薄层色谱法评价不同产地何首乌的品质

amy54321 · 发表于 2014-8-17 22:33:48

【摘要】  目的建立评价何首乌质量的薄层色谱指纹图谱。方法以石油醚(30～60℃)醋酸乙酯甲酸（15∶5∶1），三氯甲烷甲醇水（6.5∶2.25∶0.42，冰醋酸调pH=4）两种不同的展开系统对何首乌有效成分进行薄层色谱分离并定量扫描，以峰高进行聚类分析。结果所建立的薄层色谱指纹图谱可以区别不同产地的何首乌，聚类分析将10个何首乌样品分为4类。结论薄层色谱指纹图谱可快速有效地鉴别何首乌，并评价其质量。

【关键词】  何首乌；薄层色谱；指纹图谱；聚类分析

　　Abstract：ObjectiveTo establish thin-layer chromatography (TLC) fingerprint of Radix Polygoni Multiflori from different areas. Methods The effective components of Radix Polygoni Multiflori were separated by two kinds of mobile phase on TLC. Then the TLC chromatograms were scanned by CAMAG TLC scanner, and the results were analyzed by cluster analysis.ResultsThe Radix Polygoni Multiflori from different areas could be distinguished by TLC fingerprints. The 10 samples were divided to four kinds by cluster analysis. ConclusionThe TLC fingerprints can be used to classify and identify Radix Polygoni Multiflori rapidly and effectively.

　　Key words：Radix Polygoni Multiflori;  TLC;  Fingerprint spectrum;  Cluster analysis

　　中药何首乌Radix Polygoni Multiflori为蓼科植物何首乌（Polygonum multiflorum Thunb.）的干燥块根，具解毒、消痈、润肠通便之功效［1］。主要分布在广西、广东、贵州、四川、湖北、江苏、河南，此外，云、陕、陇、湘、赣、浙、闽等地也有分布［2］。何首乌的有效成分主要包括三大类：蒽醌类、2,3,5,4′四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷类和磷脂类化合物，其药理作用各有不同［3］。仅以一种或少数几种有效成分或指标成分难以全面控制药材及其制剂的质量。中药指纹图谱能够比较全面反映中药的特征，是对中药物质基础的整体表达，已逐步成为控制中药材及其制剂质量的手段之一。何首乌的指纹图谱研究多为HPLC法［4～6］，而薄层色谱由于操作简单，展开剂组成灵活，色谱后衍生方便，可以提供色彩斑斓的彩色图像，直观易辨等优点［7］，对HPLC法是一个很好的补充。

　　本实验在建立何首乌薄层色谱指纹图谱的基础上，进一步引入化学计量学方法对几个主产区何首乌进行质量评价。

　　1  器材

　　1.1  仪器与材料  薄层色谱扫描仪CAMAG TLC scanner 3（瑞士卡玛公司）；WD403C型紫外分析仪（北京市六一仪器厂）；硅胶G（青岛海洋化工厂）；实验中所用试剂均为分析纯。大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚、2,3,5,4′四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷对照品和何首乌对照药材均购自中国药品生物制品检定所。

　　1.2 材料　除广西田阳样品外，其余样品由本文第二作者于200406～10在何首乌主产区（广东、广西、贵州、重庆、湖北、河南、江西）采集。何首乌块根表面用清水洗净泥土后，以蒸馏水、去离子水分别快速淋洗3遍，60℃烘箱干燥，备用。结果见表1。

　　1.3  供试溶液与对照药材溶液的制备　称取不同产地何首乌粉末0.20 g（过40目筛），加甲醇50 ml，超声提取30 min，滤过，滤液于70℃水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至2 ml，微孔滤膜（0.45 μm）滤过，即得供试溶液。另称取何首乌对照药材粉末0.20 g，同法制成对照药材溶液。
　　
　　1.4  对照溶液的制备　精密称取2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷、大黄素、大黄酚、大黄酸对照品及大黄素甲醚对照品适量，分别用甲醇溶解并定容为浓度0.4，1，1，1 mg/ml和0.5 mg/ml的对照溶液，备用。精密量取大黄素、大黄酚、大黄酸和大黄素甲醚对照溶液各20 μl，混合为对照溶液I；另精密量大黄素和2,3,5,4′四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷对照溶液各10 μl，混合为对照溶液Ⅱ。

　　表1  何首乌样品来源（略）

　　*由广西中医学院刘寿养教授提供

　　1.5  薄层色谱实验条件　采用硅胶G板（0.4 % CMC-Na），分别以展开系统I：三氯甲烷甲醇水（6.5∶2.25∶0.42，冰醋酸调pH=4）和展开系统II：石油醚(30～60℃)醋酸乙酯甲酸（15∶5∶1）展开，紫外灯下（365 nm）检测并成像；采用双波长法（λs=300 nm，λR=370 nm）扫描。

　　1.6  数据分析　以10个不同产地样品为变量，薄层扫描获得的14个特征峰的峰高为变量参数，采用SPSS11.5软件进行聚类分析。　　2  结果

　　2.1  何首乌样品在两种展开系统下的薄层色谱荧光图像（见图1）。图1a中，何首乌在展距20～120  mm间检出多个斑点，其中亮蓝色斑点为2,3,5,4′四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷，近前沿处橙红色斑点为大黄素，与大黄素甲醚分离效果差。图1b中，何首乌的两种主要羟基蒽醌类化合物大黄素和大黄素甲醚得到了很好的分离，两种展开系统能够实现分离互补。

　　磷脂类化合物是何首乌的另一类有效成分，曾以磷脂酸（Laphosphatidylethanolamine，PA）和磷脂酰胆碱（Laphosphatidylcholine，PC）为对照对磷脂类成分进行研究，但未能观察到PA和PC的斑点。因此本研究仅以蒽醌和2,3,5,4′四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷类成分综合评价何首乌药材的内在质量。

　　图1  不同产地何首乌的薄层色谱图（略）

　　2.2  TLC指纹图谱的聚类分析  薄层色谱图无法区别差异较小的类别，聚类分析法［8］属于无监督的模式识别法，它是对一组尚无明确分类的样本，根据它们所表现的变量特征，按相似程度的大小加以归类，在模式空间中找到客观存在的类别。

　　广东德庆何首乌的薄层扫描轮廓图（见图2），有部分峰没有达到基线分离，峰面积受积分参数的影响，重现性较差，而峰高相对较稳定，故用峰高值进行分析。在展开系统 I 中选取10个共有峰（主要为苷类等极性较大的化学成分），见图2a；在展开系统 II 中选取4个共有峰（主要为游离蒽醌等极性较小的化学成分），见图2b。以14个共有峰的峰高为变量参数，进行聚类分析，结果见图3a。1～9号样品聚成的分支与10号广西田阳样品为平行支，亲缘关系远；1～9号样品又分为3支：1号广东德庆样品与5号广西靖西样品为亲缘关系密切的1支；6号重庆缙云山样品与9号贵州施秉样品为1支；2号河南济源、4号河南嵩山、8号湖北恩施、3号江西井冈山和7号四川峨眉山为1支。

　　图2  广东德庆何首乌的薄层扫描轮廓图（略）

　　3  讨论

　　经产地调查，广西靖西栽培品种是当地农民由广东高州引种，与德庆栽培种亲缘关系密切。广西田阳样品经广西中医学院刘寿养副教授鉴定为何首乌的变种棱枝何首乌。从薄层色谱指纹图谱可见靖西与德庆样品最相似，而广西田阳样品与其它样品存在较大差异。聚类分析也得到相同的结果。

　　聚类分析结果还表明除广西田阳外的9个何首乌样品的分类与其产区地理位置相吻合，提示各种源间的亲缘关系与地理分布相关。据报道，种质的不同、年限的差异及不同环境是影响何首乌有效成分含量的重要因素［6］，但陈万生等［5］认为何首乌化学成分的差异主要源于种质差异，环境因素的影响不大。何首乌化学成分与地理环境的关系还有待进一步研究。

　　图3  聚类分析图（略）

　　本研究还以2,3,5,4′四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷1个特征峰为变量参数进行聚类分析（见图3b），亲缘关系密切的广西靖西样品和广东德庆样品被分为两类；仅以大黄素及大黄素甲醚2个特征峰为变量参数进行聚类分析（见图3c）无法区别广西田阳变种。由此可见只选用一种或几种有效成分，无法正确评价何首乌的质量。本研究建立的薄层色谱指纹图谱综合了何首乌的多种有效成分，反映出不同产地样品间的细微差别，可用于何首乌药材的质量评价。

【参考文献】
  　　［1］国家药典委员会．中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：122.

　　［2］中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志［M］.北京：科学出版社，1998，25（1）：102.

　　［3］苏纬，郭群．何首乌的现代药理研究概况［J］.中草药，1997，28（2）：119．

　　［4］武政，张勉，张朝凤，等．36批何首乌药材质量的HPLC指纹图谱评价研究［J］.中国药学杂志，2006，4l（4）：257.

　　［5］陈万生，柴逸峰，张卫东，等．不同产地何首乌化学成分及品质的差异［J］.药学实践杂志，2000，18（5）：344.

　　［6］李正，杭悦宇，周义锋．中国主要产区何首乌以二苯乙烯苷含量为指标的种质评价［J］.林产化学与工业，2003，23（4）：38.

　　［7］谢培山，林巧玲．白芍总苷的薄层色谱指纹图谱实验研究［J］.中药新药与临床药理，2004，15（3）：171.

　　［8］胡育筑．化学计量学简明教程［M］.北京：中国医药科技出版社，1997：85．

		自动登录	找回密码
密码			立即注册

[药学] 薄层色谱法评价不同产地何首乌的品质