高效液相色谱法测定复方卡钙菖蒲胶囊中卡马西平的含量

amy54321 · 发表于 2014-8-16 22:56:03

作者：付萍萍，景浩然，赵志伟

【摘要】  目的建立复方卡钙菖蒲胶囊中卡马西平的高效液相色谱法。方法采用C18（200 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，以甲醇0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液（60∶40）为流动相。检测波长为285 nm，流速为1.0 ml/min。结果卡马西平在0.008 648～0.172 96 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=1.000 0，n=9），平均回收率为101.44%，（n=9），RSD为0.49%。结论该方法快速、简便、结果准确，可用于复方卡钙菖蒲胶囊的质量控制。

【关键词】  复方卡钙菖蒲胶囊；高效液相色谱；卡马西平；含量测定

　　　Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of Carbamazepine in Compound Kagai Changpu Capsules.MethodsAn HPLC assay was developed. Chromatographic assay was performed on a column of Hypersil C18(200 mm×4.6 mm,5 μm),using methanol-0.02 mol/L KH2PO4(60∶40)as the mobile phase with the flow rate of 1.0 ml/min.The detection wavelength was at 285 nm.20 μl sample and external method were used.ResultsA satisfactory separation was obtained.The calibration curve was linear over the range of 0.008 648～ 0.172 96 μg for ribavirin (r=1.000 0,n=9).The average recovery of ribavirin was 101.44%(n=9) with RSD of 0.49%.ConclusionThe method is quick and simple with good reproducibility.It can be used for the quality  control of Compound Kagai Changpu Capsules.

　　Key words：Compound Kagai Changpu Capsules;  HPLC;  Carbamazepine;  Content detemination

复方卡钙菖蒲胶囊是保定市世臣癫痫病医院的自制制剂，主要由卡马西平、磷酸氢钙、石菖蒲、五味子等8种药物组成，该药有较强的抗癫痫作用，适用于各类癫痫，对精神运动型癫痫效果尤其显著。卡马西平是处方中主药之一，《中国药典》2005年版Ⅱ部［1］采用紫外分光光度法测定卡马西平的含量，不适于该复方制剂的测定；亦有报道应用HPLC法，以乙腈甲醇醋酸溶液为流动相，测定卡马西平片的含量［2］。为控制该制剂的质量，本文采用高效液相色谱法，以甲醇磷酸二氢钾溶液为流动相，测定该复方制剂中卡马西平的含量。现报道如下。

　　1  仪器与试药

Aglient 1100高效液相色谱仪；G1311A四元泵，G1313A自动进样器，DAD检测器（G1315B），ChemStationA.10.01化学工作站；TU1810S紫外可见分光光度（北京普析通用仪器有限责任公司）。

卡马西平对照品（中国药品生物制品检定所提供）；复方卡钙草蒲胶囊（保定市世臣癫痫病医院提供）；甲醇为色谱纯；其它试剂为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件色谱柱：Hypersil BDS(200 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液（60∶40）；检测波长：285 nm；流速：1.0 ml/min；进样量：20 μl;室温进样。理论塔板数按卡马西平峰计算应不低于2 000。阴性对照溶液色谱图表明，在卡马西平峰位置上无干扰峰。见图1。

　　2.2  溶液的制备

　　2.2.1  对照品溶液的制备精密称取105℃干燥2 h的卡马西平对照品0.010 81 g，置250 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液；精密量取贮备液5 ml，置50 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。　2.2.2  供试品溶液的制备分别取3批样品各20粒，将内容物混匀，研细，精密称取适量（约相当于卡马西平10 mg），置250 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 ml，置50 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

　　2.2.3  阴性对照溶液的制备按处方比例0.25粒量，称取除卡马西平以外的方中其它药物与辅料，置250 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为阴性对照贮备液；精密量取5 ml，置50 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为阴性对照溶液。
　　2.3  方法学考察

　　2.3.1  线性关系考察精密称取对照品贮备液5 ml，置50 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度（制成每亳升中约含卡马西平4 μg的溶液），摇匀；分别精密量取2，5，10，15，20，25，30，35，40 μl，注入液相色谱仪，记录峰面积。以进样量（μg）为横坐标，相应峰面积为纵坐标，进行线性回归。结果在0.008 648～0.172 96 μg范围内，卡马西平进样量与峰面积呈良好的线性关系，回归方程为Y=2 830.86X-0.777 46，相关系数r=1.000 0。

　　2.3.2  精密度实验将2.2.1项下的对照品溶液重复进样6次，所得峰面积RSD为0.51%（n=6），表明本方法的精密度较好。

　　2.3.3  稳定性实验取同一供试品溶液，分别于0，1，2，4，8 h进样20 μl，记录峰面积。结果峰面积基本不变，RSD为0.37%（n=5），表明供试液至少在8 h内稳定。

　　2.3.4  重复性实验精密称取同一批号的样品5份，分别按样品测定项下方法进行测定，求得平均含量为96.76%，计算RSD为0.85%（n=5），说明本方法的重复性较好。

　　2.3.5  回收率实验精密量取对照品贮备液4，5，6 ml，置50 ml量瓶中，分别精密加入阴性对照贮备液5 ml，用流动相稀释至刻度，注入液相色谱仪，记录峰面积。结果见表1。表1  回收率实验结果（略）

　　2.4  样品含量测定取按2.2.1与2.2.2项方法制备的对照品溶液与供试品溶液，分别进样20 μl，记录峰面积，计算含量。结果见表2。表2  样品测定结果（略）

　　3  讨论

　　3.1  检测波长的确定供试品中卡马西平色谱峰经DAD检测，在285 nm波长处有最大吸收，其uv光谱与卡马西平对照品uv光谱完全一致，故选择285 nm作为检测波长。

　　3.2  该法简单可靠、易于操作、重现性好，可作为复方卡钙菖蒲胶囊质量控制的有效方法。

【参考文献】
  　　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅱ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：101.

　　［2］赵玉香，宋一，李莎菁.HPLC测定卡马西平片的含量［J］.中国药事，2003，17（12）：762.

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