超声波提取马鞭草总黄酮及鉴别

amy54321 · 发表于 2014-8-17 20:48:10

【摘要】  目的为充分利用马鞭草植物资源，避免资源的浪费，探讨马鞭草总黄酮的提取及鉴别方法。方法采用超声波乙醇浸提法从马鞭草中提取黄酮类物质，对所提取的黄酮类物质进行验证，并用分光光度法测定含量。结果测得样品中总黄酮的含量C=0.2 028 mg/ml，回收率为101.4%，其纯度和产率均较高。结论该方法采用全物理过程，无任何污染，是提取马鞭草黄酮类物质的有效途径。

【关键词】  超声波提取马鞭草总黄酮鉴别

　　The Total Flavanone of Herba Verbenae Extraction and the Identification by Ultrasonic Wave

　　Abstract：ObjectiveTo make use of the resources of herba verbenae,avoid wasting and approach the extraction of total flavanone of herba verbenae.MethodsThe flavonoids were extracted by ethanol as the solvent from Herba Verbenae with ultrasonic wave and ethanol extraction.Using spectrophotometry to extract and check the flavanone of Herba Verbenae.ResultsThe density of the total flavanone of herba verbenae was C=0.2028 mg/ml and the rate of  recovery was 101.4%. Tthe outcome and the purity of the flavanone were all very high.ConclusionThis method is a purely physical process and has not any pollution. It is an ideal way to extract the flavanone of Herba Verbenae.

　　Key words：Ultrasonic wave treatment；  Herba verbenae；  Total flavanone；  Identification

马鞭草Herba verbenae始载于《名医别录》，为马鞭草科植物马鞭草Verbena oficinalis L．的全草，广泛分布于我国中南、西南及山西、甘肃、新疆、江苏和浙江等地［1］。马鞭草性苦、辛，微寒，具有清热解毒、活血通经、利水消肿、截疟的功效，用于感冒发热、黄疸、痢疾、痛经、水肿、疟疾、跌打损伤等［1］。其主治癥瘕积聚、经闭痛经、疟疾、喉痹、痈肿、水肿、热淋等症，可用于治疗疟疾、白喉、传染性肝炎、流行性感冒、丝虫病、咳嗽等［2］。马鞭草亦可利尿，止血，促进泌尿系统结石的排出，减少黏膜出血，缓解疼痛，配合其它常用利水通淋化石的中药，临床常获良效［3］。除此之外，其外用可治疗痔疮、关节痛、跌打损伤、水疝等［4，5］。马鞭草含有鞭草苷、5二氢马鞭草苷、桃叶珊瑚苷、熊果酸、3α，24二羟基齐墩果酸、十六酸、 β谷甾醇、羽扇豆醇、蒿黄素、β胡萝卜素等化学成分［2］。由于其在临床应用中有明显的疗效，近年又发现有新的药理活性，现代研究又发现马鞭草醇提取物具有抗生育、抗癌作用［1］。因此马鞭草中的化学成分及药效物质引起了新的关注。马鞭草由于临床应用无毒副作用，前景具有潜在优势，对其研究受到重视。

近年来，超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究已有报道［6，7］，表明其具有能耗低、效率高、不破坏有效成分的特点。很多研究表明，利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响［7］。但超声技术应用于提取马鞭草中黄酮类物质的研究尚未见报道，本文报道用超声波提取马鞭草总黄酮及鉴别。

　　1  仪器与试剂

　　1.1  仪器KQ5200DB型数控超声波清洗器（超声工作频率40 kHz、昆山市超声仪器有限公司）；UV755B紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；ZFI型三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂)；SHBIII循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。

　　1.2  试剂95%乙醇；亚硝酸钠AR；硝酸铝AR；氢氧化钠AR；三氯化铝AR；盐酸AR；氨水AR；乙酸镁AR；镁粉AR；正丁醇AR；冰醋酸AR；醋酸乙酯AR；芦丁标准品（中国药品生物制品检定所）；新鲜马鞭草购自广西百色市人民菜市。

　　2  方法与结果

　　2.1  总黄酮成分提取取新鲜马鞭草，烘干，粉碎。称取马鞭草粉末约6 g，加80 ml 95%乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤。滤渣再加80 ml 95 %乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤，合并两次滤液，减压回收乙醇至滤液仅剩25 ml左右为止，放置250 ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，得样品液。

　　2.2  测定方法依据以芦丁为对照品测定马鞭草中总黄酮的含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。

　　2.3  定量实验-总黄酮的含量测定

　　2.3.1  波长的选择

　　取样品液适量，在0.30 ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420～700 nm波长范围测定络合物的吸光度，络合物于510 nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。

　　2.3.2  标准曲线的绘制

　　分别精密吸取芦丁对照液（0.10 mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 ml于10.00ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.30 ml，摇匀，静置6 min；再加10%硝酸铝溶液0.30 ml，摇匀，静置6 min；再加4%氢氧化钠溶液4.00 ml，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12 min，以试剂作空白参比液，于510 nm处测吸光度。结果见表1。表1  紫外可见分光光度计测定芦丁对照液吸光度（略）

根据上表得回归方程：A=-0.03 110+13.52C，r=0.9 999。

　　2.3.3  提取物含量的测定精密吸取样品液0.50 ml，置10 ml容量瓶，按标准曲线的制备方法测定吸光度A=0.106，根据回归方程：A=-0.03 110+13.52C，计算样品中总黄酮的含量C=0.2 028 mg/ml。

　　2.3.4  回收实验精密量取样品液2.00 ml，加入标准芦丁对照品2.00 ml（0.10 mg/ml），同前样品测定方法操作测定吸光度，求出回收率为101.4% 。

　　2.4  定性实验-总黄酮的鉴别　　2.4.1  颜色反应

　　紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上，在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。

浓氨水反应：取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏30 s，立即在紫外光下观察，呈极明显的黄褐色荧光斑点。

三氯化铝反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1％三氯化铝乙醇溶液，吹干。在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈黄色荧光斑点。

乙酸镁反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%乙酸镁甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黄色斑点。

盐酸-镁粉反应：取乙醇提取液1 ml于试管中加镁粉，再加入浓盐酸数滴（一次加入），在泡沫处呈紫红色。

　　2.4.2  纸层析取样品溶液10 μl点在滤纸上。用正丁醇∶醋酸∶水=4∶1∶5（体积比）为展开剂，上行展开5 h，取出晾干。喷1%氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可见荧光斑点。

　　3  讨论

　　3.1  实验结果表明，本实验方法工艺简单，回收率为101.4%，提取效率高于传统方法，利用本文所提供的超声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。超声波可以强化乙醇浸提法，达到省时、高效、节能的目的，此方法采用全物理过程，无任何污染，是一条理想的提取黄酮类物质的途径，具有广阔的应用前景。

　　3.2  黄酮类化合物是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分，具有很高的药用价值。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄（醇）、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等［8］。天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能进入脂肪组织，进而体现出如下功能：消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其他脏器细胞的功能。　　

黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、消心脑血管疾病、抗炎镇痛、调节免疫力、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用［9～14］。近年来，世界上掀起了植物药开发的热潮，植物药以其天然低毒的特点倍受青睐，而黄酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目。本文实验结果表明，马鞭草中含有较为丰富的黄酮。因此，马鞭草具有广泛开发和利用价值，值得综合利用，加强资源开发。

【参考文献】
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　　［2］邓家刚，周小雷.马鞭草化学成分和药理作用研究进展［J］.广西中医药，2005，28(2)：1.

　　［3］张春华，宁小宁.重用马鞭草治疗泌尿系结石30例［J］.中国中医药科技， 2003，10(5)：317.

　　［4］雷长珍，张定苹.外用良药-马鞭草［J］.中医外治杂志，2005，14(4)：38.

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　　［6］刘祥义.超声波提取元宝枫叶总黄酮方法研究［J］.云南化工，2003，30（1）：27.

　　［7］谢明杰，宋明，邹翠霞，等. 超声波提取大豆异黄酮［J］.大豆科学,2004,23(1):75.

　　［8］夏杏洲，张辉，魏传晚.榕树叶中黄酮类化合物的提取条件研究［J］.食品研究与开发,2002,23(5):35.

　　［9］华光军，郭勇.黄酮类化合物药理研究进展［J］.广东药学，1999，9（4）：9.

　　［10］黄河胜，马传庚，陈志武.黄酮类化合物药理作用研究进展［J］.中国中药杂志，2000，25（10）：499.

　　［11］王玮，王琳. 黄酮类化合物的研究进展［J］.沈阳医学院学报，2002，4（2）：115.

　　［12］曹纬国，刘志勤，邵云，等.黄酮类化合物药理作用研究进展［J］.西北植物学报，2003，23（12）：2241.

　　［13］姜国芳，谢宗波，乐长高.银杏叶黄酮类化合物的研究进展［J］.时珍国医国药，2004,15(5):306.

　　［14］黄锁义，黎海妮，余美料，等.益母草总黄酮的提取及鉴别［J］.时珍国医国药, 2005,16(5):398.

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