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【摘要】 目的采用高效液相色谱法测定驻车丸中小檗碱的含量。方法色谱柱为 Kromasil C18 ；以乙腈0．05 mmol/ml磷酸二氢钾（28∶72）为流动相；检测波长为345 nm，外标法定量。结果小檗碱在0.3～0.75 μg之间呈良好的线性关系，r=0.999 3，平均回收率为99.42%，RSD=1.9%（n=7）。结论方法准确、稳定性好，可作为该复方制剂的质量控制方法。
【关键词】 驻车丸； 小檗碱； 高效液相色谱法
Abstract：ObjectiveAn HPLC method for the determination of berberine hydrochloride in Zhuche Pills was established. MethodsA Kromasil C18 column was used with acetonitrile0.05mmol/L CH3CN (28∶72) . Content was detected at a wavelength of 345nm. ResultsThe linear range was 0.3～0.75 μg with correlation coefficient, r= 0.999 3. The average recovery rate was 99.42%, RSD = 1.9% (n=7). The method was accurate and repeatable . ConclusionIt can be used for quality control of Zhuche Pills.
Key words：Zhuche Pills; Berberine hydrochloride； HPLC
驻车丸收载于《中国药典》2005年版Ⅰ部，是由黄连、当归、炮姜、阿胶四味药组成的复方制剂，具有滋阴、止痢之作用，常用于久痢伤阴，赤痢腹痛、里急后重等症。盐酸小檗碱是黄连中的主要成分，《中国药典》对其含量测定采用紫外-可见分光光度法。为了更好地控制其药品质量，本文采用HPLC法对黄连中的盐酸小檗碱进行含量测定。
1 仪器与试药
日本高效液相色谱系统（日本HITACHI系列）；KQ100A 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；十万分之一电子天平（METTLER TOLEDO）
乙腈：一级色谱纯（天津南开大学精细化工厂股份有限公司），其它试剂均为分析纯，水为双蒸水。
小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，编号 ： 110713200208 ），驻车丸、空白对照药材均购于锦州国药店。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱为Kromasil C18（5 μm， 4.6 mm×250 mm）；流动相为乙腈 0.05 mmol/ml磷酸二氢钾（28：72）；流速为1.0 ml/min-1；检测波长为345 nm，进样10 μl，柱温30℃，室温操作。
2.2 对照品溶液的制备取小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇溶液制成每毫升含15 μg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备取装量差异下的本品，粉碎，混匀，精密称取1 g，于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇溶液150 ml，称重，浸渍过夜，超声提取1 h，放冷，再称定重量，用甲醇溶液补足丢失重量，摇匀，过滤，精密量取续滤液10 ml于50 ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤,用时取滤液［1］。
2.4 线性关系考察精密称取小檗碱对照品7.5 mg，置50 ml容量瓶中，加甲醇溶解至刻度，摇匀，分别精密量取2.0，2.5，3.0，3.5，4.0，4.5，5.0 ml置10 ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，用液相色谱仪测定，以进样量与峰面积计算回归方程为：Y= 40.843 X -342.66，r=0.999 3，表明在 0.3～0.75 μg 范围内有良好的线性关系。
2.5 精密度考察取小檗碱对照品溶液，同一进样量，连续进样5次，记录峰面积，计算RSD=1.6%，（n=5）表明精密度良好。
2.6 干扰组分考察以空白对照（去黄连）色谱图、小檗碱对照品色谱图进行比较，在小檗碱峰保留时间相应位置上无峰出现，表明其它组分对小檗碱测定无干扰。结果见图1～3。 图1 空白对照（略）
图2 小檗碱对照品（略）
图3 样品（略）
2.7 稳定性考察分别精密量取同一对照品溶液以及同一供试品溶液，分别在制备后0，2，4，6，8 h进样记录峰面积，并计算供试溶液中小檗碱含量，其RSD值分别为2.6%和2.4%（n=5），表明在8 h内结果稳定。
2.8 重复性考察取同一批号的5份样品进行平行实验，测得平均含量结果为39.125 4 mg·g-1，RSD值为3.5%。
2.9 回收率实验［2］精密量取已知含量的样品，准确加入对照品一定量，依法测定，计算回收率。结果见表1。
表1 回收率测定结果（略）
2.10 样品的测定结果测定4个批号样品。结果见表2。
3 讨论
3.1 供试品溶液的制备为了选取最佳的提取方法,以获得较高的含量,根据文献，实验用另一种方法提取,先用0.5%硫酸浸泡24 h，2次滤过，滤液再用石灰乳调pH至12.5，抽滤，滤液加10%氯化钠搅溶抽干，于80℃干燥即得,这种方法在提取过程中损失较大,测得的含量普遍较低,所以还是用甲醇超声提取较好［3］。
3.2 峰的分析每个样品图中在小檗碱峰出现以前都有几个小峰，而唯有空白样品中没有，估计是黄连中的其它几个生物碱，需进一步精制提取才能除去。
表2 样品的测定结果（略）
本方法快速准确，重现性好，可作为本复方制剂的质控方法，但在实际操作中应注意，小檗碱遇热易分解，应低温保存。
【参考文献】
［1］ 迟芳振，刘 群，李伟妮.黄柏胶囊中盐酸小檗碱的含量测定［J］.医药导报，2005，24 （9）:821.
［2］ 孙毓庆.分析化学，第4版，上册［M］.北京：人民卫生出版社，2004：12.
［3］ 欧绍敏. 正交试验法提取小檗碱的工艺考查［J］.北京：卫生职业教育，2005，23：10. 图1 空白对照（略）
图2 小檗碱对照品（略）
图3 样品（略）
2.7 稳定性考察分别精密量取同一对照品溶液以及同一供试品溶液，分别在制备后0，2，4，6，8 h进样记录峰面积，并计算供试溶液中小檗碱含量，其RSD值分别为2.6%和2.4%（n=5），表明在8 h内结果稳定。
2.8 重复性考察取同一批号的5份样品进行平行实验，测得平均含量结果为39.125 4 mg·g-1，RSD值为3.5%。
2.9 回收率实验［2］精密量取已知含量的样品，准确加入对照品一定量，依法测定，计算回收率。结果见表1。
表1 回收率测定结果（略）
2.10 样品的测定结果测定4个批号样品。结果见表2。
3 讨论
3.1 供试品溶液的制备为了选取最佳的提取方法,以获得较高的含量,根据文献，实验用另一种方法提取,先用0.5%硫酸浸泡24 h，2次滤过，滤液再用石灰乳调pH至12.5，抽滤，滤液加10%氯化钠搅溶抽干，于80℃干燥即得,这种方法在提取过程中损失较大,测得的含量普遍较低,所以还是用甲醇超声提取较好［3］。
3.2 峰的分析每个样品图中在小檗碱峰出现以前都有几个小峰，而唯有空白样品中没有，估计是黄连中的其它几个生物碱，需进一步精制提取才能除去。
表2 样品的测定结果（略）
本方法快速准确，重现性好，可作为本复方制剂的质控方法，但在实际操作中应注意，小檗碱遇热易分解，应低温保存。
【参考文献】
［1］ 迟芳振，刘 群，李伟妮.黄柏胶囊中盐酸小檗碱的含量测定［J］.医药导报，2005，24 （9）:821.
［2］ 孙毓庆.分析化学，第4版，上册［M］.北京：人民卫生出版社，2004：12.
［3］ 欧绍敏. 正交试验法提取小檗碱的工艺考查［J］.北京：卫生职业教育，2005，23：10. |
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发表于 2014-8-17 21:55:22
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