物入药，具有健脾胃、调经活血、降压等作用。常用于治疗消化不良、月经不调和高血压、头晕等疾病，临床证明疗效确切，无毒副作用。近年来对唐古特白刺的研究报导很多，但对其药理作用的研究甚少，仅见有关白刺果实有降血脂和抗氧化作用的报道［3］，果实中化学成分繁多复杂，到底哪种成分起效尚不清楚，因此，为了深入研究民族药，并为维药白刺的充分开发利用提供科学依据，本文研究了维药白刺总黄酮对衰老模型小鼠氧化能力的影响。现报道如下。

　　1  材料与方法

　　1.1  药品

　　1.1.1  白刺果总黄酮提取与制备唐古特白刺果（石河子大学生命科学学院阎平教授鉴定为Nitraria tangutorun Bobr.），采自新疆北部地区。样品采集后自然晾干，机械粉碎，过20目筛后备用。称取白刺果粗粉适量，置圆低烧瓶中，以料液比1∶7加入80％的乙醇，水浴加热回流2 h，重复提取4次，合并提取液并浓缩至浸膏。用碱溶解酸沉淀法制得白刺总黄酮样品。

　　1.1.2  阳性对照药维生素E胶丸（上海中洋海洋生物工程股份有限公司，批号050902）。

　　1.1.3  亚急性衰老模型药D（+）半乳糖（国药集团化学试剂有限公司，批号F20050711）。

　　1.2  试剂与仪器SOD试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号20051108）；MDA试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号 20051221）；GSH-PX试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号20051111）；蛋白定量测试盒（南京建成生物工程研究所,批号20051220 ）；Model 680酶标仪（美国BIO-RAD公司）；TDL-5000低温冷冻离心机 （上海安亭科学仪器厂）；Puffer Hubbard超低温冰箱 （美国HARRIS 公司）；XW-80A旋涡混合器（上海精科实验有限公司）；电热恒温水浴锅 （北京泰克仪器有限公司）；TN型托盘式扭力天平（上海第二天平仪器厂）。

　　1.3  动物分组与处理健康昆明小鼠96只(石河子大学实验动物中心提供)，体重(25±5)g，雌(♀)雄(♂)各半，喂养普通饲料适应1周后,空腹称重，眼底静脉采血测血清MDA后随机分为6组，每组16只，♀♂各半。组间体重、血清MDA水平无明显差异。6组分别是正常组〔腹腔注射(ip)生理盐水+灌胃(ig)蒸馏水〕，衰老模型组〔ip D（+）半乳糖200 mg/kg+ ig蒸馏水〕，低剂量组〔ip D（+）半乳糖200 mg/kg + ig白刺果总黄酮50 mg/kg〕，中剂量组〔ip D（+）半乳糖200 mg/kg + ig白刺果总黄酮100 mg/kg〕，高剂量组〔ip D（+）半乳糖200 mg/kg + ig白刺果总黄酮200 mg/kg〕，阳性对照组〔ip D（+）半乳糖200 mg/kg + ig维生素E100 mg/kg〕。

　　1.4  标本采集本实验用昆明小鼠ip D（+）半乳糖造成衰老模型，ip D（+）半乳糖后6周，模型组小鼠血清MDA高于正常对照组，但无统计学意义；当时间增至8周后，血清MDA明显高于正常，两组数据比较有显著意义，故实验时间定为8周。8周后取材，所有小鼠于取材前1 d停饲料，并禁食12 h，乙醚麻醉，眼底静脉取血，颈椎脱离处死，取肝脏，制备血清及肝匀浆，储存于-20℃备用。

　　1.5  统计方法采用SPSS12.0软件处理，实验数据以±s表示，多组间比较用方差分析，两均数比较用t检验。

　　2  结果

　　2.1  白刺果总黄酮对实验性衰老模型小鼠肝系数的影响小鼠造模8周后,各给药组与模型和正常对照组的肝系数虽有差别，但各组之间比较,经统计学分析无显著性差异 (P>0.05) 。见表1。表1  白刺果总黄酮对实验性衰老模型小鼠肝系数的影响（略）

　　2.2  白刺果总黄酮对衰老模型小鼠血清和肝组织脂质过氧化物MDA含量的影响MDA 常常可反映机体内脂质过氧化的程度，间接地反映出细胞损伤的程度。血清MDA测定数据显示：模型组血清脂质过氧化物MDA含量比正常饲料组有明显增高(P<0.001)，阳性对照组及高、中剂量组均能明显降低血清MDA水平，与模型组比较均有显著性意义(P<0.01)；低剂量组血清MDA与模型组比较有所降低，但无统计学意义（P>0.05）；肝组织MDA测定数据显示：模型组肝组织MDA含量造模后比正常饲料组MDA有极明显增高(P<0.001)，而阳性对照组、高剂量组、中、低剂量组均能明显降低肝组织MDA水平，与模型组比较均有显著意义(P<0.01)。见表2。表2  白刺果提取物对实验性高脂模型大鼠MDA的影响（略）

　　2.3  白刺果总黄酮对衰老模型小鼠血清和肝组织超氧化物歧化酶（SOD）含量的影响SOD对机体的氧化和抗氧化平衡起着至关重要的作用。血清SOD测定数据显示,模型组血清SOD含量造模后比正常饲料组有极明显降低(P<0.001),阳性对照组及高、中剂量组均能明显升高血清SOD活力水平，与模型组比较均有显著统计学意义(P<0.05)，低剂量组血清SOD与模型组比较有所升高，但无统计学意义（P>0.05）；肝组织SOD测定数据显示：模型组肝组织SOD含量造模后比正常饲料组SOD有明显增高(P<0.001),而阳性对照组、高剂量组均能明显升高肝组织SOD活力水平,与模型组比较均有显著意义(P<0.01)，中剂量组虽没有阳性对照组作用强，但与模型组比较具有显著性差异(P<0.05)，低剂量组作用与模型组比较，虽有所升高，但无统计学意义。见表3。表3  白刺果总黄酮对衰老模型小鼠SOD活力的影响（略）

　　2.4  白刺果总黄酮对衰老模型小鼠血清和肝组织GSH-PX含量的影响GSH-PX是机体内广泛存在的一种重要的催化过氧化氢分解的酶。它特异的催化还原型谷胱甘肽（GSH）对过氧化氢的还原反应，可以起到保护细胞膜结构和功能完整的作用。血清GSH-PX测定数据显示:模型组血清GSH-PX含量造模后比正常饲料组有极明显降低(P<0.001)，阳性对照组及高剂量组均能明显升高血清GSH-PX水平，与模型组比较均有显著意义(P<0.001)，中剂量组虽没有阳性对照组作用强，但与模型组比较具有显著性差异(P<0.05)，低剂量组作用与模型组比较，虽有所升高，但无统计学意义；肝组织GSH-PX测定数据显示:模型组肝组织GSH-PX含量造模后比正常饲料组GSH-PX有明显降低(P<0.001)，而阳性对照组、高、中剂量组均能明显升高肝组织GSH-PX活力水平，与模型组比较均有极显著意义(P<0.001)，低剂量组作用与模型组比较，虽有所升高，但无统计学意义。见表4。表4  白刺果总黄酮对衰老模型小鼠GSH-PX的影响（略）

　　3  讨论

    在模型形成期间，可以逐渐观察到模型组小鼠的皮毛，活动状态与正常组及其它组的区别。模型组小鼠的皮毛颜色暗淡，有掉毛的倾向，并且活动迟缓。一般认为给小鼠连续注射D-半乳糖后,因其代谢产物半乳糖醇不能进一步代谢而堆积在细胞内,导致细胞肿胀,致使小鼠组织细胞出现衰老时的退行性改变以及功能的改变［4～10］，同时D-半乳糖在体内氧化产生的大量自由基超过机体的清除能力,引发脂质过氧化的链式反应,并且过氧化脂质(LPO)的分解终产物(如MDA)可与DNA,RNA蛋白质、磷脂等物质结合,损伤细胞膜,引起神经系统的功能障碍［12，13，18，19］。通过检测小鼠血清、肝组织MDA，SOD，GSH-PX的水平，得出模型组的MDA水平显著升高，SOD，GSH-PX活力水平显著降低。    实验证明,高剂量组与阳性对照组比较，小鼠中血清、肝组织MDA降低、SOD，GSH-PX的活力升高；中剂量组与阳性对照差别有的不是很显著，提示在进一步的研究时剂量可以以中剂量组的数据做参考进行相关数据换算［11，14～17］。低剂量组虽没有阳性对照组作用显著，但与模型组比较也可以降低小鼠中血清、肝组织MDA、升高小鼠中血清、肝组织SOD，GSH-PX的活力。因而推测白刺总黄酮可能通过提高机体内SOD和GSH-PX活性,增强其对自由基的清除能力,抑制脂质过氧化，降低体内MDA的生成,从而起到保护机体组织的作用，同时达到延缓衰老的目的［20］。

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