鱼腥草制剂抗炎动物模型的建立及研究

amy54321 · 发表于 2014-8-17 21:16:51

【摘要】  目的建立鱼腥草制剂抗炎动物模型。方法耳根皮下注射制剂、小鼠耳二甲苯致炎、耳圆片称重建立炎症模型，检验鱼腥草制剂的抗炎效果。结果二甲苯最佳致炎时间为1 h；鱼腥草制剂在小鼠体内作用约2 h时对致炎鼠疗效最好；给药次数为第6次时，小鼠耳肿胀度最小；以80 μl/20 g的剂量给药组肿胀度抑制率最大，建立了鱼腥草制剂鼠耳肿胀法抗炎动物模型。结论鱼腥草制剂鼠耳肿胀法抗炎动物模型可用于鱼腥草制剂药效研究。5种鱼腥草制剂均有明显的抗炎效果，其中8号制剂抗炎效果最好。

【关键词】  鱼腥草动物模型抗炎作用

　　The Establishment of Animal Model and Studies on the Effect of Anti-inflammation of Houttuynia cordata Thunb

　　ZHANG Jian, WU Xianjin, LU Hongmei, QUAN Qingli, ZHONG Na, TAN Yongguang

　　1.Huaihua College, Huaihua, Hunan 418008, China;

　　2.Research Center for Modernization of Chinese Herbal Medicine, Central South University, Changsha, Hunan 410083, China

　　Abstract:ObjectiveTo establish the animal model of the anti-inflammatory properties of Houttuynia cordata Thunb. MethodsTo make the inflammation model via injecting preparation into hypodermic，inducing mice ear edema by xylene，and ear wafer-weighting.Then test the effects of anti-inflammation of Houttuynia cordata Thunb. ResultsThe best inducing mice ear edema time for xylene was 1h and the effect of anti-inflammation of the preparation reached the best after injected 2h. When the mouse had been injected with preparation for 6 times, the degree of edema was the lowest. When the mouse had been dosed with 80 μl/20 g, the degree of edema inhibition was the highest.The animal model of the anti-inflammatory properties of mice ear turgidity of Houttuynia cordata Thunb.preparation was established. ConclusionThe animal model of the anti-inflammation is an ideal model for studying Houttuynia cordata Thunb. The five kinds of Houttuynia cordata Thunb.preparations have obvious anti-inflammatory effect on mice in which the number eight was the best.

　　Key words:Houttuynia cordata Thunb.；  Animal Model；  Anti-inflammatory effect

鱼腥草Houttuynia cordata Thunb.，别名为蕺菜、侧耳根、臭根草，是三白草科蕺菜属多年生草本植物，全草因有鱼腥气味而得名［1,2］。鱼腥草含有多种营养及药用成分，具有清热解毒、利尿消肿、强身健体、抗辐射等功效，为药食两用的植物。现代药学研究可知，鱼腥草的主要药用成分为鱼腥草素（癸酰乙醛）、月桂醛、蒎浠、芳樟醇、蕺菜硷、异槲皮苷、钾盐、黄酮类等。药理实验表现为抗菌、抗病毒和利尿作用［3,4］。

鱼腥草很早就被用于中药药方，现被制成抗炎制剂。目前有从鱼腥草的根、茎、叶等部位提取的各种注射液，由于不同部位制成的注射液有效成分含量不同，因而抗炎效果不同。而对于同一部位提取的不同种鱼腥草制剂，它们的抗炎效果也不同，关于这方面的研究尚未见报道。本实验通过建立抗炎症动物模型，对鱼腥草不同制剂的抗炎作用进行分析，旨在探索鱼腥草制剂的抗炎效果，为筛选优良抗炎药物提供依据。

　　1  器材

　　1.1  动物BALB/C纯系小鼠，清洁级，由中山大学实验动物中心提供（动物质量合格证：粤检证字2003A062号）。

　　1.2  仪器微量进样器（100，25 μl，上海安亭微量进样器厂），AL104型电子天平（梅特勒-托利仪器厂），打孔器（广州市新风工业公司）。

　　1.3  试剂5种鱼腥草制剂（由湖南正清制药集团有限公司提供），地塞米松磷酸钠注射液（安阳九州药业有限责任公司，批号H41023673），氯化钠注射液（湖南科伦制药有限公司），二甲苯（分析纯，湖南师大化学试剂厂），乙醚（分析纯，长沙市国营延风化学试剂厂）。

　　2  方法

　　2.1  二甲苯最佳致炎时间的确定随机取8只小鼠，（20±2） g，雌性，雌雄各半，用100%乙醚麻醉后，以二甲苯20 μl/只剂量快速推注至右耳前后两面中心，每面10 μl，任其自行浸润扩散；左耳不做任何处理。观察并计算耳肿胀程度随时间的变化情况。

　　2.2  鱼腥草制剂最佳药效时间的确定随机取16只小鼠（20±2）g，分为4组。第1组作为空白对照，致炎1h后断颈处死，其余3组分别以80μl/只剂量右耳根皮下注射给药（正大青春宝鱼腥草注射液，批号0405051），第2组末次给药30 min后用二甲苯20 μl/只剂量致炎，1 h后处死；第3组末次给药1 h后致炎，1 h后处死；第4组末次给药2 h后致炎，1 h后处死。剪下双耳，用8 mm直径打孔器在以耳三根血管交汇点为圆心位置处打下圆耳片［5］，电子天平称重，确定鱼腥草制剂最佳药效时间。

　　2.3  鱼腥草制剂给药次数的确定随机取16只小鼠（20±2）g，分为4组、分别给药1，2，4，6次，以80 ml/g剂量在右耳根皮下注射给药（正大青春宝鱼腥草注射液，批号0405051），末次给药2 h后用二甲苯20 μl/只剂量致炎，1 h后断颈处死，剪下双耳，用8 mm直径打孔器在同一部位打下圆耳片，电子天平称重，确定鱼腥草制剂的给药次数。　2.4  鱼腥草制剂给药剂量的确定随机取25只小鼠（20±2）g，分成5组，分别以40，80，160，320 μl/20 g不同剂量在右耳根皮下注射给药（正大青春宝鱼腥草注射液，批号 0405051），2次/d，共6次，阴性对照组以80 μl/20 g剂量注射氯化钠注射液6次，末次给药１ h后分别用二甲苯20 μl/只致炎，1 h后断颈处死，剪下双耳，用8 mm直径打孔器在同一部位打下圆耳片，电子天平称重，观察不同剂量的药效，确定给药剂量［6］。

　　2.5  鱼腥草制剂药效实验取合格小鼠95只，分成7组，1到5组每组15只，阴性对照组、阳性对照组每组10只，第1到第5组小鼠右耳分别给以鱼腥草5，6，7，8，9号制剂，阴性对照组为生理盐水，阳性对照组为地塞米松注射液，给药1次/12 h，连续3d。末次给药1 h后二甲苯致炎，1 h后断颈处死，剪下双耳，用8 mm直径打孔器打下耳圆片，电子天平称重。以右耳重减去左耳重量之差（△mg）为肿胀度评价药效。

　　3  结果

　　3.1  确定二甲苯最佳致炎时间实验二甲苯致炎1 min时小鼠出现瘙痒，耳充血及红肿；10～20 min时耳红肿严重；40 min时耳红肿充血；60 min时耳充血。结果表明，致炎药物在小鼠体内作用40～60 min左右时炎症症状最明显，致炎药物作用1 h时肿胀度最大。结果见图1。

　　3.2  确定鱼腥草制剂最佳药效时间实验结果显示，鱼腥草制剂有明显抗炎效果；在致炎时间相同条件下，末次给药2 h后致炎，小鼠耳肿胀度最小，说明鱼腥草制剂在小鼠体内作用约2 h时对致炎鼠耳的疗效最好，表明鱼腥草制剂在小鼠体内最佳药效时间为2 h。结合炎症在小鼠体内的时间的关系，确定末次给药1 h后致炎，致炎后1 h后处死实验鼠，测定实验结果，这样既能让二甲苯在小鼠体内充分作用，又能让鱼腥草制剂起到最大的抗炎效果。结果见图2。

　　3.3  确定鱼腥草制剂给药次数的实验结果见图3。由图3可见，随着给药次数增多，抗炎效果在个体中的差异越小而且小鼠耳肿胀度也随之减小；当给药次数为6次时，小鼠耳肿胀度最小，因此确定给药次数为6次（2次/d）。

　　3.4  确定鱼腥草制剂给药剂量实验不同剂量的鱼腥草制剂的抗炎效果是不同的，其中剂量为80 μl/20 g的给药组肿胀度最小，说明此剂量应是最佳药效的给药剂量，确定给药剂量为80 μl/20 g。结果见图4。

　　3.5  鼠耳肿胀法抗炎作用系列实验确定二甲苯最佳致炎时间为1 h；鱼腥草制剂在小鼠体内作用约2 h后对致炎鼠耳疗效最好；给药次数为6次时，小鼠耳肿胀度最小；以80 μl/20 g的剂量给药组肿胀度抑制率最大，建立了鱼腥草制剂鼠耳肿胀法抗炎动物模型。

运用此动物模型对不同鱼腥草制剂进行实验，结果发现，不同的鱼腥草制剂均有明显的抗炎效果，其中8号制剂抗炎效果最好，5，9，6，7号制剂疗效依次减弱，这说明8号鱼腥草的有效抗炎成分含量最多，而其它的制剂因为含有不同量的有效成分，也有一定的抗炎效果。5种取自鱼腥草同一部位不同干燥时间段的制剂抗炎效果是不同的，干燥时间的差异可能造成了它们抗炎效果的差异，8号鱼腥草制剂是5种待测制剂中药效最佳制剂。结果见表1。表1  不同制剂的抗炎效果（略）

　　4  讨论

通过对小鼠耳肿胀时间、药效与时间的关系、给药剂量、给药次数确定的探究，建立了鱼腥草制剂鼠耳肿胀法抗炎动物模型。运用此抗炎动物模型，探讨鱼腥草制剂的抗炎效果，发现不同干燥程度的鱼腥草制剂抗炎效果是不同的。8号制剂即干燥8d后的制剂抗炎效果最佳，其余4种5，9，6，7号的抗炎效果依次减弱，这可能是由于提取前处理过程不同所致，干燥8 d后再提取制剂应是鱼腥草干燥处理的最佳方案。

鱼腥草制剂与传统阳性抗炎药物地塞米松比较，不同的鱼腥草制剂均有明显的抗炎效果，且抗炎效果因小鼠个体差异而不同。实验表明，雄性个体较雌性对鱼腥草制剂更为敏感。

鱼腥草及其制剂，具有广谱消炎、抗菌、抗病毒感染及增强动物机体免疫功能［7］，是一种极有开发价值的药用植物，值得进一步研究。

【参考文献】
  　　［1］江苏新医学院.中药大辞典［M］.上海：上海科技出版社，1986：1439.

　　［2］戴伟锋，杨国荣，周强.鱼腥草中总黄酮提取工艺考察［J］.云南化工，2006，33(1)：12.

　　［3］张俭，伍贤进.鱼腥草在家畜疾病防治上的应用［J］.畜牧与兽医，2005，11：41.

　　［4］全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编，上册［M］.北京：人民出版社，1978：553.

　　［5］徐叔云，卞如，陈修.药理实验方法学，第3版［M］.北京：人民卫生出版社，2003：911.

　　［6］刘昌孝，孙瑞元.药物评价实验设计与统计学基础［M］.北京：北京军事医学科学出版社，1999：11.

　　［7］邵兰，于庆海.合成鱼腥草素对小鼠免疫功能的影响［J］.沈阳大学学报，1999，16（3）：209.

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