雌激素对大鼠心内神经节血管内皮生长因子表达的影响

jz066520 · 发表于 2014-6-1 22:25:20

               作者：周静何明恒田爱炬程桂荣

【摘要】  目的: 用免疫组织化学方法观察成年雌性大鼠，卵巢摘除组大鼠，卵巢摘除后17 beta雌二醇肌肉注射组大鼠的心内神经节血管内皮生长因子(VEGF)的表达及变化。方法：免疫组织化学染色。结果: ①各组大鼠心内神经节均存在VEGF表达阳性神经细胞;②卵巢摘除组大鼠心内神经节VEGF 阳性神经元明显减少，表达明显减弱(P<0.05)。结论: 心内神经节细胞表达血管内皮生长因子(VEGF);雌激素可能影响心内神经节VEGF的表达。

【关键词】  血管内皮生长因子; 心内神经节; 雌激素; 免疫组织化学技术

流行病学资料显示，绝经期后及卵巢摘除妇女心血管疾病发生率明显增高[1]，临床上用雌激素替代疗法却能降低绝经期后及卵巢摘除妇女心血管疾病发生率，提示雌激素(estrogen E)对心血管系统有保护作用[2]。实验证明，雌激素有促进神经细胞的发育、调节神经递质的合成和维持神经细胞存活等多方面作用[3]。血管内皮生长因子 (vascular endothelial growth factor，VEGF)又叫血管通透因子(VPF)是一种分子量 34～ 4 5kD的分泌型糖蛋白。实验证明VEGF除了在脑血管的内皮细胞上表达外，在神经元细胞上也有表达。VEGF不仅具有促进血管内皮细胞增殖，有利新生血管形成和增加血管通透性的作用，还具有神经保护作用。但迄今为止，尚未见心房后壁心内神经节是否存在VEGF阳性神经元并受雌激素影响的相关报道。本研究用免疫组织化学的方法证实心内神经节中存在VEGF阳性神经元并与雌激素有相关性。

　　1 材料和方法

　　1.1 实验动物分组

　　成年健康雌性Wistar大鼠18只，随机分成3组：① 正常对照组;② 卵巢摘除(OVX)组：无菌条件下，沿脊柱两侧开腹摘除大鼠双侧卵巢;③ 卵巢摘除雌激素替代(OVE+ERT)组：卵巢摘除后第18天开始给予17 beta雌二醇15mg/(kg*d)肌肉注射，正常饲养两月后，行甲醛心脏灌注固定，取心房后壁，冷冻切片。

　　1.2 免疫组织化学技术

　　微波抗原修复后行SABC免疫组织化学染色，一抗为：兔抗VEGF血清(1：100武汉博士德公司)，置湿盒4℃过夜，入生物素化羊抗兔IgG血清(1:200武汉博士德公司)，37℃，0.5h孵育，链霉素辣根过氧化物酶复合物(SAHRP,1:200,北京中山公司)37℃，0.5h孵育，DAB显色，常规脱水、透明、封片。用正常兔血清和PBS代替一抗孵育切片作阴性对照。光镜下观片、计数、摄片。

　　1.3 图像分析及统计学处理

　　应用HPIAS1000高清晰彩色病理图文报告分析系统(武汉千屏公司)，测其免疫反应的光密度值(OD),每张切片取10个阳性神经元的均值。每两组数据的比较采用t检验。

　　2 结果

　　在假手术(SO)组，卵巢摘除(OVX)组以及卵巢摘除雌激素替代(OVE+ERT)组大鼠均存在VEGF阳性神经元，该神经元胞体多呈圆形或椭圆形。免疫阳性产物为棕黄色，定位于细胞浆，胞核为空白区。阳性神经元细胞计数(神经节阳性神经元占神经节细胞总数)显示正常组(246/1323)，卵巢摘除(OVX)组(247/1756)，卵巢摘除雌激素替代(OVE+ERT)组(339/1785)，统计分析得知，正常组与OVE+ERT组没有显著差异(P>0.05)，而正常组、OVE+ERT组与OVX组均有显著差异(P<0.05),见表1。表1 VEGF阳性神经元细胞在大鼠心内神经节中的表达3 讨论

　　近几年的研究表明，心内神经网络对调节心血管的功能有重要作用，心内神经节是副交感神经换元处，同时也含有交感神经、感觉神经和多种肽类神经递质，有实验证明心内神经节通过性激素影响分泌的IL6、NGF、NOS1[4]等发挥重要的调节作用。

　　血管内皮生长因子(VEGF)是一类糖蛋白，除在血管的内皮细胞上表达外，在神经元细胞上也有表达。VEGF不仅具有促进血管内皮细胞增殖，有利新生血管形成和增加血管通透性的作用，还具有神经保护作用，但EVGF的神经保护机制尚不清楚。Schiera G[5]等通过荧光免疫、western分析以及扫描电镜技术揭示了神经细胞是通过出胞作用分泌VEGF。与此同时，TovarYRomo LB[6]通过慢性脊髓损伤模型证实了VEGF有保护运动神经元的功能。

　　本实验结果显示卵巢摘除后心内神经节VEGF免疫反应的平均OD值较正常对照组明显降低，经生理剂量雌激素替代疗法后VEGF的表达又升高到接近正常水平，提示雌激素对心内神经节VEGF的表达有上调作用，这种上调作用可能是通过心内神经节上表达的雌激素的受体来实现的。

【参考文献】
  　1 Debra F， Skafar, Rui Xu, et al. Female Sex hormones and cardiovascular disease in women . Clin Endocrinol Metab, 1997,82,(12) :3913～3918.

　　2 Singer CA, FigueroaMasot XA, Batchelor RH, et al. The mitogenactivated protein kinase pathway mediates estrogen neuroprotection after glutamate toxicity in primary cortical neurons. Neurosci 1999,19:2455～2463.

　　3 陈小武，等.雌性大鼠心内神经节中雌激素受体及其mRNA的表达.解剖学报,2003， 34(4) :372～374.

　　4 Zachary I et al. Neuroprotective role of vascular endothelial growth factor: signalling mechanisms, biological function, and therapeutic potential. Neurosignals, 2005;14(5):207～221.

　　5 Schiera G, Proia P, Alberti C，et al .Neurons produce FGF2 and VEGF and secrete them at least in part by shedding extracellular vesicles. Cell Mol Med, 2007 ,11(6):1384～1397.

　　6 TovarYRomo LB, Zepeda A, Tapia R J, et al .Vascular endothelial growth factor prevents paralysis and motor neuron death in a rat model of excitotoxic spinal cord neurodegeneration. Neuropathol Exp Neurol, 2007,66(10):913～922.

		自动登录	找回密码
密码			立即注册

[临床医学] 雌激素对大鼠心内神经节血管内皮生长因子表达的影响