反相高效液相色谱法测定不同溶媒川芎提取物中阿魏酸的含量反相高效液相色谱法测定...

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【摘要】  目的测定川芎在不同溶媒提取下活性成分阿魏酸的含量。方法色谱柱为Cosmosil-C18(125 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇-3%醋酸（32∶68，v/v），流速为0.8 ml/min，波长为323 nm，柱温为室温。结果 3种溶媒川芎提取物中以乙醇提取物中阿魏酸的含量最高达到0.56 mg/ml。结论 3种溶媒川芎提取物中阿魏酸的含量各不相同，且以乙醇提取物中FA的含量较高。

【关键词】  川芎； 阿魏酸； 反相高效液相色谱法

　　Determination of Ferulic Acid in Extract of Chuanxiong in Different Solution by RP-HPLC

　　Abstract：ObjectiveTo determine the contents of ferulic acid in extraction of Chuanxiong of different solution.MethodsThe Cosmosil ODS C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)was used,the mobile phase was methanol -3%acetic acid solution(32∶68，v/v),the flow rate was 0.8 ml/min and the detection wavelength was at 323 nm at roomtemperature.ResultsThe contents of ferulic acid was 0.56 mg/ml in alcoholic extraction,which was the highest in extract of Chuanxiong in different solution. ConclusionThe contents of ferulic acid are different in extract of Chuanxiong in different solution.

　　Key words：Chuanxiong;  Ferulic acid;  RP-HPLC
   
　　中药川芎是伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort的干燥根茎，味辛、微苦，性温，具有活血祛淤、行气开郁、祛风止痛之功效。其主要活性成分阿魏酸（Ferulic Acid FA）及其衍生物有抗血栓形成、抗炎、止痛、调节人体免疫功能的作用［1］。川芎中有效成分的提取方法有超临界流体萃取、醇提、水提等，所得产物为川芎嗪，FA，挥发油的混合物［2，3］。为比较不同溶媒对提取物中活性成分含量的影响，本实验对川芎采用了不同溶媒提取，考察了提取物中FA的含量。

　　1  仪器与试药
   
　　LC-20AT高效液相色谱仪（岛津，日本），SPD-M20A二极管阵列检测器，STL-20A自动进样器，DGU-20A3在线脱气机，Lcsolution数据采集处理系统：LDZ4-0.8自动平衡微型离心机（北京医用离心机厂）；MA110-型电子分析天平（上海第二天平仪器厂）。FA对照品（中国生物制品鉴定所），冰醋酸（分析纯），甲醇（色谱纯）均购自山东禹王。川芎药材购自兰州复兴厚药材有限公司。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件色谱柱为Cosmosil-C18(柱长125 mm×4.6 mm I.D)；检测波长为323 nm；流动相为甲醇-3%醋酸溶液（32∶68，v/v）；流速0.8 ml/min；柱温室温；进样量20 μl。

　　2.2  标准曲线的绘制将FA的标准品溶于含有内标（芦丁）的甲醇中制成55.5 μg/ml溶液，进一步稀释获得0.5，1.0，5.0，10.0，15.0，25.0和50.0 μg/ml的对照品溶液，在上述色谱条件下，进样，测其峰面积。以FA和内标的峰面积之比为纵坐标（Y）FA的浓度为横坐标（X）用加权（1/C2）最小二乘法进行回归运算得到回归方程：Y=0.070 75X-0.140 1，r=0.999 8 (n=6)，表明样品中FA在0.5～50.0 μg/ml范围内线性关系良好。

　　2.3  供试品的制备取川芎药材粉3份各200 g，分别加适量的双蒸水，乙醇和醋酸乙酯浸没药材30 min，用双蒸水浸没的药材加热煮沸10 min，转入小火煮30 min，趁热过滤。药渣继续加双蒸水加热煮沸10 min，转入小火煮20 min，2次，合并3次煎出液，用纱布过滤，加热浓缩至100 ml，加20 ml乙醇和80 ml聚乙二醇进行溶解。用乙醇和醋酸乙酯浸没的药材分别采用回流提取，提取1 h，将提取液用纱布过滤后分别回收乙醇和醋酸乙酯，然后用200 ml溶剂系统（乙醇/PEG400/双蒸水，1∶4∶5，v/v/v）分别溶解提取物。取3种不同溶媒提取物的溶解物离心，精密吸取上清液2 ml于50 ml量瓶中，用溶有芦丁10 μg/ml溶剂系统（以乙醇/PEG400/双蒸水，1∶4∶5，v/v/v）定容，以0.45 μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。　　2.4  精密度实验分别精密吸取同一供试品溶液各20 μl，分别连续进样5次，测定FA峰面积。结果水提取物的RSD为1.0%（n=5），乙醇提取物的RSD为1.1%(n=5)，醋酸乙酯提取物的RSD为1.03%（n=5）。表明本法精密度较好。

　　2.5  稳定性实验分别精密吸取对照品溶液和川芎的水提取物、乙醇提取物、醋酸乙酯提取物的同一供试品溶液20 μl，在0，2，4，6，8 h分别进样测定峰面积，结果RSD分别为0.3%，0.31%，0.4%，0.35%,表明供试品溶液在8 h内基本稳定。

　　2.6  重复性实验按“2.3”项下制备方法分别平行制备同一批供试品溶液各5份，依法测定，计算含量，结果水提取物中FA含量的RSD为1.0%，乙醇提取物中FA含量的RSD为1.1%,醋酸乙酯提物中FA含量的RSD为1.03%。结果表明本法重复性较好。

　　2.7  加样回收率实验分别称取已知FA含量的川芎药材5份各200 g，精密称定，同2.3项下制备供试品溶液，并分别精密加入FA对照品约1.5 mg，精密称定，再按上述测定条件测定，分别计算回收率。结果见表1。

　　2.8  样品含量测定取3种不同溶媒川芎提取物的溶液各20 μl进样分析，记录高效液相色谱图，见图1。根据谱图中FA和内标的峰面积之比由“2.2”项下回归方程计算不同溶媒提取物中FA的含量见表2。

　　表1  回收率实验结果（略）

　　表2  样品含量测定结果（略）

　　图1  HPLC色谱图（略）

　　3  讨论
   
　　由本实验分析可以发现在3种不同溶媒川芎提取物中，以乙醇提取物中FA的含量较高达到0.56 mg/ml。另外据资料反应水煎对川芎中FA提取物影响特别大，原因是水回流提取时温度太高，FA不耐热，且水煎液中含糖量较醇提液要高，不利于后续的处理［3］，而醋酸乙酯提取物中FA的含量要略低于乙醇提取物中的FA。

【参考文献】
  　　［1］ 祁淑玲.川芎的研究及应用进展［J］.天津药学，2005，17（1）：61.

　　［2］ 赵 飞，胡燕月，陈益萍，等.川芎中阿魏酸的提取分离［J］.中国医院药学杂志，2005，25（1）：8.

　　［3］ 胡 杰，冯丽莉，崔福德.当归川芎中阿魏酸提取的研究［J］.时珍国医国药，2004，15（11）：732.