不同产地地黄中地黄苷A的含量比较

amy54321 · 发表于 2014-8-17 22:34:28

作者：张留记，屈凌波，赵玉芬

【摘要】  目的测定不同产地地黄中地黄苷A的含量。方法薄层扫描法，展开剂为氯仿甲醇水(7∶4∶0.5)，显色剂为10%硫酸乙醇，扫描波长为407。结果Y= 176.42X+ 52.8，r=0.996，线性范围：0.5～ 2.5 μg。平均回收率为99.33%，RSD=2.62%。结论河南温县、博爱、武陟产地黄中黄苷A的含量较高，与梓醇含量正相关。

【关键词】  不同产地；地黄；地黄苷A；薄层扫描法

　　Abstract：ObjectiveTo determine the content of rehmaionoside A in Rehmannia glutinosa Libosch from different habitats. MethodsTLC was used. Chloroform -methanol -water (7∶4∶0.5) was used as the mobile phase, with 10% solution of sulfuric acid in ethanol as visualizing regent. Scanning wavelength was 407 nm.ResultsY=176.42X+52.8,r=0.996. The linear range was 0.5～2.5μg. The average recovery was 99.33% (RSD=2.62%).ConclusionThe method is appropriate for the determination of the content of rehmaionoside A in Rehmannia glutinosa Libosch from different habitats.

　　Key words：Different habitats;  Rehmannia glutinosa libosch;  Rehmaionoside A;  TLC

　　地黄为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libosch．的干燥块茎，具清热凉血、养阴、生津之功效。1995年版《中国药典》收载含地黄制剂共71种，其中含生地黄制剂30种，占全部收载制剂的7.5%。地黄质量研究中，多以梓醇作为检测对象［1］，梓醇是一种环烯醚萜单糖苷，作为环烯醚萜双糖苷地黄苷A在地黄的炮制过程中比梓醇更加稳定，适宜选作地黄质量的控制指标之一。

　　本文利用薄层扫描法(TLC)测定了不同产地的地黄中地黄苷A含量。测定结果表明，不同产地的地黄中地黄苷A含量差别较大，说明制剂中使用地道药材的必要性，为控制地黄质量提供了另一可行测定方式。

　　1  仪器与试药

　　CAMAG Ⅱ薄层扫描仪(瑞士)，定量毛细管(美国)。RE52A 旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)，地黄苷A 对照品(自制，归一化法检测其纯度>98% )，所用试剂为分析纯。干燥地黄样品1999，2000，2001年采集陕西、河南、山东、山西地黄样品，经鉴定为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libosch的干燥块茎。

　　2  方法

　　2.1 供试品溶液的制备取同一批地黄(另取1份干燥失重法测水分)，切碎，精密称取10 g，加硅藻土适量研细，置索氏提取器中，加甲醇50 ml，加热回流提取3 h，滤过，回收甲醇，残渣用水溶解并定容于50 ml量瓶中，摇匀，精密吸取10 ml，用水饱和的正丁醇提取8次，10 ml/次，合并正丁醇提取液，减压回收正丁醇，残渣加甲醇溶解，并定容于10 ml量瓶中，作为供试品溶液［2］。

　　2.2  对照品溶液的制备精密称取地黄苷A 对照品适量，加甲醇制成0.5 mg/ml的溶液，作为对照品溶液。

　　2.3 薄层及色谱条件取硅胶G，加入适量0.1CMCNa，制成厚0.5 mm 的薄层板，自然干燥，备用。展开剂：氯仿甲醇水(7∶4∶0.5)；显色剂：10% 的硫酸乙醇溶液，90 ℃烘10 min，显色；扫描波长407 nm；扫描方式：单波长线性扫描。

　　2.4 线性关系考察精密吸取对照品溶液1，2，3，4，5 μl点于同一硅胶G 薄层板上，按上述薄层色谱条件展开，取出，晾干，显色，扫描测定。以点样量为横坐标X，峰面积为纵坐标Y，计算得线性方程为Y= 176.42X+ 52.8，r=0.996，线性范围：0.5～ 2.5 μg。

　　2.5 稳定性考察精密吸取地黄苷A 对照品溶液3 μl，点于硅胶G薄层板上，依法展开，取出，晾干，显色，每隔20 min扫描测定1次。结果峰面积RSD为1.22% (n=6)。结果表明：地黄苷A 在120 min内稳定。　　2.6 精密度考察

　　2.6.1  同板精密度考察精密吸取供试品溶液4 μl，对照品溶液2，4 μl分别点于同一硅胶G 薄层板上，按上述薄层色谱条件展开，显色，扫描，计算。结果地黄苷A 含量的RSD=1.62 %(n=5)。

　　2.6.2  异板精密度实验精密吸取供试品溶液4 μl，对照品溶液2，4 μl分别点于5块硅胶G 薄层板上，按上述薄层色谱条件，展开，显色，扫描，计算，结果地黄苷A含量的RSD=1.74 %( n=5)。

　　以上结果表明：地黄苷A 同板、异板精密度良好。

　　2.7  重现性实验精密称取同一批干燥药材5份，每份10 g，按上述供试品溶液处理方法处理，得供试品溶液。分别吸取上述溶液4 μl，对照品溶液2，4 μl，点于同一硅胶G 薄层板上，按上述薄层色谱条件展开，显色，扫描，计算。结果地黄苷A 含量的RSD =2.28% (n=5)。

　　2.8  加样回收率实验精密称取同一批干燥药材样品5份，每份5 g，加入地黄苷A对照品适量，按上述供试品溶液提取方法提取，定容于10 ml量瓶中。精密吸取上述溶液各4 μl，对照品溶液2，4 μl，点于同一硅胶G薄层板上，按上述薄层色谱条件展开，显色，扫描，计算。结果平均回收率为99.33%，RSD =2.62 %(n=5)。

　　2.9 地黄中地黄苷A 含量测定精密称取上述不同采集期地黄样品(另取1份干燥失重法测水分)，依法制备供试品溶液；精密吸取供试品溶液4 μl，对照品溶液2，4 μl，分别点于同一硅胶G 薄层板上。以氯仿甲醇水(7∶4∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，90 ℃烘10 min显色，扫描，测定，计算。结果见表1。

　　表1  不同产地地黄地黄苷A 含量（略）

　　以上结果可见，地黄中地黄苷A 含量以干燥品计，应不低于1.2 mg/g。

　　3  讨论

　　地黄苷A 对照品经UV,IR, HNMR,12CNMR光谱鉴定为环烯醚萜2葡萄糖苷，HPLC归一化法测其含量>98.9%。

　　显色剂曾选择碘蒸气，但碘显色需较长时间(30 min)且斑点荧光易消褪。选用10 % 硫酸乙醇溶液90℃烘10 min显色，斑点于407 nm 处有最大吸收且扫描无干扰。

　　对于干燥地黄样品中地黄苷A 含量从不同产地来看有较大差异，与不同来源的地黄梓醇的含量分析结果对照［3］，有一定的相关性，即梓醇含量较高的产品，其地黄苷A含量也较高,梓醇含量和黄苷A 含量正相关。

【参考文献】
  　　［1］张玲，徐新刚，时延增.等积波长薄层扫描法测定生地熟地中梓醇的含量［J］.中草药．1998，29(5)：308.

　　［2］刘长河，张留记，李更生.地黄中地黄苷A的含量测定［J］.中草药，2002，33（8）：706.

　　［3］刘长河，张留记，李更生，等.不同产地的地黄中梓醇含量比较［J］.中国医院药学，2002，22（5）：259.

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