养血调经膏的质量标准研究

amy54321 · 发表于 2014-8-17 22:11:31

【摘要】  目的建立养血调经膏的质量标准。方法采用薄层色谱法对制剂中的丹参、人参、甘草进行定性，采用高效液相色谱法对制剂中的芍药苷进行定量。结果薄层色谱斑点清晰，阴性无干扰；芍药苷在0.187 2～0.936 0 μg范围内呈良好的线性关系，平均回收率为98.24%，RSD为0.85%。结论此法操作简单，可靠，可用于养血调经膏的质量控制。

【关键词】  养血调经膏；质量标准；高效液相色谱法；薄层色谱法

　　Study on the Quality Standard of Yangxue Tiaojing Electuary

　　Abstract：ObjectiveTo establish the quality control method of Yangxue Tiaojing Electuary.MethodsTLC method was used to identify Radix et Rhizoma Salviae Miltiorrhizae, Radix et Rhizoma Ginseng, Radix et Rhizoma Glycyrrhizae in Yangxue Tiaojing Electuary .The content of Paeoniflorin was determined in the prescription by HPLC.ResultsThe TLC spots developed were fairly clear ,and the blank showed no interference. HPLC method showed a good linearity between 0.187 2～0.936 0 μg with an average recovery of 98.24%,RSD was 0.85%.ConclusionThis method is dependable and easy to operate.It can be used to control the quality of Yangxue Tiaojing Electuary.

　　Key words：Yangxue Yiaojing Electuary;  Quality standard;  HPLC;  TLC

　　养血调经膏是由白芍、丹参、地黄、人参、银柴胡、甘草、黄芪等12味药制成的中药复方膏剂，具有补气养血、调经止带功效。用于气血两虚，身体瘦弱，腰膝酸软，月经不调，崩漏带下等症。方中丹参采用乙醇回流提取，其它药味采用水提。本实验采用薄层色谱法对方中丹参、人参、甘草进行了定性研究，采用高效液相色谱法对君药中的芍药苷进行了定量研究，建立了养血调经膏的质量控制方法。现将结果报道如下。

　　1  仪器与试药

　　养血调经膏（自制）；人参皂苷Rg1，Re，Rb1对照品，甘草对照药材，丹参酮ⅡA对照品，芍药苷对照品（均来自中国药品生物制品检定所）；乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。

　　硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂分厂）；岛津LC10ATvp高效液相色谱仪，岛津SPDATvp检测器。

　　2  方法与结果

　　2.1  薄层鉴别

　　2.1.1  丹参取本品70 g，加甲醇140 ml，振摇使混匀，超声30 min，再离心20 min，取上清液水浴蒸至稠膏状，加水20 ml搅拌稀释，加氯仿振摇提取4次（30，30，20，20 ml），合并氯仿液，水液备用（人参鉴别用），氯仿液挥干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。取缺丹参阴性样品70 g，同法制得缺丹参的阴性对照溶液。取丹参酮ⅡA对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法［1］实验，吸取对照品溶液10 μl，供试品溶液与缺丹参阴性对照溶液各20 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯（19∶1）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。结果见图1。

　　2.1.2  人参取上述丹参鉴别项下的水液用水饱和的正丁醇振摇提取3次（40，40，30 ml），合并正丁醇溶液，用氨试液洗涤3次，30 ml/次。弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水20 ml使溶解，通过D101大孔吸附树脂柱（10 g，内径1.5 cm），用水50 ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇50 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。取缺人参阴性样品70 g，同法制得缺人参的阴性对照溶液。另取人参皂苷Rg1，Re，Rb1对照品，加甲醇制成每毫升各含1 mg的混合溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法［1］试验，吸取对照品溶液10 μl，供试品溶液及阴性对照溶液各20 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以展开剂正丁醇-醋酸乙酯-稀氨水（550）（4∶1∶5）10℃以下放置过夜的上层溶液，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。结果见图2。

　　2.1.3  甘草取本品100 g，加甲醇200 ml，振摇使混匀，超声30 min，再离心20 min，取上清液水浴蒸至无醇味，加水30 ml搅拌稀释，用乙醚振摇提取2次，30 ml/次。弃乙醚液，水液用水饱和的正丁醇振摇提取3次，50 ml/次。合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，30 ml/次。弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加水溶解，上聚酰胺柱（3 g，内径1.5 cm），用水洗至无色，用50%乙醇100 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。取缺甘草阴性样品100 g，同法制得缺甘草的阴性对照溶液。另取甘草对照药材1.3 g，加水100 ml煎煮30 min，水煎液离心20 min后，用脱脂棉滤取上清液，滤液用乙醚振摇提取2次，按上述供试品溶液的制备方法制得对照药材溶液。照薄层色谱法［1］实验，吸取上述供试品溶液及阴性样品溶液各20 μl，对照药材溶液20  μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲苯-丙酮-甲酸（50∶25∶10∶1）溶液，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品药材色谱相应的位置上显相同的一个黄色主斑点，阴性无干扰。结果见图3。

　　2.2  含量测定

　　2.2.1  色谱条件与系统适应性色谱柱为C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）（迪马公司）；流动相为乙腈-1%醋酸（14∶86）；流速1.0 ml/min；检测波长230 nm；进样10 μl；理论板数为按芍药苷峰计不低于2 500。

　　图1  丹参TLC（略）

　　图2  人参TLC（略）

　　图3  甘草TLC（略）

　　2.2.2  对照品溶液的制备取芍药苷对照品约10 mg，精密称定，置20 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度摇匀，即得（每毫升含芍药苷0.05 mg）。　　2.2.3  供试品溶液的制备取本品3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250 w，频率33kHz）40 min，取出放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

　　2.2.4  线性关系的考察精密称取芍药苷对照品9.36 mg，置20 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密移取1，2，3，4，5 ml置25 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度。各精密吸取10 μl进样，按上述色谱条件测定，记录峰面积，并以峰面积为纵坐标，芍药苷进样量为横坐标作图，得一直线，以峰面积（Y）对芍药苷进样量（X）进行回归，得回归方程：Y=1 130 494.658X+13 721,r=0.999 1。实验结果表明，芍药苷在0.187 2～0.936 0 μg范围内呈良好线性关系。

　　2.2.5  精密度实验精密吸取同一芍药苷对照品溶液10 μl，重复进样5次，记录芍药苷峰面积值，其RSD值为1.40%，表明本法精密度良好。

　　2.2.6  稳定性实验取同一批样品制备的供试品溶液，每隔一定时间进样10 μl，记录芍药苷峰面积值，其RSD值为1.15%，结果表明供试品溶液在8 h内稳定。

　　2.2.7  重复性实验取同一批样品，制备5份供试品溶液，按上述色谱条件测定，记录芍药苷峰面积值，计算芍药苷含量，其RSD值为1.98%，表明本法重复性良好。

　　2.2.8  回收率实验采用加样回收法，取含量为0.383 mg/g的养血调经膏约1.5 g，精密称定，分别精密添加浓度为0.46 ，0.58 ,0.75 mg/ml的芍药苷对照品溶液1 ml再精密加入甲醇24 ml，密塞，按上述2.2.3方法制备供试品溶液，测定含量，计算回收率；平均回收率为98.24%，其RSD值为0.85%，结果表明本法具有良好的回收率。见表1。

　　表1  回收率测定结果（略）

　　2.2.9  样品测定取10批样品，分别制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，以上述色谱条件测定，记录芍药苷峰面积值，按外标法计算芍药苷含量。根据10批样品含量测定结果，暂定成品中含白芍以芍药苷（C23H28O11）计，每克不得少于0.2 mg。

　　图4  缺白芍阴性样品色谱图（略）

　　图5  芍药苷对照品色谱图（略）

　　图6  养血调经膏样品色谱图（略）

　　3  讨论

　　在人参的鉴别实验中，曾采用：（1）氯仿醋酸乙酯甲醇水（15∶40∶22∶10）10℃以下放置的下层溶液［1］（2）正丁醇醋酸乙酯水（4∶1∶5）［2］的上层溶液为展开剂，均为斑点不够清晰，故采用本法中的展开剂。

　　在甘草的鉴别实验中，由于甘草中含有黄酮类成分，具有酚羟基，故在供试液制备时采用了上聚酰胺柱，使其与不含酚羟基的成分分离［3］；用水洗脱，去除部分亲水性杂质，减少TLC斑点，有利于甘草有效成分的分离；曾采用：（1）氯仿甲醇水（13∶7∶2）10℃以下放置分层的下层溶液；（2）氯仿甲醇溶液（9∶1）为展开剂，均不如本法中的展开剂分离效果好，斑点清晰，故采用本法中的展开剂。

　　芍药苷流动相的选择，曾选用甲醇-水-冰醋酸（20∶80∶1）和乙腈水冰醋酸（10∶90∶1）为流动相，出峰时间较晚，效果均不理想，最后选用乙腈1%醋酸（14∶86）为流动相，其保留时间合适且峰型较好，达到基线分离，且阴性对照无干扰（图4～6），故选用乙腈1%醋酸（14∶86）为流动相。

【参考文献】
  　　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：69，479，527，附录VIB.

　　［2］吕开清，龙新华.中成药中的药材薄层色谱鉴别［M］.北京：人民卫生出版社，1997：20，167.

　　［3］肖崇厚.中药化学［M］.上海：上海科学技术出版社，1996：271，280.

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