高效液相色谱法测定利胆胶囊中黄芩苷的含量

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   作者：赵翠云 贾元印  李文超 刘虹 颜鑫

【摘要】  目的研究利胆胶囊中黄芩苷的含量测定方法，制定定量质控标准。方法采用HPLC法，对该制剂的主要药物进行含量测定。结果通过方法学的系统考察和3批样品的含量测定，建立了该品中黄芩苷的含量测定方法，测得3批样品中黄芩苷的含量分别为9.18，9.71，9.40 mg/粒，其黄芩苷的线性范围为19.7 ～98.5 μg/ml，回归方程：Y=61 824X+75 898 ，r=0.999。平均回收率为100.3%，RSD为1.90%。结论所建立的方法具有专属性强、重复性好、无明显干扰等优点，是测定利胆胶囊中黄芩苷含量的较理想方法。

【关键词】  利胆胶囊； 高效液相色谱； 黄芩苷

　　Determination of Baicalin in Lidan Capsule by HPLC

　　Abstract：ObjectiveTo study the method for determination of baicalin in Lidan Capsule and establish the pharmaceutical quality standard.MethodsThe main component of the pharmacy is detected by HPLC.ResultsThe contents of baicalin in three batches of sample were 9.18 mg/capsule,9.17 mg/capsule and 9.40 mg/capsule, respectively.The regression equation was Y=61824X+75898,r=0.999.The average recovery was 100.3%,RSD was 1.90%.ConclusionThe method is specific,reproducible and noninterfered.It is a better method for determination of baicalin in Lidan Capsule .

　　Key words：Lidan Capsule；  HPLC；  Baicalin
   
　　利胆胶囊是正在研制的中药新药，本品主要由黄芩、胆酸、猪去氧胆酸等多味中药组成。黄芩为本方剂的君药，其所含黄芩苷是其主要有效成分［1］，为制定本药物的定量质控标准，参考相关文献［2～5］中的黄芩苷的含量测定方法，对利胆胶囊中黄芩苷进行了含量测定方法的研究，通过方法学的系统考察和3批样品的含量测定，建立本品中黄芩苷的高效液相色谱测定方法。

　　1  仪器与试药
   
　　美国Waters 600高效液相色谱仪（600 Pump,996 Photodiode Array Detector）;色谱柱为日本岛津shim-pack CLC-ODS,6.0 mm×150 mm;超纯水;色谱纯甲醇，其它试剂均为分析纯;黄芩苷对照品购于中国药品生物制品检定所。

　　2  方法与结果

　　2.1  样品溶液的制备

　　2.1.1  供试品溶液的制备取本品适量，研细，称取0.2 g，精密称定，加70%乙醇40 ml,回流提取3 h，放冷，滤过，滤液置100 ml量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

　　2.1.2  对照品溶液的制备取60℃减压干燥4 h的黄芩苷对照品适量置100 ml量瓶中，精密称定为19.70 mg，加甲醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液；精密量取3 ml置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液，其浓度为59.10 μg/ml。

　　2.1.3  缺黄芩空白溶液的制备按处方比例准确称取除黄芩以外的三颗针药材，模拟本品的制备工艺和供试品溶液的制备方法，制成缺黄芩空白溶液。

　　2.2  色谱条件与系适用性实验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.4%磷酸水溶液（55∶45）为流动相；流速1.0 ml/min；柱温度30℃；检测波长280 nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2 000。

　　2.3  含量测定

　　2.3.1  最大吸收波长的选择分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10 μl，进样，在200～370 nm范围内检测，描绘吸收图。结果表明两者均在280 nm处有最大吸收峰，故检测波长确定为280 nm，与《中国药典》2005年版Ⅰ部中黄芩苷HPLC测定波长一致。

　　2.3.2  空白干扰实验分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液与缺空白溶液各10 μl，进样，在280 nm处检测，结果表明对照品溶液和供试品溶液在该波长处均有最大吸收峰，而缺黄芩空白溶液在该波长处则未见明显色谱峰出现，表明在该HPLC测定条件下，黄芩苷的测定无明显干扰。见图1 ～ 3。　图1  黄芩苷色谱（略）

　　2.3.3  线性关系及标准曲线精密量取上述对照品储备溶液1，2，3，4，5 ml于10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，其浓度分别为19.7，39.4，59.1，78.8，98.5 μg/ml，精密吸取以上样品各10 μl，注入高效液相色谱仪，测得峰面积积分值。以峰面积积分值为纵坐标，进样量（μg/ ml）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=61 824X+75 898，r=0.999,进样量在19.7～98.5 μg/ml范围内线性关系良好。结果见表1。

　　图2  供试品色谱（略）

　　图3  缺黄芩空白色谱（略）

　　2.3.4  精密度实验精密吸取同份供试品溶液和对照品溶液各10 μl，分别连续进样5次，测定峰面积积分值。结果供试品5次测定的±s=3 288 247±13 837.39，RSD为0.42%，对照品5次测定的±s=308 888±20 200.83，RSD为0.66%。

　　2.4  稳定性实验精密吸取同份供试品溶液和对照品溶液各10 μl，每隔2 h分别进样测定1次，共测定5次，其峰面积积分值在测定时间8 h内基本不变，供试品5次测定的 ±s =3 317 748±26 737.84，RSD为0.81%，对照品5次测定的 ±s=3 038 888±20 200.83，RSD为0.66%，表明稳定性良好。

　　表1  对照品测定结果 （略）

　　2.5  重复性实验取同一批（20050410）样品6份，按含量测定项下，依法测定各份样品中黄芩苷的含量，结果6次测定的平均含量为 31.78 mg/g，其RSD为2.4%，表明重复性良好。

　　2.6  回收率实验取同批样品5份，加入3.06 mg黄芩苷（配成浓度为1.02 mg/ml的溶液，准确加入3.0 ml），按以上方法制备各供试品溶液并测定样品中的含量，计算回收率。结果见表2。

　　表2  添加法回收率实验结果 （略）

　　2.7  样品的测定分别精密吸取对照品溶液与3批供试品溶液各10 μl ，注入液相色谱仪，测定，并计算各批样品中黄芩苷的含量。结果见表3。

　　表3  3批利胆胶囊中黄芩苷的含量测定结果 （略）

　　3  讨论
   
　　通过方法学的系统考察和样品的含量测定，建立了本制剂中黄芩苷的HPLC含量测定方法，测得3批样品中黄芩苷的含量分别为9.18，9.71，9.40 mg/粒，样品回收率为100.3%，最大变异系数为1.90%。
   
　　本标准中建立的黄芩苷HPLC的含量测定方法，具有专属性强、重现性好、无明显干扰等优点，是控制本品内在质量的理想方法。

【参考文献】
  　　［1］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：248.

　　［2］ 王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究［M］.北京：中国医药科技出版社，1994：226，260，276.

　　［3］ 傅桂兰.HPLC法测定黄芩及复方制剂中黄芩苷的含量［J］.中国中药杂志，1994，19(12)：731.

　　［4］ 郭 平，李章万，蒋学华，等.HPLC测定12种中药制剂中黄芩苷含量［J］.药物分析杂志，1995，15(5)：13.

　　［5］ 成永武，薛杉春，冯中平，等.高效液相色谱法测定喉痹冲剂中黄芩苷的含量［J］.中成药，1994，16(9)：51.