胃炎灵胶囊对慢性萎缩性胃炎模型大鼠胃腺分泌功能影响的研究

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【摘要】  目的检测胃炎灵胶囊对慢性萎缩性胃炎模型大鼠胃蛋白酶活性及胃液总酸和游离酸含量的影响。方法采用综合法成功复制CAG动物模型。施药治疗后分别对各组大鼠胃蛋白酶活性及胃液总酸和游离酸含量进行检测。结果与空白组比较，模型组大鼠胃组织胃蛋白酶活性、胃液总酸和游离酸含量显著下降（P<0.01；P<0.01；P<0.01）；与模型组比较，胃炎灵胶囊可显著提高胃蛋白酶活性（P<0.05）、显著升高胃液总酸含量（P<0.05）和游离酸含量（P<0.05），且以胃炎灵胶囊大剂量组作用显著。结论胃炎灵胶囊具有促进胃酸分泌及提高胃蛋白酶活性的作用。

【关键词】  胃炎灵胶囊 胃蛋白酶 胃液 总酸 游离酸

　　Effect of Weiyanling Capsule on the Function of Externalization in Gastric Tissue of Rats with Chronic Atrophic Gastritis

　　Abstract:ObjectiveTo study the effects of Weiyanling Capsule(WYL)on the activity of pepsinum in gastric tissue and the contents of acidum and free acid in gastric juice in rats with chronic atrophic gastritis.MethodsModel of chronic atrophic gastritis was established with synthetic method. The effects of WYL on the activity of pepsinum in gastric tissue and the contents of acidum and free acid in gastric juice were observed.ResultsIn successful model group, activity of pepsinum and content of acidum and free acid were much lower than those of normal group(P<0.01<0.01<0.01).Compared with model group, WYL could increase the activity of pepsinum and the contents of acidum and free acid (P<0.05<0.05<0.05) significantly.Conclusion WYL has functions of promoting gastric acid secretion and pepsinum activity.

　　Key words:Weiyeiling capsule（WYL）;  Pepsinum;  Gastric juice;  Acidum;  Free acid

    慢性萎缩性胃炎（chronic atrophic gastritis，CAG）是以胃黏膜变薄，上皮细胞变性，固有膜炎性反应和固有腺体萎缩为其病理特点的消化系统常见病。其发病率高，病情复杂，尤其伴有不典型增生和肠上皮化生时，是胃的癌前状态中最常见的一类，CAG已成为极受医学界重视的疑难杂症。胃炎灵胶囊是我省中医名家周信有教授的临床效方成果，在治疗CAG中疗效显著，故本课题小组通过动物实验观察胃炎灵对胃蛋白酶活性及胃液总酸和游离酸含量的影响，探讨其防治CAG的作用机制。

　　1  材料

　　1.1  动物采用Wistar大鼠64只，体重（180±20）g，雌雄各半，标准饲料喂养（动物及饲料均由兰州大学医学实验中心提供，医动字第14-006号）。

　　1.2  器材胃炎灵胶囊：由兰州石油化工总医院制剂室制备（0.4 g/粒胶囊）；维霉素，山东鲁北药业有限公司，批号040404；考马斯亮兰蛋白测定试剂盒，批号20050919；胃蛋白酶（PPS）测试盒，批号20050919（南京建成医学生物研究所提供）；吲哚美辛肠溶片，山西临汾云鹏药业有限公司，批号20050101；脱氧胆酸钠，中国医药公司上海化学试剂采购供应站，批号66-01-21；氨水（分析纯），郑州市德公化学试剂厂，批号20050226；NaOH，广东汕头市红卫化工厂，批号911001；酚酞，莱阳市双双化工有限公司，批号20020506；冰醋酸（乙酸）（分析纯），广东汕头市西陇化工厂，批号0502161；生理盐水，四川科轮药业股份有限公司，批号050720；乌拉坦，中国曹杨第二中学化工厂，批号830602。

    紫外分光光度计，规格型号UV-9100，北京瑞利分析仪器公司；酸度计，规格型号PHS-29A型，上海雷磁仪器厂；台式离心机，规格型号TGL－166，上海安亭科学仪器厂；数显恒温水浴锅，规格型号HH-4，郑州杜甫仪器厂。

b　　2.1  动物分组及造模将实验动物体重编号，用随机数字表法设空白对照组外（空白对照组正常饲养，不予造模，每日给予等量生理盐水灌胃刺激因素）。其余大鼠参考姒健敏造模方法［1］略加改进，建立大鼠慢性萎缩性胃炎动物模型:40％酒精，于每周一空腹灌胃1次，每次8 ml/kg；20 mmol/L去氧胆酸钠灌胃，每日上午1次，每次8 ml/kg；0.05％～0.1％氨水作为大鼠日常饮用水自由饮用，并记录每日饮用量；0.05％吲哚美辛灌胃，每日下午1次，每次8 ml/kg；并配以饥饱失常；连续90 d后（每10 d测体重1次），经随机杀检提示慢性萎缩性胃炎动物模型复制成功，再将模型动物按照随机数字表法分为模型组、胃炎灵大剂量组、胃炎灵小剂量组、维霉素组。

　　2.2  给药及饲养从第91天开始各组大鼠灌胃给药治疗。测定动物体重，计算给药量，以后每10 d测体重1次，以便调整药量。等效剂量以成人常规剂量按人与动物体型系数折算［2］：即胃炎灵大剂量组（1.2 g/kg ，相当于60 kg 重成人每日临床用量的10倍）、胃炎灵小剂量组（0.3 g/kg，相当于 60 kg重成人每日临床用量的2倍）分别按2ml/次 灌胃；维霉素组（0.2 g /kg，相当于 60 kg 重成人每日临床用量的5倍），2 ml/次灌胃；模型组每日给予2 ml生理盐水，各组灌胃1次/d，连续45 d。

　　2.3  标本采集与处理CAG造模成功并治疗后，各组动物于末次灌胃给药后，禁食不禁水24 h，测体重作记录后，全部杀检。
   
　　胃液收集检测：大鼠用乌拉坦（1 g/kg）麻醉后，仰卧位固定于手术板上，沿腹正中线剪开，结扎贲门，十二指肠剪小口插入引流管，用洁净注射器抽取胃液，记录胃液量，注入离心管离心5 min取上清液待测。胃液总酸度和游离酸度测定参考文献［3,4］：将收集的胃液和胃黏膜冲洗液混合共为4 ml，测定其pH值（pH计），然后滴入1％的酚酞指示剂，用0.01 mol/L的NaOH缓慢滴定中和至酸度计值达7.0，记录NaOH的消耗量V1，V1×10即为胃液中所含的游离酸含量；继续滴加NaOH至出现酚酞色（pH值8.5左右），记录NaOH的消耗量V2 ，V2即为总酸量。

    胃组织匀浆制备：采血后断头处死，低温条件下快速剖取胃组织，以冰冷的生理盐水冲洗，滤纸吸干，称重后用眼科小剪刀尽快剪碎，置于匀浆器中，用组织重9倍生理盐水匀浆（匀浆器的末端置于放冰块的冷水中），后以3 500 r/min离心10 min，取上清液置4℃冰箱保存，待测。胃蛋白酶测定严格参照试剂盒说明操作。

　　2.4  统计学处理所有数据均输入计算机，采用SPSS11.0 统计软件处理，实验数据以 ±s表示，组间样本均数差异的比较选用F检验，在F检验有统计学意义时，进一步用q检验进行两两比较。

　　3  结果

　　3.1  一般情况观察受试动物的精神状态、活动度、毛发光泽、体重、进食情况比较可见：空白组最好，造模组最差，胃炎灵大剂量组、胃炎灵小剂量组和维酶素组稍好，但体重差异无统计学意义。　3.2  各组大鼠胃组织胃蛋白酶活性的比较结果见表1。表1  各组大鼠胃组织胃蛋白酶活性的比较（略）

    由表1可知，模型组与空白组比较P<0.01，差异具有统计学意义；胃炎灵大剂量组与模型组相比较P<0.01，差异具有统计学意义；胃炎灵小剂量组和维酶素组与模型组比较P<0.05，差异具有统计学意义。

　　3.3  各组大鼠胃液总酸量和游离酸含量的比较结果见表2。表2  各组大鼠胃液总酸量和游离酸含量的比较（略）

    由表2可知，胃液总酸含量，模型组与空白组比较P<0.01，差异具有统计学意义；胃炎灵大剂量组与模型组相比较P<0.05，差异具有统计学意义；胃炎灵小剂量组、维酶素组与模型组相比较差异无统计学意义。 胃液游离酸含量，模型组与空白组比较P<0.01，差异具有统计学意义；胃炎灵大剂量组、维酶素组与模型组相比较P<0.05，差异具有统计学意义；胃炎灵小剂量组与模型组相比较无统计学意义。

　　4  讨论

    慢性萎缩性胃炎患者因胃腺体发生不同程度的萎缩，其胃液量必然减少，同时因胃液酸性减弱，盐酸对胃蛋白酶原的活性作用也随之减弱，因而胃蛋白酶的活性也减退，故胃液分析是研究胃的基础分泌和受刺激状态下胃的分泌情况。胃液中的盐酸（胃酸）有两种形式：一种为解离的游离酸，占纯净胃液的绝大部分；另一种是与蛋白质结合的盐酸蛋白质，即结合酸。游离酸和结合酸称为总酸。一般认为胃酸的最大排出量直接与壁细胞的数量相关。胃酸主要作用为激活胃蛋白酶原而生成具有生物活性的胃蛋白酶，保持胃液的pH值，以利于胃蛋白酶的消化作用。胃蛋白酶是胃液中主要的消化酶，是由胃腺的主细胞产生的。在安静状态下，主细胞以少量恒定的速率将胃蛋白酶原分泌入胃腔。当细胞受到刺激时，酶原颗粒将迅速大量释放。胃蛋白酶原在胃酸的作用下，裂解生成胃蛋白酶，这种裂解作用仅仅在pH 5以下时进行，且以pH 1.8～3.5之间为宜，当pH值升至6以上时，胃蛋白酶即失去活性。所以本文通过检测胃蛋白酶活性及胃液总酸和游离酸含量评判和探讨胃炎灵胶囊对CAG的防治作用。

    “胃炎灵”系我省名中医周信有教授多年治疗慢性萎缩性胃炎的有效验方。方以黄芪与党参、白术配伍为君药，补益脾胃之气，温运脾阳、生肌养血；针对脾虚胃失和降，运化迟滞，配伍焦神曲、炒山楂、 陈皮、香附、砂仁等以和胃利气，消胀助运，促进运化机能共为臣药；方中又以活血化淤之品炒白芍、元胡、三棱、莪术等为佐药，养血活血，理气化淤；而肉桂一味，温补脾肾之阳，温运中阳，散寒止痛；且针对CAG多表现为胃酸缺乏，故以酸敛之品乌梅配伍甘草，意在酸甘化阴，以益胃敛阴助酸；因慢性萎缩性胃炎常由幽门螺杆菌（HP）感染诱发，故辅以苦寒清热凉血之蒲公英共为佐使药。 诸药合用共奏健脾和胃，温中散寒，行气化淤，生肌养血之功。现代药理研究证明［5～8］黄芪、党参、白术、山楂可调节消化系统功能，提高胃蛋白酶活性，改善免疫状态；蒲公英［9，10］抗幽门螺杆菌感染，改善胃泌酸、增强胃黏膜屏障功能。本实验结果显示：与空白组比较，CAG组大鼠胃蛋白酶活性显著降低，胃液总酸和游离酸含量显著降低，说明CAG状态下所造成的胃损伤已严重影响胃酸、胃蛋白酶的合成和分泌。这与胃粘膜萎缩、胃液pH值增高的低酸状态、壁细胞数减少、盐酸分泌不足和主细胞数的降低、胃蛋白酶原分泌下降有关。造模成功并经药物治疗后，胃炎灵胶囊能显著提高胃蛋白酶活性，显著升高胃液总酸含量和游离酸含量，且以胃炎灵胶囊大剂量作用显著，提示胃炎灵胶囊具有促进胃酸分泌及提高胃蛋白酶活性的作用。

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