高效液相色谱法测定清热解毒口服液中黄芩苷的含量

amy54321 · 发表于 2014-8-17 21:47:04

【摘要】  目的建立清热解毒口服液中黄芩苷的含量测定方法。方法通过方法学考察，建立HPLC法测定清热解毒口服液中黄芩苷含量的方法。结果黄芩苷在0.12～0.72 μg范围内线性关系良好，平均回收率为95.8%，RSD为0.87%（n＝6）。结论该法分离效果好，结果准确、可靠。

【关键词】  清热解毒口服液；黄芩苷；高效液相色谱法

　　Determination of Baicalin in Qingrejiedu Oral Solution by HPLC

　　Abstract：ObjectiveTo measure the content of Qingrejiedu Oral Solution by HPLC. MethodsHPLC was used.ResultsA good linear relationship was obtained within the range of 0.12～0.72 μg，and the average recovery was 95. 8%, RSD＝0.87% (n=5) .ConclusionThe method can separate effectively, and the result is accurate and reliable.

　　Key words：Qingrejiedu Oral Solution；  Baicalin；  HPLC

　　清热解毒口服液［1］，经临床验证具有清热解毒、养阴生津、凉血散结等功效，符合各种热证形成的病机，对各种发热之疾病均有明显疗效。本处方由石膏、知母、黄芩、栀子、龙胆等12味药材组成，已用于临床多年，其疗效确切［2］。

　　黄芩为方中主药，用于清泻三焦火热，其主要有效成分为黄芩苷，故选择黄芩苷作为含量测定指标控制清热解毒口服液的质量。本文拟采用HPLC法测定清热解毒口服液中芩苷的含量。

　　1  器材

　　岛津LC10ATvp系列高效液相色谱仪（日本）；N2000高效液相色谱工作站（美国）；Satrous电子天平（瑞士）；DL360超声波清洗器（宁波市石浦海天电子仪器厂）；JPA型架盘天平 (太仓市东亚天平仪器有限公司)。

　　清热解毒口服液（自制）；黄芩苷（中国药品生物制品检定所）；甲醇为液相色谱用试剂，水为去离子二次重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件色谱柱：IOSOHOC18（150 mm×4.6 mm，5 μm）（日本）；流动相∶甲醇水磷酸（50∶50∶0.3）；检测波长：276 nm；柱温：35℃；流速：1 ml/min。黄芩苷对照品、供试品和阴性对照的色谱图见图1～3。

　　2.2  供试品溶液的制备精密量取本品1 ml，置100 ml容量瓶中，加乙醇适量，振摇，用乙醇稀释至刻度，摇匀放置滤过，取续滤液作为供试品溶液。

　　2.3 对照品溶液的制备精密称取在100℃减压干燥至恒重的黄芩苷对照品，加乙醇制成每毫升含0.01 mg的溶液，作为对照品溶液。

　　2.4  线性关系的考察分别精密吸取浓度为10 μg/ml的黄芩苷对照品溶液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 μl，注入高效液相色谱仪，测定其峰面积。结果见表1。

　　图1  黄芩苷对照品HPLC色谱图（略）

　　图2  供试品HPLC色谱图（略）

　　图3  缺黄芩阴性样品HPLC色谱图（略）

　　表1  黄芩苷对照品标准曲线数据（略）

　　以黄芩苷的含量为横坐标，黄芩苷的峰面积为纵坐标绘制标准曲线，所得数据经回归得方程为：y＝0.04x＋1E-16，r＝0.999 9。

　　图4  黄芩苷对照品标准曲线（略）

　　测定结果表明，进样量在0.02～0.10 μg范围内，进样量与峰面积线性关系良好。

　　2.5  精密度的考察精密吸取上述对照品溶液6 μl，重复进样5次。结果见表2。

　　表2 精密度考察结果（略）

　　结果表明，仪器精密度良好。

　　2.6  稳定性实验取样品溶液分别于0，2，4，6及8 h进样1 μl。结果见表3。

　　表3  稳定性试验结果（略）

　　结果表明，样品供试液在8 h内稳定性良好。

　　2.7  重复性实验按拟定的含量测定方法，对同一批样品分别制备样品供试液进样1 μl，测定峰面积并计算黄芩苷含量，结果见表4。　　表4  重复性实验结果（略）

　　结果表明，五份供试品测定值的相对标准偏差为1.13%，本法具有较好的重复性。

　　2.8  加样回收率实验取已知含量的样品各3份，分别加入黄芩苷对照品溶液5，10，15 ml，按上述样品制备方法，制备加样回收供试品溶液并注入高效液相色谱仪，计算回收率。结果见表5。

　　表5  加样回收率实验（略）

　　试验表明：平均回收率为95.8%，RSD为0.87%，本法具有较好的回收率。

　　2.9  含量测定取供试品溶液照上法进行含量测定，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算出供试品中黄芩苷的含量，即得。结果见表6。

　　表6  样品含量测定（略）

　　根据测定结果，暂定清热解毒口服液中每支（10 ml）所含黄芩苷不得少于10 mg。

　　3  结论

　　本研究以黄芩苷作为定量指标，采用高效液相色谱法对清热解毒口服液中黄芩苷的含量进行了测定。结果表明，其HPLC定量分析方法简便、易行，且灵敏度高，重现性好，可用于其制剂中黄芩苷的定量分析。

【参考文献】
  　　［1］国家药典委员会. 中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：619.

　　［2］朱山寅，张关顺，赵亚疑，等. 清热解毒口服液中黄芩苷高效相色谱定量法的改进［J］.江西中医学院学报，2004，16（4）：46.

		自动登录	找回密码
密码			立即注册

[药学] 高效液相色谱法测定清热解毒口服液中黄芩苷的含量