玉树獐牙菜对小鼠实验性肝损伤的保护及肝糖原的影响

amy54321

   作者：丁莉， 陈志， 金兰， 罗桂花

【摘要】  目的研究玉树獐牙菜对小鼠实验性肝损伤的保护作用。方法采用一次性腹腔注射四氯化碳花生油(0.12%)方法制作染毒小鼠模型,分别给予不同剂量玉树獐牙菜对模型动物进行干预性保护,测定不同实验组动物的生化指标。结果该药能明显降低四氯化碳引起的小鼠血清ALT,AST升高;提高肝糖原含量。结论玉树獐牙菜对小鼠实验性肝损伤具有一定的保护作用。

【关键词】  玉树獐牙菜; 四氯化碳; 肝损伤; 肝糖原

　　The Protective Effect of Herba Swertiae Mussotll on Experimental Liver Injury and the Glycogen Content of Liver in Mice

　　Abstract：ObjectiveTo investigate the protective effects of Herba Swertiae Mussotll liver injury in mice.  MethodsThe model of liver injury was induced by intraperitoneal injection of earthnut oil mixed with CCl4 (0.12%) and the serum and liver tissue were collected. Biochemical indexes examination were detected.ResultsHerba Swertiae Mussotll obviously inhibited the increase of serum ALT and AST caused by  CCl4; the glycogen content of liver was raised. ConclusionHerba Swertiae Mussotll can protect liver from damage when exposed to carbon tetrachloride.

　　Key words:Herba Swertiae Mussotll;  Carbon tetrachloride；  Liver injury；  Glycogen of liver
   
　　玉树獐牙菜Swertia mussotll Franch，藏茵陈的一种，属龙胆科（Gentianaceae）植物，生于海拔2 800～4 000 m的高寒地区，主要产于玉树一带。亦叫川西獐牙菜。一年生草本，全草入药，有清热解毒，舒肝利胆之功效，对急慢性黄疸型肝炎、病毒型肝炎和黄疸型肝炎有很好的治疗 效果，为肝炎特效藏药植物［1］。目前对藏茵陈的药理和化学性质的研究有诸多报道，而对川西獐牙菜的报道却很少。本文通过观察不同剂量的玉树獐牙菜对四氯化碳性肝损伤模型血清ALT，AST和肝糖原的含量影响，研究该药对动物化学性肝损伤的保护作用，为玉树獐牙菜在临床上应用提供一定的理论基础，同时为开发利用这一天然高寒植物资源提供科学依据。

　　1  材料与方法

　　1.1  材料

　　1.1.1  动物昆明种健康小鼠雌雄各一半,体重18～20 g(由兰州生物制品厂提供) 。

　　1.1.2  药品和试剂醇提取的玉树獐牙菜浸膏; 四氯化碳试剂(分析纯,在实验中应用花生油配制成含CCl40.12%的试剂,由广东西陇化工厂生产);食用鲁花花生油;吐温80;谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(ALS)试剂盒(由南京建成生物工程研究所提供)。

　　1.1.3  仪器与设备  721分光光度计;高速冷冻离心机;低温冰箱;电热水浴锅等。

　　1.2  方法

　　1.2.1  玉树獐牙菜药物的提取将该药粉碎称取1 kg加8 L食用酒精回馏煮2 h,滤出提取液,再加8 L的食用酒精重复3次合并提取液并浓缩(回收酒精)在60℃的烘箱里烘干,实验用时用花生油∶吐温80∶水为1∶1∶8配制生药：浓度为0.5， 0.17,0.06 g/ml。

　　1.2.2  小鼠的处理将70只小鼠在实验室饲养2 d后,按体重随机分为A组(正常对照组)、B组(CCl4肝损伤组)、C组(低剂量玉树獐牙菜组)、D组(中剂量玉树獐牙菜组)、E组(高剂量玉树獐牙菜组)。自由摄取常规颗粒状饲料和自来水,空白对照组不做任何处理,CCl4模型组用药物助溶剂以10 ml/kg剂量按体重给药1个星期,药物组高、中、低3个剂量组分别按6.4，2.1，0.75 g/kg体重灌胃给药6周。末次给药后2 h，除空白对照组的小鼠外,其它各组均按以10 ml/kg的剂量按体重一次性腹腔注射0.12%CCl4花生油溶剂,禁食不禁水,13 h后断颈取血,并取肝组织冷冻。

　　1.2.3  血清样处理在3 500 r/min，离心15 min，取上清液低温保存。

　　1.2.4  ALT活性测定参照改良赖氏法测定［2］血清中的ALT能与丙氨酸和α-酮戊二酸反应生成丙酮酸及谷氨酸, 丙酮酸与2,4-二硝基苯肼生成2,4-二硝基苯腙在碱性液中显棕红色,在505 nm处有最大吸收值。先用丙酮酸标准液作标准曲线,然后测定样品的吸光度,查阅标准曲线,并且乘以血清稀释倍数,计算ALT的活力。

　　1.2.5  AST活性测定参照改良赖氏法测定［2］血清中的AST能与天冬氨酸和α-酮戊二酸反应生成草酰乙酸和谷氨酸,草酰乙酸与2,4-二硝基苯肼生成2,4-二硝基苯腙在碱性液中显棕红色，在505 nm处有最大吸收值。同上法计算AST的活力。

　　1.2.6  肝糖原的测定 小鼠于末次给药30 min后,立即处死取出肝脏,经生理盐水空白漂洗,滤纸吸干,精确称取肝脏100 mg于试管内,加入8 ml三氯醋酸匀浆1 min,3 000 r/min,离心15 min。取上清液于另一支试管内,用蒽酮法于650 nm处测其吸光度测定肝糖原含量［3］。

　　1.2.7  数据处理所有实验结果用±s表示采用t检验。

　　2  结果

　　2.1  对血清中ALT和AST的含量的影响结果见表1。

　　表1  玉树獐牙菜提取液对CCl4肝损伤小鼠血清ALT和AST的影响（略）

　　与空白对照组比较,◇P＜0.05，◇◇P＜0.01；与模型组比较,*P＜0.05；n=14
   
　　从上表可看出，CCl4肝损伤模型组小鼠血清ALT和AST的活性明显高于空白对照组;与模型组比较,药物组小鼠血清ALT和AST的活性明显降低。　　2.2  对小鼠肝糖原含量的影响结果见表2。由表2可见,中、高剂量组肝糖原含量明显高于空白对照组和模型组,差异有显著性意义（P＜0.05）,提示玉树獐牙菜能增加小鼠肝糖原的含量。对照组与模型组相比，模型组小鼠肝糖元含量下降，说明肝损伤模型是成功的,CCl4可能破坏肝功能，使代谢下降。

　　表2  玉树獐牙菜不同剂量对小鼠肝糖元含量的影响（略）

　　与模型组比较，*P＜0.05；与对照组比较，△P＜0.05；n=14

　　3  讨论

　　3.1  玉树獐牙菜醇提物对小鼠CCl4化学性急性肝损伤的保护作用本实验表明CCl4对小鼠肝组织有损伤作用,表现在血清中ALT,AST的含量比空白对照组有显著性的增高。CCl4是一种典型的肝脏毒物,经肝脏微粒体细胞色素P-450激活后,发生均裂产生自由基(CCl3·)。一方面,CCl3可以攻击细胞膜上的磷脂分子,引起脂质过氧化,并与膜蛋白结合,破坏了膜的结构和功能;另一方面CCl4抑制内质网上的钙离子泵,使钙离子升高,从而激活肝细胞膜上的磷酸化酶,引起脂质过氧化,导致肝细胞膜损伤［4］。当肝细胞受损时，由于肝细胞内的转氨酶的浓度比血清中的高,胞浆内的ALT和AST因浓度差释放入血，造成高血清ALT和AST，故血清中的ALT和AST的含量是反映肝受损的敏感指标,也能反映肝细胞损伤的程度。CCl4可引起化学性肝损伤,导致肝细胞变性、坏死、间质细胞浸润,也能引起肝纤维化,其中成纤维细胞在肝纤维化中起着主要作用［4］。
     
　　玉树獐牙菜已知有8种酮,其中藏茵陈酮是新发现的,此外还有齐墩果酸、芒果苷、苦龙胆苷、当药黄素等其它有效成分［1］。 玉树獐牙菜醇提物明显降低CCl4引起的大鼠血清ALT和AST增高，有量效关系，表明玉树獐牙菜有效成分在一定程度保护肝细胞膜结构,减少自由基的攻击而减轻肝细胞的损伤。对实验性肝损伤具有较好的降酶、保护肝细胞和治疗作用。

　　3.2  玉树獐牙菜醇提物对小鼠肝糖原含量的影响肝脏是药物代谢的主要器官，肝对糖的存储、分布和调节起重要作用［5］。肝细胞有丰富的线粒体，为活跃的代谢活动提供足够的能量。肝细胞还有丰富的内质网、高尔基体和大量的核糖体，是肝脏合成血浆蛋白质及肝内参与物质代谢有关酶类的场所。此外肝细胞中还含有各种活性较高和完备的酶体系，所以在全身物质代谢及生物转化中起着特别重要的作用。
   
　　对照组与模型组相比较，模型组肝糖原含量下降，这可能与肝组织损伤而引起糖代谢改变有关。当肝细胞发生弥漫性严重损害时，肝糖原合成障碍及贮存减少，以多种途径影响糖代谢，主要表现为磷酸戊糖途径及糖醇解途径相对增强；糖有氧氧化及三羧酸循环运转不佳，肝中葡萄糖-6-磷酸酶活性增加，使肝糖原迅速分解为6-磷酸葡萄糖，并在催化下，生成葡萄糖补充血糖，导致模型组的肝糖原含量明显下降。
   
　　有文献报道［6］，肝糖原的合成过程大致如下：肝细胞内的6-磷酸葡萄糖在葡萄糖磷酸变位酶的催化下转化为1-磷酸葡萄，肝脏（及肾脏）还含有一些酶，能催化某些非糖物质如生糖氨基酸、乳酸及甘油等均转变成糖原。实验表明：药物组的肝糖原的含量明显高于模型组，可能是玉树獐牙菜促进了糖原合成途径或提高糖原储备能力，从而较好地控制肝细胞坏死和促进损伤肝细胞的修复，有效地保护肝细胞，避免有毒物质的侵害和自由基大量的产生，并有提高肝细胞糖原的合成或储备能力药理作用。不同剂量的玉树獐牙菜对急性化学性损伤小鼠都有保护作用，何种剂量的用药效价更好还有待进一步的研究。

【参考文献】
  　　［1］ 纪兰菊，廖志新，孙洪发.青海龙胆科部分藏药植物化学成分研究进展［J］.高原生物学集刊，2002：243.

　　［2］ 杨昌国，许 叶，江摩海，等.转氨酶测定标准化的意见［J］.临床检验杂志，1992，10（4）：170.

　　［3］ 陈 奇.中药药理研究方法学［M］.北京：人民卫生出版社，1993：661，725.

　　［4］ 龚峻梅，朴英杰.急性CCl4肝损伤的研究进展［S］.国外医学·生理，病理学与临床分册，2001，4（22）：3008.

　　［5］ 姚光弼.肝脏损伤的机制［J］.中华消化杂志，1998，18（4）：235.

　　［6］ 中华医学会传染病与寄生虫学分会，肝病学会.病毒性肝炎防治方案［J］.中华肝脏病杂志，2000，8（6）：324.