荨麻抗风湿活性部位研究

amy54321 · 发表于 2014-8-17 21:13:22

【摘要】  目的筛选荨麻抗风湿活性部位，为荨麻的开发利用提供理论依据。方法萃取法制备不同极性的溶剂部位（石油醚部位、乙醚部位、醋酸乙酯部位、水溶性部位），小鼠急性耳廓肿法、棉球肉芽肿法筛选抗炎活性部位；小鼠热板法、醋酸扭体法筛选镇痛活性部位。结果醋酸乙酯部位具有显明的抗炎和镇痛活性，能明显抑制二甲苯所致小鼠急性耳廓肿、小鼠棉球肉芽肿及热板、冰醋酸所致小鼠疼痛。结论醋酸乙酯部位为荨麻抗风湿活性部位，值得进一步研究。

【关键词】  荨麻风湿活性部位

　　Studies on the Anti-rheumatism Fraction from Urtica fissa

　　Abstract：ObjectiveTo study the antirheumatism fraction in Herba Urticase,and to provide theoretic basis for its further exploitation and utilization.MethodsDifferent fractions were isolated by extraction with different polar solvents,i.e .petroleum,diethy1 ether,ethy1 acetate and aqua.These fractions were screened by antiinflammatory and analgestic experiments.The inhibition of auricle edema induced by xylene and pain caused by hot board and acetic in mice was used to test the anti-rheumatism effect.ResultsFour fractions were isolated from Urtica fissa,among which ethy1 acetate part had obvious antiinflammatory and analgestic effects.It could inhibit the ear edema induced by xylene,granuloma induced by cotton ball and pain caused by hot borad and acetic acid in mice.ConclusionThe extraction of ethy1 acetate is the active part with anti- rheumatism effect in Urtica fissa.

　　Key words：Urtica fissa;  Rheumatism;  Active fraction

荨麻Urtica Fissa E.pritz.在我国被广泛用于风湿性关节炎、类风湿性关节炎等病的治疗，疗效确切［1］，但作用物质基础研究未见报道；同时荨麻药材也缺乏质量控制指标，因此寻找荨麻活性成分具有十分重要的意义。为研究荨麻抗风湿的活性成分，并为荨麻的质量控制提供科学依据，笔者对荨麻抗风湿的活性部位进行了药理筛选。现将研究结果报道如下。

　　1  器材

　　1.1  材料与试剂

　　作者采于四川省成都温江县通平镇，经作者鉴定为荨麻Urtica fissa E.Pritz，全草晒干备用。乙醇为化学纯，其余化学试剂均为分析纯。

　　1.2  动物昆明种小鼠（清洁级），体重（20±2）g，由复旦大学医学实验动物中心提供（合格证号：（沪）SCSK20020026）。

　　1.3  仪器与软件R502B型旋转蒸发仪（上海申生科技有限公司），AB104S电子天平（深圳君达时代仪器有限公司）。统计软件：PEMS 3.0。

　　2  方法与结果

　　2.1  受试组分的制备荨麻干燥全草8 kg，粉碎成粗粉，95%工业乙醇150 L分3次回流提取，提取液合并，回收部分乙醇，室温放置24 h，析出大量硝酸钾结晶，滤去结晶，继续回收乙醇至干得醇浸膏（A）685 g。将醇浸膏悬浮于水，用石油醚（30～60℃）萃取3次，2 500 ml/次，减压收尽溶剂得石油醚浸膏（B）306 g；乙醚萃取3次，2 500 ml/次，减压收尽溶剂得乙醚浸膏（C）22 g。继用醋酸乙酯萃取3次，3 000 ml/次，减压收尽溶剂得醋酸乙酯浸膏（D）95 g，母液减压收尽溶剂得浸膏（E）242 g。各组分均用0.5%CMC溶液超声溶解，分别配成50 mg·ml-1的溶液备用。　　2.2  各组分的抗炎作用比较

　　2.2.1  小鼠急性耳廓肿取雄性小鼠60只，随机分6组，每组10只。按表1剂量腹腔注射给药，给药30 min后，用二甲苯0.1 ml均匀涂布于各鼠右耳的正反面，再过30 min后处死，用8 mm打孔器在两耳同一部位扎下左右耳片，精密称重，以右耳的重量减去左耳的重量作为耳廓炎性肿胀度，计算右耳肿胀度及抑制率［2］。结果见表1。可以看出，A，D，E组有显著的抗炎活性，明显抑制二甲苯所致的小鼠急性耳廓肿，其中D的作用最强。而B，C组均无明显抗炎活性。表1  荨麻各组分对小鼠耳廓肿胀的影响(略)

　　2.2.2  棉球肉芽肿雄性小鼠，在乙醚浅麻醉下腹部去毛消毒。腹部切口，将两个已高压灭菌的5 mg棉球分别植入小鼠两侧腋窝皮下，缝合皮肤后消毒。随机分组，手术当天按表2剂量给药，连续7 d。末次给药1 h后处死小鼠，取出棉球，在70℃烘箱中干燥2 h后称重，减去原棉球重量即为肉芽肿重量［3］。结果表明，A，D，E组能明显抑制小鼠棉球肉芽肿，D的作用最显著，能显著抑制肉芽组织的增生。结果见表2。表2  荨麻各组分对棉球肉芽肿重量的影响(略)

　　2.3  各组分的镇痛作用比较

　　2.3.1  醋酸扭体法将60只小鼠（雌雄各半），随机分为6组，每组10只，称重并编号。阴性对照组腹腔注射0.2 ml/20 g（体重）生理盐水，按表3剂量给药。在给药60 min后腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2 ml/只。观察并记录注射醋酸溶液后15 min内出现扭体反应的次数。实验完毕，计算药物镇痛百分率［4］，结果见表3。可见，A，D，E组均有明显的镇痛作用，能明显减少冰醋酸所致的小鼠扭体次数，其中D组作用最强；A，D组还能明显延缓小鼠扭体的出现。表3  荨麻各组分对醋酸所致小鼠疼痛的影响(略)

　　2.3.2  热板法选择对55℃热板痛觉反应在10～30 s者60只雄性小鼠，随机分为6组，每组10只。每只小鼠给药前及给药（按表4给予药物及剂量）后30，60，90，120 min测定痛反应潜伏期，计算痛阈提高率［4］。结果见表4。结果证明A，D，E组有明显的镇痛作用，以D组的作用最强。B，C组无明显活性。表4  荨麻各组分对鼠热板致痛反应的影响(略)

　　3  讨论

荨麻在我国用于治疗风湿、类风湿疗效确切，历史悠久，但对其作用物质基础研究目前尚属空白。本文在前期研究基础上，首次对荨麻的活性部位进行了追踪，确定了其抗风湿活性部位。研究证明该活性部位具有明显的抗炎活性，能明显抑制二甲苯致小鼠急性耳廓肿以及小鼠棉球肉芽肿，提示该活性部位不仅对早期渗出炎症有抑制作用，同时对炎症后期的慢性结缔组织增生也有较强的抑制作用；此外该部位还具有明显的镇痛活性，能明显抑制热板、冰醋酸所致小鼠疼痛，表明该活性部位不仅对炎性疼痛具有抑制作用，同时对其他诱因引起的疼痛也有一定的抑制作用。证明该活性部位有利于风湿、类风湿炎症及疼痛的缓解，为荨麻抗风湿的活性部位。

此外，我们还对荨麻抗风湿活性部位的化学成分进行了研究，从中分离并鉴定了山柰酚3OβD吡喃葡萄糖苷、咖啡酸、绿原酸、东茛菪苷、东茛菪内酯、山柰酚3O芸香糖苷、槲皮素7OβD吡喃葡萄糖苷、异鼠李素3O芸香糖苷等多个黄酮类及酚酸类成分［5］，其中东茛菪苷、东茛菪内酯已被证实具有明显镇痛活性，槲皮素、咖啡酸、绿原酸等具有明显的抗炎作用和免疫调节作用。这进一步提示醋酸乙酯部位为荨麻治疗风湿的活性部位，黄酮及酚酸类成分为荨麻抗风湿的活性成分。对该部位进行深入研究具有重要意义，可为荨麻的质量控制及抗风湿的作用机理研究提供科学依据。

本研究采用萃取方法分离制备活性部位，其抗炎、镇痛作用明显优于其他部位且具有统计学意义，表明采用萃取方法分离荨麻抗风湿活性部位的方法不仅简便，而且可行。

【参考文献】
  　　［1］王梦月，刘瑛，卫莹芳，等.川产荨麻药理作用的初步研究［J］.中国民族民间医药杂志，2001，4：229.

　　［2］陈奇.中药药理实验方法学［M］.北京：人民卫生出版社，1994：70.

　　［3］杨峰，崔祝梅，张继众，等.前列泰片对前列腺增生及抗炎镇痛作用的实验研究［J］.中成药，1994，16（4）：38.

　　［4］徐叔云，卞如濂，陈修. 药理实验方法学［M］.北京：人民卫生出版社，2002：882.

　　［5］王梦月，卫莹芳，李晓波.荨麻抗风湿活性部位的化学成分研究［J］.中草药，2006，37（9）：1140.

		自动登录	找回密码
密码			立即注册

[药学] 荨麻抗风湿活性部位研究