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【摘要】 目的用高效液相色谱(HPLC)法测定参黄口服液中人参皂苷Rg1的含量。方法色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶,流动相为乙腈 0.05%磷酸 。结果人参皂苷Rg1在0.251~ 2.15 μg之间呈良好的线性关系 ;制剂中人参皂苷Rg1的平均回收率为98.73 % (RSD=2.7 % ) 。结论该方法简便、准确、分离效果好 ,无干扰 ,可用于参黄口服液的质量评价。
【关键词】 参黄口服液; 人参皂苷Rg1; 高效液相色谱
Abstract:ObjectiveTo establish the quantitative method of ginsenoside Rg1 in Shenhuang Oral Liquid by HPLC. MethodsThe column was packed with 5 μm Diamonsil C18 stationary phase. The mobile phase consisted of acetonitrile-water.ResultsThe linear range was 0.251~ 2.15 μg.The average recovery was 98.73%(RSD was 2.7%).ConclusionThe method was convenient and accurate. It can te used as a method of quality evaluation for Shenhuang Oral Liquid.
Key words:Shenhuang Oral; Ginsenoside Rg1; HPLC
参黄口服液是以人参、黄芪、柴胡等8味药材制成的中药复方制剂,系中药6类新药,具有健脾益气、解郁提神的功效。方中人参为主药,本实验以高效液相色谱法对参黄口服液中人参皂苷Rg1进行含量测定研究。
1 仪器与试剂
仪器:高效液相色谱仪:日本岛津公司(LC-2010A),乙腈为色谱纯,Dikma 公司。对照品人参皂苷Rg1(批号0703-200118),为中国药品生物制品检定所提供。
2 方法与结果
2.1 色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;Dikma(5 μm,150 mm×4.6 mm);流动相为乙腈0.05%磷酸(20∶80);检测波长203 nm。
2.2 对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rg1对照品适量,加甲醇制成每毫升含人参皂苷Rg1 0.2 mg的溶液,即得。
2.3 供试品溶液制备 精密量取本品10 ml,置分液漏斗中,用水饱和的正丁醇提取3次,10 ml/次,合并正丁醇液,用氨试液洗涤2次,10 ml/次,弃去氨试液,再用正丁醇饱和的水洗涤2次,10 ml/次 ,取正丁醇液蒸干,残渣加1%氢氧化钠溶液2 ml使溶解,置已处理好的D101大孔吸附树脂柱(直径1 cm,长10 cm)上,用1%氢氧化钠溶液50 ml洗脱,再用水50 ml洗脱,继用40%甲醇50 ml洗脱,最后用80%甲醇80 ml洗脱,收集80%甲醇洗脱液,蒸干,残渣加甲醇溶解并转移至5 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl,注入液相色谱仪,得到参黄口服液的色谱分离图。见图1。
2.4 精密度实验取人参皂苷Rg1对照品溶液,按样品测定法测定,共进样5次,结果RSD=0.7%。结果表明,本法的精密度良好。 2.5 线性关系考察精密称取人参皂苷Rg1对照品10.75 mg,置50 ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,再精密吸取对照品溶液1.0,2.5,5.0,7.5,10.0 ml分别置于10 ml量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀,分别精密量取上述对照品溶液各10 μl,注入液相色谱仪,以峰面积为纵坐标,以进样量为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程为y=2E+06x+3 724,r=1。
结果表明,人参皂苷Rg1在0.251~ 2.15 μg范围内呈良好的线性关系。
a对照品 b参黄口服液样品
图1 参黄口服液HPLC图(略)
2.6 稳定性实验 取样品供试溶液,每隔1 h测定1次,共测定6 h,结果6次测定的含量均值为0.428 ml/支,RSD为0.8%。
2.7 重复性实验取同一批样品,按含量测定方法测定6次。6次测定的RSD=0.9%,结果表明,本法的重复性良好。
2.8 回收率实验[1]分别精密最取已知含量的同一批供试品6份,每份5 ml,分别精密加入对照品溶液各1 ml ,按样品项下方法进行测定,结果平均回收率为98.73%,RSD=2.7%。结果见表1。
2.9 专属性取相当于处方量1/10药材,按【制法】制成缺人参的阴性样品。取样品,对照品及阴性样品按含量测定方法实验,结果在与对照品相同保留时间未见色谱,本法的专属性好。色谱图如图2。
表1 回收率实验结果(略)
2.10 样品测定结果取3批供试品按含量测定方法进行实验,3批样品的含量分别为:0.422,0.432,0.425 mg/支。
按以上含量测定方法进行回收率实验表明,含量测定方法的回收率较好,采用的方法精密度高;稳定性实验表明,样品供试溶液的稳定性较好;重复性实验表明,重复性较好;线性实验表明,在0.251~2.51μg 浓度范围内浓度和峰面积线性关系好;专属性实验表明,阴性样品无干扰,该方法的专属性好。
图2 阴性样品色谱图(略)
3 讨论
实验中采用大孔吸附树脂柱对样品进行处理,可使人参中有效成分得到良好的提取,同时,流动相中加入少量磷酸,可使其中的皂苷类成分得到有效分离。
【参考文献】
[1] 国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部[S].北京:化学工业出版社,2005:附录115. |
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