cmyc在鼻腔内翻乳头状瘤中的表达及临床意义

jz066520 · 发表于 2014-6-2 10:15:58

【摘要】  目的：探讨原癌基因cmyc在鼻腔内翻乳头状瘤(SNIP)中的表达及临床意义，以期能寻找到cmyc与SNIP发生的性。方法：收集武汉市中心医院病理科2000～2007年鼻腔内翻乳头状瘤存档蜡块20例，另取瘤组织周围组织5例作对照，采用免疫组织化学SP法检测cmyc相关抗原。在显微镜下(×400) ,测定每个视野下阳性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积,计算阳性面积率。采用HPIAS2000高清晰度彩色病理图文报告管理系统对cMyc在各组中的表达进行定量分析。结果：SNIP中cMyc表达的平均光密度为0.3290±0.0218, 对照组cMyc表达的平均光密度为0.0854±0.0112;SNIP中cMyc表达的阳性面积率为0.2873±0.0152, 对照组cMyc表达的阳性面积率为0.0754±0.0124，SNIP与对照组比较(P<0.05)，差异有显著性。结论：cmyc在鼻腔内翻乳头状瘤中的高表达，有助于SNIP的诊断。

【关键词】  cmyc; 鼻腔内翻乳头状瘤; 免疫组织化学; 相关分析

鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤( sinonasal inverted papilloma ,SNIP) 是发生于鼻腔鼻窦的粘膜上皮源性良性肿瘤,其病理组织学为良性,但具有恶性生物学行为,呈侵袭性生长,局部破坏性强,易复发和恶变,据报道其复发率从30 %～ 78 %不等, 恶变率从5 %～21 %不等[1]，探讨影响其发生的因素一直是临床及病理医师关注的焦点。原癌基因cmyc自发现以来一直受到人们的广泛重视, 它不但参与了细胞的重要活动增殖,分化与凋亡,而且还涉及了人类肿瘤的发展和演进[2，3]。本研究采用免疫组化方法检测cmyc在鼻腔内翻乳头状瘤与正常粘膜组织中的表达，旨在探讨cmyc在鼻腔内翻乳头状瘤的发生中的表达及意义。

　　1 材料和方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 材料来源收集武汉市中心医院病理科2000～2007年鼻腔内翻乳头状瘤存档蜡块20例，其中男性13例，女性7例。所有切片经病理学专家诊断为鼻腔内翻乳头状瘤。另取瘤组织周围组织5例作对照。

　　1.1.2 材料分组将实验分为鼻腔内翻乳头状瘤组和对照组。

　　1.2 主要试剂和仪器

　　1.2.1 主要试剂浓缩型鼠抗人cMyc 单克隆抗体,(北京中山生物技术有限公司);超敏即用型SP通用型免疫组织化学试剂盒(福州迈新公司);DAB显色试盒及多聚赖氨酸(北京中山生物技术有限公司)。

　　1.2.2 主要仪器 YWY781型医用微波仪，250 W，50 Hz (浙江临安电子器材厂生产);家用高压锅;电热恒温干燥箱 (湖北黄石医疗器械厂生产);显微镜成像系统 (Olympus公司)。

　　1.3 方法

　　1.3.1 蜡块切片厚5μm，贴片于涂有多聚赖氨酸的洁净载玻片上，置于烤箱烤干待用。

　　1.3.2 免疫组织化学SP法检测cmyc相关抗原

　　具体步骤：

　　① 4μm组织切片常规脱蜡至水后，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗3×3 min;

　　② 抗原修复(柠檬酸缓冲液微波抗原修复法)，室温自然冷却后，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗5×3 min;

　　③ 滴加3%过氧化氢，37℃湿盒孵育10min以抑制内源性过氧化物酶活性，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗3×3 min;

　　④ 正常羊血清37℃湿盒孵育10min以减少非特异性背景;

　　⑤ 甩去多余血清，分别滴加一抗，4℃孵育过夜，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗3×5 min;

　　⑥ 滴加生物素标记的二抗37℃湿盒孵育10min，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗3×3 min;

　　⑦ 滴加链霉素抗生物素蛋白过氧化物复合物37℃湿盒孵育10min，0.01M PBS(pH7.4)漂洗3×3 min;

　　⑧ 滴加新鲜配置的DAB显色液显色，光镜下控制反应时间(约3～5min)，自来水冲洗终止反应;

　　⑨ 苏木素复染，流水冲洗，1%盐酸酒精分色数秒，流水冲洗，0.1%氨水返蓝;

　　⑩ 梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片并镜检;

　　用PBS代替一抗作为阴性对照组，购买的阳性片作为阳性对照组。

　　1.3.3 免疫组织化学结果判断

　　cMyc 以胞核或胞质出现棕黄色颗粒为阳性反应。阴性对照组除细胞核染成蓝色外，应无棕黄色反应物。

　　采用HPIAS1000 高清晰度彩色病理图文报告管理系统(同济千屏影像公司)对cMyc的表达进行定量分析，每张切片随机选取5个完整而不重叠的高倍镜视野(×400) ,测定每个视野下阳性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积,计算阳性面积率(阳性面积率=单位面积中阳性反应的总面积/单位面积中细胞的总面积×100%)。以每例5个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测量值。1.4 统计学处理

　　数据以均数±标准差表示，用SPSS11. 5 软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q) 检验，检验水准α为0.05。

　　2 结果

　　瘤细胞核和细胞质中有大量棕黄色颗粒, cMyc 表达强; 对照组中,粘膜细胞核及细胞质中仅有少量棕黄色颗粒, cMyc 表达弱。图像分析结果显示: 鼻腔内翻乳头状瘤cMyc表达的平均光密度为0.3290±0.0218, 对照组cMyc表达的平均光密度为0.0854±0.0112;鼻腔内翻乳头状瘤cMyc表达的阳性面积率为0.2873±0.0152, 对照组cMyc表达的阳性面积率为0.0754±0.0124，经单因素分析鼻腔内翻乳头状瘤与对照组比较(P<0.05)，差异有显著性。见表1。表1 鼻腔内翻乳头状瘤与对照组中cMyc表达的平均光密度和阳性面积率　注：* 鼻腔内翻乳头状瘤与对照组比较，P<0.05。

　　3 讨论

　　SNIP 是比较多见的鼻腔鼻窦良性肿瘤,约占鼻腔肿瘤的0. 4 %～4.7 %[4],多发生于中年,男性较多见。但它具有侵袭性、高复发性和易癌变等临床特点[5，6],SNIP 虽是鼻腔鼻窦的良性病变,但肿瘤生长可破坏周围组织,应属真正的上皮边源性肿瘤,或交界性肿瘤。

　　cmyc基因是原癌基因之一,广泛存在于多种正常组织中，最早发现于禽类骨髓瘤病毒MC29中,位于人染色体8q24区带上,cmyc基因的蛋白产物P62蛋白属于DNA结构蛋白,可促进与细胞增殖有关的基因开放,因而产生细胞增殖效应,因此增殖旺盛的组织, cmyc的转录水平亦高[7]。cmyc基因与细胞周期关系密切,它诱导CyclinD1 的高表达,从而影响细胞周期, 促进G1 /S 时相转化, 使细胞“永生化”,引起细胞增殖[8]。Cmyc 的过度表达与肿瘤的生物学行为关系密切[9]。李光辉等[10]认为cmyc 的表达与临床分期和病理分级呈正相关。本研究结果表明，20例SNIP组织中，瘤细胞核和细胞质中cMyc 表达强; 对照组5例中,细胞核及细胞质中 cMyc 表达弱，鼻腔内翻乳头状瘤组与对照组比较(P<0.05)，差异有显著性。此结果提示: cmyc基因很可能是SNIP发生、发展过程中的正性调控因子,它的表达可作为判断SNIP发生的一个较为可靠的指标。

　　研究表明，肿瘤的发生、发展是多种基因多步骤共同作用的结果,包括癌基因的激活和抑癌基因的失活。我们的研究结果表明，cmyc确实参与了SNIP的发生发展的过程,可能促进或导致细胞的恶性转化及肿瘤细胞的异常增生，cmyc基因蛋白表达异常可能是SNIP发生因素之一，肿瘤恶性程度越高，基因表达阳性率越高。观察该基因的表达状况可早期发现肿瘤，实现肿瘤的早期诊断及治疗，改善预后，提高生活质量。至于cmyc基因与SNIP的复发与恶变的关系有待于进一步的研究。

【参考文献】
  　1 Segal K, Atar E , Mor C , et al. Inverting papilloma of the nose and paranasal sinuses. Laryngoscope , 1986 , 96(4) :394～398.

　　2 Willims GT, Smith CA,Molecular regulation of apop tosis:geneticcontrol on cell death. Cell, 1993, 74: 777.

　　3 曾嵘,李进. Cmyc的结构和功能. 国外医学:遗传学分册, 1997, 20 (3) : 116～119.

　　4 黄选兆,汪吉宝. 实用耳鼻咽喉科学. 北京:人民卫生出版社,1998， 269～270.

　　5 冯连铭,卢振民,史海旭,等. 鼻腔及鼻窦内翻性乳头状瘤. 新乡医学院学报,1995 ,12 (4) :368～369.

　　6 文仲祯,杨卫红. 鼻腔和鼻窦内翻性乳头状瘤8 例. 新乡医学院学报,1995 ,12 (1) :99.

　　7 Marx J. New tumor supp ressor may rival c2myc. Science , 1994, 264: 344～345.

　　8 张绪森,陈同钰,王旭芬. Cmyc, Rb及细胞G1期调控蛋白在乳腺癌中的表达. 诊断病理学杂志, 2004, 11(3) : 159～161.

　　9 Ronald AD , Nicole SA , Fredrck WA. Myc family oncogenes in the development of normal and neoplastic cell. A dv Cancer Res ,1991，57 :1～7.

　　10 李光辉,陈向东,钱松溪，等. p53 及c2myc 共同表达与输

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