高效液相色谱法测定天麻胶囊中天麻素的含量

amy54321 · 发表于 2014-8-17 21:09:30

【摘要】  目的建立高效液相色谱(HPLC)法测定天麻胶囊中天麻素的含量。方法采用色谱柱为NUCLEOSIL C18 (10 μm ,4.6 mm×250 mm)；流动相为乙腈水（3∶97）；流速为1.0 ml·min-1；柱温为25℃；检测波长：220 nm。结果天麻素在10.83～64.98μg·ml-1范围内线性关系良好（r=0.999 9），回归方程为：A=99.1571C-21.266 7，天麻素平均回收率为99.2%，RSD为0.6%，n=5。结论该法操作简便，结果可靠，重现性好，可用于控制天麻胶囊的质量。

【关键词】  高效液相色谱法天麻胶囊天麻素

　　HPLC Determination of Gastrodin in Tianma Granule

　　Abstract：ObjectiveTo establish HPLC method for determination of Gastrodin in Tianma Granule.MethodsThe analytical column was a nucleosil C18 (10 μm ,4.6 mm×250 mm).The mobile phase consisted of acetonitrilewater(3∶97).The flow rate was 1.0 ml·min-1 and the column temperature was 25℃ .The determination  wavelength was 220 nm . ResultsThe calibration curve was linear in the range of 10.83～64.98μg·ml-1 (r=0.999 9).The regression equation was A=99.1571C-21.266 7.The average recovery was 99.2%,RSD was 0.6%(n=5). ConclusionThe method is simple , reliable and reproducible for quality control of Gastrodin in Tianma Granule.

　　Key words：HPLC；  Tianma Granule；  Gastrodin

天麻胶囊具有健脑安神的功能。用于失眠健忘，神经衰弱以及高血压病引起的头昏头痛。组方为天麻、羌活、独活、杜仲等药材制成的复方中成药。方中天麻为君药，其性味甘平，息风止痉，祛风除湿，通痹止痛。天麻的主要成分为天麻素，该成药卫生部部颁质量标准中没有含量测定项［1］。参考国内文献［2～4］，本文运用HPLC法进行天麻素的含量测定研究, 建立了一套成熟的HPLC测定方法，提供了该产品质量标准控制新方法，使其质量标准得到提高与进一步完善，产品质量更有保证。

　　1  仪器与试药

Agilent 1100 Series高效液相色谱仪；METTLER AE 240电子分析天平。HH4数显恒温水浴锅（江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司）。天麻素对照品（批号：8079201，中国药品生物制品检验所，供含量测定用）；天麻胶囊3批，均为市售品，规格均为0.25 g/粒；白山市长白山制药厂(批号20050601) ，通化盛和药业股份有限公司 ( 批号20060603 )，吉林通化药业股份有限公司 (批号20051101)；乙腈为色谱纯，水为纯化水，其它试剂均为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件

　　色谱柱为 NUCLEOSIL C18  (10 μm, 4.6 mm×250 mm)；流动相为乙腈水（3∶97），检测波长220 nm；柱温25℃；流速1.0 ml·min-1；进样量10 μl。

　　2.2  溶液的制备

　　2.2.1  对照品溶液的制备

　　精密称取在60℃减压干燥4 h的天麻素对照品10.83 mg，置50 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品贮备液；精密吸取对照品贮备液5 ml, 置200 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度,摇匀，作为对照品溶液。　　2.2.2  供试品溶液的制备

　　取天麻胶囊装量差异项下的内容物约1 g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50 ml，称定重量加热回流1.5 h，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液15 ml，浓缩至近干，残渣加流动相溶解，转移至10 ml量瓶中，并用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

　　2.2.3  阴性对照溶液的制备以相同的处方比例制得不含天麻的空白样品。按“2.2.2”项下的制备方法制成阴性对照溶液。

　　2.3  专属性实验分别精密吸取上述3种溶液各10 μl，按上述色谱条件分别测定，色谱图如图1～3。结果供试品色谱图中呈现与天麻素对照品保留时间相应的色谱峰，而阴性对照品无色谱吸收峰,认为无干扰。

　　2.4  线性关系考察精密吸取“2.2.1”项下的对照品溶液2，4，6，8，10，12 μl进样测定，记录峰面积。以浓度（C）对峰面积（A）进行回归分析，回归方程为A=99.157 1C-21.266 7，r=0.999 9(n=6)。结果表明天麻素在10.83～64.98 μg·ml-1浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。

　　2.5  精密度实验精密量取“2.2.1”项下的对照品溶液10 μl，在上述色谱条件下，连续重复进样5次，记录峰面积，计算RSD为0.2%（n=5）。

　　2.6  稳定性实验精密量取“2.2.2”项下的供试品溶液（批号20050601）10 μl，于8 h在上述色谱条件下，测定峰面积，峰面积不变，表明供试品溶液至少在8 h内稳定。

　　2.7  重复性实验精密称取同一批号的样品（  批号20050601）6份，按“2.2.2”项下方法提取、制备，在上述色条件下测定，计算RSD为0.2%。

　　2.8  加样回收率实验精密称取“2.7”项下测定已知含量样品共5份，精密加入“2.2.1”项下的对照品贮备液0.5 ml，照“2.2.2”项下方法进行提取、制备，按上述色谱条件测定。结果见表1。平均加样回收率为99.2%，RSD=0.6%。表1  加样回收率实验结果（略）

　　2.9  样品测定按上述色谱条件对3批样品中天麻素含量进行测定。结果见表2。表2  样品测定结果（略）

　　3  讨论

　　3.1  为了选择适合的检测波长，取天麻素对照品溶液，在200～400 nm波长范围内进行紫外扫描，结果显示天麻素在220 nm波长处有最大吸收，因此选择220 nm作为检测波长。

　　3.2  方法学研究表明，本实验报道的测定方法操作简单，结果准确，重复性好，空白无干扰峰，可作为天麻胶囊质量标准的含量测定方法。

【参考文献】
  　　［1］中华人民共和国卫生部药政局.中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂，第3册［S］.1991：32.

　　［2］王跃生，李计萍，刘淑芝．高效液相色谱法测定天麻及益脑灵颗粒中天麻素含量的方法学研究［J］.中国中药杂志，1998，23（9）：541.

　　［3］孙冬梅，范宋玲，刘法锦，等．HPLC法测定天麻配方颗粒中天麻素的含量［J］.中药新药与临床药理，2002，13(6)：393．

　　［4］秦剑，邓开英，李胜容，等．RPHPLC测定天麻丸中天麻素含量［J］.中成药，2003，25(6)：508.

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[药学] 高效液相色谱法测定天麻胶囊中天麻素的含量

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