制川乌煎煮时间和给药剂量与抗炎镇痛功效的相关性研究

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【摘要】  目的研究制川乌煎煮时间、给药剂量与抗炎镇痛功效的相关性，确定药物发挥功效的最佳煎煮时间和给药剂量。方法根据川乌祛风除湿止痛的功效，选择热板痛证模型、扭体痛证模型、急性炎证模型、亚急性炎症模型等，运用均匀设计和回归分析方法，确定药物不同功效的最佳煎煮时间和最佳给药剂量。结果制川乌能明显抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀；显著减少醋酸所致小鼠扭体次数，延长小鼠扭体潜伏期；明显延长热板刺激小鼠舔足潜伏期，提高热板小鼠痛阈值。制川乌发挥抗炎功效的最佳煎煮时间为6 h，最佳给药剂量为2.4 g/kg；镇痛功效的最佳煎煮时间为6 h，最佳给药剂量为2.4 g/kg。结论制川乌具有明显的抗炎作用和中枢镇痛作用；煎煮时间、给药剂量与抗炎镇痛功效显著相关。发挥抗炎镇痛功效的最佳煎煮时间和剂量为6 h，2.4 g/kg。

【关键词】  制川乌；抗炎；镇痛；煎煮时间；剂量；均匀设计； 相关性


　　Study on the Correlationship between Decoction Time, Administration Dose and the Efficacy of Resisting Inflammation and Relieving Pain of Prepared Sichuan Aconite Root

　　Abstract：ObjectiveTo investigate the correlationship between decoction time (DT), administration dose (AD) and the actions of resisting inflammation and relieving pain of Prepared Sichuan Aconite Root (PSAR ), confirm the best DT and AD of the PSAR  acting.MethodsAccording to the efficacy of the PSAR dispelling wind and dampness and relieving pain, several animal models, including pain, inflammation models, uniform design (UD) and regression analysis were applied to confirm the best DT and AD of its different actions.ResultsThe PSAR obviously suppressed the mice's auricle swelling induced by xylene, reduced the number of mice's spraining body induced by acetic acid, increased their latencies of spraining body and stimulation of hot board, and improved their pain threshold value. The best DT and AD for the PSAR to resist inflammation and relieve pain were 6 hours and 2.4 g/kg respectively.ConclusionThe PSAR possesses evident actions of resisting inflammation and relieving pain, which are markedly correlated with the DT and AD. The best DT and AD for PSAR to resist inflammation and relieve pain are 6 hours and 2.4 g/kg respectively.

　　Key words：Prepared Sichuan Aconite Root;   Resisting inflammation;   Relieving pain;  Decoction time;   Administration dose;   Uniform design;  Correlation

    乌头功能祛风除湿、温经止痛，对痹证和痛证具有卓越的临床疗效而被广泛应用，但因毒性较大，临床屡有用药不慎导致中毒死亡的报道［1～4］，影响乌头类药物毒效发挥的因素很多，其中以煎煮时间和药物剂量最为重要。煎煮时间应多久，药物剂量应多大，才能保证乌头类有毒药物最佳功效的发挥而又不致中毒。对此，笔者应用均匀设计方法进行了一系列乌头类有毒药物煎煮时间、给药剂量与药物功效的相关性研究。现将制川乌抗炎、镇痛功效与煎煮时间、给药剂量的相关性研究报道如下。

　　1  筛选实验

　　1.1  材料

　　1.1.1  药物制川乌：受试药物，购自四川江油，经本校生药鉴定教研室鉴定为乌头Aconitum carmichaeli Debx.的干燥母根，当年采收。参见2000年版《中国药典》制剂通则项，以3倍量水浸泡30min，加至10倍量水煎煮，煎煮时间分别取煮沸后0.25,0.5,1,2,3,4,6 h 7个时间点，煎煮完毕减压浓缩为每毫升含原生药1 g。根据均匀设计表，制川乌煎煮15，30 min，1，2，3，4，6 h 7个时间点分别取临床剂量〔3 g·（60 kg·d）-1〕的24，3，48，12，1，36和6倍。临用时用蒸馏水分别配制成12％，1.5％，24％，6％，0.5％，18％，3％的药液备用。

    醋酸地塞米松：阳性药物，浙江仙琚制药股份有限公司生产。批准文号：国药准字H33020822。生产批号：040209。规格：0.75 mg/片。实验时用蒸馏水配制成0.015％的药液备用。

    盐酸曲马多片：阳性药物，石家庄制药集团有限公司生产。批准文号：国药准字H10960106。生产批号：031003。规格：50mg/片。实验时用蒸馏水配制成1％的药液备用。

　　1.1.2  动物昆明种小鼠，由成都中医药大学实验动物研究中心提供，实验动物生产许可证号：04-11。检疫后备用。

　　1.2  实验方法

　　1.2.1  抗炎实验取体重25～30 g昆明雄性小鼠90只，随机分为模型对照组（n＝10），阳性对照组（n＝10），制川乌15 min组（n＝10），30 min组（n＝10），1 h组（n＝10），2 h组（n＝10），3 h组（n＝10），4 h组（n＝10），6 h组（n＝10）。按组分别灌胃蒸馏水，0.015％地塞米松药液，12％，1.5％，24％，6％，0.5％，18％，3％的制川乌药液10 ml·kg-1·d-1,连续4 d。末次给药0.5 h后，每只小鼠右耳廓滴注0.04 ml二甲苯，造模后1.5 h脱颈椎处死，用6mm打孔器分别在同一部位摘取小鼠双耳片，称重，求两耳片之差值，即为耳肿胀度。实验数据用SPSS11.0统计软件处理，回归分析采用均匀设计1.0专用软件处理。

　　1.2.2  镇痛实验

    扭体实验：取体重18～22 g昆明种小鼠（雌雄各半）90只随机分为模型对照组（n＝10）、阳性对照组（n＝10）、制川乌15 min组（n＝10），30 min组（n＝10），1 h组（n＝10），2 h组（n＝10），3 h组（n＝10），4 h组（n＝10），6 h组（n＝10）。按组分别灌胃蒸馏水，1％曲马多药液，12％，1.5％，24％，6％，0.5％，18％，3％的制川乌药液10 ml/kg。给药后1 h，各鼠腹腔注射0.6%冰乙酸10ml/kg，观察15 min内各鼠出现扭体反应的潜伏期及扭体次数。实验数据资料用SPSS11.0统计软件包进行统计学处理，多组间比较用单因素方差分析，回归分析采用均匀设计1.0专用软件处理。    热板实验：以RB-200型智能热板镇痛仪筛选基础痛阈值（以小鼠舔后足的时间作为痛阈）在5～30 s的雌性小鼠90只，按基础痛阈值的高低随机分为模型对照组（n＝10），阳性对照组（n＝10），制川乌15 min组（n＝10），30 min组（n＝10），1 h组（n＝10），2 h组（n＝10），3 h组（n＝10），4 h组（n＝10），6 h组（n＝10）。按组分别灌胃蒸馏水，1％曲马多药液，12％，1.5％，24％，6％，0.5％，18％，3％的制川乌药液10 ml·kg-1·d-1，连续4 d。第4天，测定末次给药后0.5，1，1.5 h和2 h的痛阈值。实验数据资料用SPSS11.0统计软件包进行统计学处理，多组间比较用单因素方差分析，回归分析采用均匀设计1.0专用软件处理。

　　1.3  实验结果

　　1.3.1  抗炎实验结果见表1及回归分析。表1  对二甲苯致炎小鼠耳廓肿胀的影响(略)

　　1.3.2  镇痛实验结果详见表2～3和回归分析。表2  对冰乙酸致痛小鼠的影响(略)表3  对热板致痛小鼠痛阈值的影响(略)

　　2  验证实验

　　2.1  材料同筛选试验。

　　2.2  方法同筛选试验。

　　2.3  结果

　　2.3.1  抗炎实验结果见表4。表4  对二甲苯致炎小鼠的影响(略)

　　2.3.2  镇痛实验结果见表5～6。表5  对冰乙酸致痛小鼠的影响(略)
表6  对热板致痛小鼠痛阈值的影响(略)

　　3  讨论

    均匀设计方法是由方开泰教授和数学家王元于1978年共同提出［5，6］。他们根据多因素多水平实验设计的要求，分析了正交设计“均匀分散、整齐可比”的原理，认为“均匀分散”是实验设计的本质，而“整齐可比”只是便于数据分析，可以去除，从而可大量增加实验水平数，实验次数却增加很少。由于均匀设计具有实验次数少（每个因素的每个水平仅做一次实验），实验范围可调，可用计算机处理等特点，在药学研究中应用较多［7～9］，包括提取工艺、制剂工艺、炮制工艺以及处方筛选等，大大节约了研究时间和经费。但采用均匀设计方法进行煎煮时间、给药剂量和药物功效的相关性研究文献报道很少。

    经一系列经典抗炎镇痛实验发现，制川乌能明显抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀；显著减少醋酸所致小鼠扭体次数，延长小鼠扭体潜伏期；明显延长热板刺激小鼠舔足潜伏期，提高热板小鼠痛阈值，即具有显著的抗炎作用和中枢镇痛作用。回归分析和验证实验表明，制川乌抗炎镇痛功效与煎煮时间、给药剂量具有显著的相关性，发挥抗炎功效的最佳煎煮时间为6 h，最佳给药剂量为2.4 g/kg；镇痛功效的最佳煎煮时间为6 h，最佳给药剂量为2.4 g/kg。

    川乌中主要含脂溶性生物碱乌头碱、中乌头碱和次乌头碱，具有很强的毒性，同时又具有较强的抗炎镇痛功效，但其不耐热，加热后极易水解为毒性很小的乌头原碱等。煎煮6 h后脂溶性有毒生物碱几乎完全水解，提示，制川乌在最佳煎煮时间、剂量下发挥抗炎镇痛功效的物质基础并非乌头碱类有毒生物碱，但是否就是其水解产物，或其它抗炎镇痛成分，尚需进一步研究。

【参考文献】
  　　［1］张新龙.草乌中毒致死1例报告［J］.山西临床医药杂志，2000，9（10）：777.

　　［2］吴国炎.草乌中毒致心律失常死亡1例报告［J］.急诊医学，1997，6（1）：51.

　　［3］范存富.12例制川乌中毒报告与分析［J］.中国医院药学杂志,1995,15(10):476.

　　［4］靳昌山.服川乌中毒死亡二则分析［J］.河北中医,1996,18(6):22.

　　［5］方开泰.均匀设计——数论方法在试验设计中的应用［J］.应用数学学报，1980，3（4）：363.

　　［6］方开泰.均匀设计及其应用［J］.数据统计与管理，1994，13（1）：52.

　　［7］苏维辉,任结梅.均匀设计优选无糖益脑安神颗粒剂工艺［J］.时珍国医国药,2000,11(5):402.

　　［8］周燕华,李爱媛,周芳,等.均匀试验法对肉豆蔻炮制工艺的研究［J］.中国中药杂志,1998,23(6):410.

　　［9］余日跃，朱家谷，谢文光，等.均匀设计法对大承气汤泻下作用的实验研究［J］.中药药理与临床，1999，15(5)：7.