树舌灵芝粗提物体外抗肿瘤作用的研究

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   作者：周忠波， 马红霞， 图力古尔

【摘要】  目的探讨树舌灵芝各溶剂提取物的抗癌作用。方法采用系统溶剂法从树舌灵芝得到一系列提取物，运用MTT法研究了各提取物对体外培养的人乳癌MCF-7细胞增殖的影响。结果氯仿提取物对肿瘤细胞的增殖有明显的抑制作用，其余各层样品抑制作用不明显。结论树舌灵芝抗肿瘤成分可能在氯仿部分。

【关键词】  树舌灵芝； 氯仿提取物； 抗肿瘤

　　Study on Antitumor Action of Rude Extracts from Ganoderma lipsiense (Batsch) G. F. Atk.  in vitro   
　　Abstract：ObjectiveTo investigate the in vitro antitumor action of the different extracts of different solvents from Ganoderma lipsiense. MethodsAll the extracts were obtained by the technology of solvent-refining，and MTT method was used to test the cytotoxicity of the extracts on breast cancer of MCF-7 cells.ResultsThe chloroform extract showed the significant antitumor action when compared with the controls，and the others did not show obvious antitumor action .ConclusionThe chloroform extract may contain antitumor components.

　　Key words：Ganoderma lipsiense；  Chloroform extract；  Antitumor
   
　　树舌灵芝（平盖灵芝、扁灵芝）Ganoderma lipsiense (Batsch) G. F. Atk为灵芝属（Ganoderma Karst.）的真菌。近缘种有层迭灵芝Ganoderma lobatum (Schw.) Atk、有柄灵芝Ganoderma gibbosum (Nees) Pat等［1］。树舌灵芝性平，微苦，用于治疗乙型肝炎、食道癌和肺结核［2］。树舌灵芝抗肿瘤活性的研究屡有报道［3］，但多集中于多糖等水溶性成分方面。本文应用MTT法［4］研究了树舌灵芝的乙醇提取物、乙醚提取物、醋酸乙酯提取物、氯仿提取物以及石油醚提取物对人乳腺癌细胞（MCF-7）存活率的影响。

　　1  材料与方法

　　1.1  药材树舌灵芝，购于吉林省延吉市中医药药材公司，经吉林农业大学菌物研究所图力古尔教授鉴定为Ganoderma lipsiense (Batsch) G. F. Atk。粉碎，过40目筛子，备用。

　　1.2  细胞株人乳癌细胞(MCF-7)，购于吉林省肿瘤医院。

　　1.3  试剂RPMI 1640培养液（美国Gibco产品）、FCS（小牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司产品）、四甲基偶氮唑盐MTT（Sigma公司产品）、DMSO（二甲基亚砜）、95%乙醇、乙醚、正丁醇、醋酸乙酯、氯仿等（以上均为国产分析纯）。

　　1.4  仪器旋转蒸发仪、微量移液器、震荡器、酶标仪、CO2恒温培养箱、超净工作台、倒置显微镜、离心机、培养瓶、96孔培养板、液氮罐等。

　　1.5  方法采用系统溶剂法对预处理后的树舌灵芝粗粉进行提取，减压浓缩提取液，得乙醇、氯仿、乙醚、醋酸乙酯和正丁醇浸膏。　　实验设试剂对照组、肿瘤细胞对照组及各种药物的试验组。采用培养的处于对数生长期的MCF-7细胞，调细胞浓度为1×105个/ml，5种受试药终浓度PDD为500，100，50，25，12.5，6.25及3.125 μg/ml，5-Fu终浓度为25 μg/ml。
   
　　取肿瘤细胞悬液，每孔100 μl，接种于96孔培养板，次日加受试药物，每孔加药量100 μl，每种剂量3个平行孔。37 ℃，5％ CO2饱合湿度培养48 h后，再离心弃上清后每孔加MTT20 μl，培养4 h后，每孔加100 μl二甲基亚砜（DMSO），微量振荡器振荡5 min，置酶标仪上测定各孔在550 nm波长处吸光度值。
   
　　抑制率（%）＝（1－OD用药组/OD对照组）×100 ％
　　2  结果
   
　　树舌灵芝各溶剂层样品对MCF-7细胞存活率影响见表1～5。

　　表1  树舌灵芝氯仿提取物对MCF-7细胞的抑制率（略）  

　　从表1中可看出，树舌灵芝氯仿提取物在体外对MCF-7细胞有较强的抑制作用，当药物浓度1∶10和1∶50时抑制率可达89.4 %和82.6 %。除氯仿层外，其余各层样品对MCF-7细胞几乎无抑制作用。

　　表2  树舌灵芝乙醚提取物对MCF-7细胞的抑制率（略）  

　　表3  树舌灵芝乙醇提取物对MCF-7细胞的抑制率（略）  

　　表4  树舌灵芝醋酸乙酯提取物对MCF-7细胞的抑制率（略）  

　　表5  树舌灵芝石油醚提取物对MCF-7细胞的抑制率（略）  

　　3  讨论
   
　　本文应用MTT法研究了树舌灵芝的乙醇提取物、乙醚提取物、醋酸乙酯提取物、氯仿提取物、石油醚提取物在体外对人乳腺癌细胞（MCF-7）的存活率的影响。结果表明氯仿提取物对MCF-7细胞有较强抑制作用，其余各层样品抑制作用不明显。肿瘤实际上是细胞增殖失控、分化丧失或细胞异常，抑制增殖循环是目前治疗肿瘤、减少其转移和复发的方向之一。寻求抑制肿瘤细胞增殖的廉价而有效的药物是当前的研究热点。本研究为寻找树舌灵芝抗肿瘤的有效部位，对树舌灵芝进行深入开发奠定了基础。

【参考文献】
  　　［1］ 李 玉，图力古尔. 中国长白山蘑菇［M］.北京：科学出版社，2003：271.

　　［2］ 邓学龙，朱宇同，郭兴伯，等. 先天和后天感染鸭乙肝病毒的广州麻鸭外周血中病毒血症的动态比较及应用［J］. 广州中医药大学学报，1999，16（1）：56.

　　［3］ 周忠波，马红霞，图力古尔. 树舌（Ganoderma lipsiense）化学成分及药理学研究进展［J］.菌物研究，2005，3（1）：35.

　　［4］ 徐叔云，卞如濂，陈 修. 药理实验方法学［M］.北京：人民卫生出版社，2002：1785.