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作者：汪冶 高春花 肖聪颖 郑丽
【摘要】 目的研究搀硫酸镁穿山甲洗脱后是否能作穿山甲入药。方法各种方法洗脱后，用聚酰胺薄层色谱法、EDTA滴定法、酸不溶性灰分测定和定氮法对搀假物进行定性定量分析。结果定性分析显示洗脱后的穿山甲中化学成分已发生变化，总灰分超出正常穿山甲的11倍，定量分析显示洗脱后的搀假穿山甲中仍存在硫酸镁，蛋白质含量有所减少。结论 搀硫酸镁穿山甲经洗脱后，仍不能作为正品入药。
【关键词】 搀假穿山甲； 硫酸镁； 含量测定； 蛋白质
Abstract：ObjectiveTo research whether pangolin adulterated with magnesium sulfate can be used as quality goods after lavation. MethodsUse PATLC, EDTA, determination of acidinsoluble ash and technology of measuring nitrogen to analyze the adulterated in quality and quantity after kinds of lavations. ResultsChange of chemical constitution of pangolin could be found by analysis in quality after lavation, also total content of ash surpass that in normal ones by 11 times, after analysis in quantity, magnesium sulfate could still be found in adulterated ones and the content of protein also decreased after lavation. ConclusionPangolin adulterated with magnesium sulfate can not be used as quality goods after lavation.
Key words：Adulterated pangolin; Magnesium sulfate; Content determination; Protein
穿山甲（Squama Manitis）为常用中药,系鲮鲤科动物穿山甲Manis pentadactylal L.的鳞甲（又称甲珠），本品具有通筋下乳，消肿排脓，搜风通络之功效，用于经闭症瘕 ，乳汁不通，痈肿疮毒，关节痹痛，麻木拘挛［1］。穿山甲作为贵重药材，搀假现象较多［2，3］，前文报道了搀硫酸镁穿山甲检定、搀假穿山甲中蛋白质与氨基酸破坏程度的测定和搀假穿山甲的揭示性实验［4～6］。由于穿山甲是国家二类保护动物［7］，货源较少，其药材贵重，故常有人建议将搀假物硫酸镁洗脱后再作穿山甲入药。因此本实验对洗脱后的搀硫酸镁穿山甲进行了研究。
1 材料
穿山甲鳞甲原药材和饮片均购自当地药材公司，经鉴定为鳞鲤科动物穿山甲Manis pentadactylal L. 的鳞甲（鉴定人：汪冶，教授、中药主任药师）；伪品穿山甲样品系作者在某药品稽查办工作时,于2002年没收某医院的药品。硫酸镁（分析纯，五七六0化工厂生产）。
2 方法与结果
2.1 自制搀假穿山甲的制备，按文献［4］方法，取正品穿山甲适量，加常温下硫酸镁饱和溶液，煮沸8 h，取出穿山甲，干燥，称重，计算，得搀假量为121.8%；再用清水洗净上述穿山甲表面，干燥，称重，计算，得搀假量为36.7%；并将部分自制搀假样品分成4份，编为1，2，3，4号。
2.2 搀假物的洗脱方法
2.2.1 取样品置烧杯中，用纯化水反复浸泡，换水清洗，3 h/次，2 d后，取出穿山甲，干燥，称重，计算。
2.2. 2 取样品置色谱柱中（上面压盖干净石块），加纯化水浸泡3 h，用纯化水渗漏（渗漏速度为3 ml/min），至渗漏液中镁离子呈阴性反应，取出穿山甲，干燥，称重，计算。
2.2.3 取样品置烧杯中，加纯化水10倍量，加热煮沸，微沸2 h，重复1次，取出穿山甲，干燥，称重，计算。
2.2.4 取样品置烧杯中，纯化水10倍量，加热煮沸，沸后30 min，倾出水液，重复操作，至水液中镁离子呈阴性反应。取出穿山甲，干燥称重计算。
2.3 搀假物的洗脱结果 取伪品穿山甲适量，分成4份，编为5，6，7，8号；另取正品穿山甲适量，编为0号。1、5号用2.2.1项方法洗脱，2，6号用2.2.2项方法洗脱，0，3，7号用2.2.3项方法洗脱，4，8号用2.2.4项方法洗脱，计算搀假物的洗出率。结果见表1。
表1 搀假物的洗出率（略）
2.4 薄层色谱
2.4.1 供试品溶液的制备 分别取正品穿山甲0号、自制搀假穿山甲1，2，3，4号、伪品穿山甲5，6，7，8号粉末各0.1 g，每个样品取2份，第1份分别加水5 ml, 微沸1 min, 冷却，滤过，滤液作为供试品水溶液；第2份分别加0.1 mol/L HCl溶液5 ml，微沸5 min，冷却，滤过，滤液作为供试品0.1 mol/L HCl溶液。
2.4.2 展开及结果 取上述9个供试品的水溶液、0.1mol/L HCl溶液各5 μl,分别点样于聚酰胺薄膜上。分别以①正丁醇∶醋酸∶水溶液（7∶3∶1），②正丁醇:醋酸:乙醇:水溶液（4∶1∶1∶2）为展开剂，展开，取出晾干，喷茚三酮试液，105℃加热数分钟。结果9个样品的水提液均无斑点，0.1 mol/L HCl提取液均显示有蓝紫色的斑点。结果见图1a，b。a-展开系统：正丁醇∶醋酸∶水（7∶3∶1）
b-展开系统：正丁醇∶醋酸∶乙醇∶水（4∶1∶1∶2）
图1 聚酰胺薄层色谱（示意图）（略）
2.5 搀假物洗脱后的灰分测定 参照文献［4］方法，分别取穿山甲0号、自制搀假穿山甲1，2，3，4号、伪品穿山甲5，6，7，8号粉末适量，分别精密称定（准确至0.01 g），对搀假物洗涤后的总灰分和酸不溶性灰分进行了测定。结果见表2。
表2 搀假物洗脱后的总灰分和酸不溶性灰分测定结果（略）
2.6 搀假物洗脱后的硫酸镁含量测定
2.6.1 滴定终点的判断 采用EDTA配位滴定法测定硫酸镁的含量是经典方法，滴定终点的判断参照文献［4］，终点的颜色应为浅红棕色变为草绿色。
2.6.2 含量测定方法及结果 参照文献［4］方法，分别取自制搀假穿山甲1，2，3，4号，伪品穿山甲5，6，7，8号粉末适量，分别精密称定，加水50 ml，振摇5 min使溶解，加氨-氯化铵缓冲液（pH 10.0）与铬黑T指示剂少许，用乙二酸四醋酸钠液（0.05 mol/L）滴定，至溶液由浅红棕色变为草绿色。每毫升的乙二酸四醋酸二钠液（0.05 mol/L）相当于12.32 mg的MgSO4。结果见表3。
表3 搀假物洗脱后硫酸镁含量测定结果（略）
2.7 含氮量的测定分别取正品穿山甲，自制搀假穿山甲1，2，3，4号，伪品穿山甲5，6，7，8号粉末各约0.1 g，精密称定，按《中国药典》附录氮测定法测定含氮量［1］。结果见表4。
表4 含氮量的测定结果（略）
含氮量×6.25，即为蛋白质含量
3 讨论
3.1 穿山甲炒制后，鼓起中空，大量的空隙有利于水溶性物质的进入与吸附，硫酸镁在水中的溶解度大，故搀硫酸镁穿山甲中含有大量的硫酸镁，因此正品穿山甲外观上无异物，断面无结晶，搀硫酸镁穿山甲外观上可见异物如晶体等，断面大多可见亮晶。硫酸镁晶体溶于水，可用水洗脱，从上述实验得知，硫酸镁晶体虽可用水洗脱，但短时间内洗不干净。
3.2 搀硫酸镁穿山甲用4种洗脱方法的洗出率不同，洗出率以样品3，4，7，8号的方法为高，即采用加热煮沸的方法，其中以加10倍量纯化水、加热煮沸30 min，倾出水液、重复操作至水液中镁离子呈阴性反应的方法洗脱效果最好；而中药一般采用水煎煮法，用这种方法虽然可以洗去大部分搀假物硫酸镁，但中药的有效物质也被洗掉。
3.3 硫酸镁的含量测定中可知，搀硫酸镁穿山甲用4种洗脱方法洗脱后仍存有硫酸镁。硫酸镁是一种泻药、利胆药［8］，服用量多会对人体有不良反应，与穿山甲同服时可导致腹泻，使穿山甲的有效成分不能被机体吸收而发挥正常的药效。
3.4 穿山甲由甲壳蛋白组成 炮制后部分解离胨、二肽、氨基酸等，从聚酰胺TLC结果看，正品穿山甲，搀假穿山甲，伪品穿山甲的水提出液中均没有斑点；每个样品的0.1 mol/L HCl提取液均有一个斑点，但位置不相同。说明经洗脱后穿山甲化学成分已经发生变化，溶于水的物质多被洗脱，从表1可知，正品穿山甲可洗出水溶物2.25%。
3.5 从定氮结果可知，由于加工炮制温度高，甲壳蛋白部分水解后溶于水，部分蛋白水解产物在搀假加工时已部分流失，经过洗脱后，搀假穿山甲中的蛋白质部分水解而多被洗出，使总氮量减少，蛋白质含量下降。
综上所述，搀假穿山甲经洗脱后化学成分已经发生变化，大部分溶于水的物质被洗出，蛋白质含量均有所减少，故穿山甲虽为贵重药材，但洗脱后的穿山甲仍不能作为正品入药。
【参考文献】
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［5］ 汪 冶，徐 蓉，吴林红，等.掺假穿山甲中蛋白质与氨基酸破坏程度的测定［J］.中南药学，2005, 3 (6)：28.
［6］ 汪 冶，郑 丽,符 珊,等.搀假穿山甲的揭示性实验［J］.时珍国医国药，2006，17(11)：2177.
［7］ 张恩迪,郑汉臣.中国濒危野生药用动植物资源的保护［M］.上海：第二军医大学出版社,2000：139.
［8］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅱ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：755. |
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发表于 2014-8-17 21:17:53
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