黄芪桂枝五物汤中黄芪不同配伍对黄芪皂苷含量变化的影响

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        作者：娄桂芹，边洪荣，李胜兵

【摘要】  目的考察黄芪桂枝五物汤中桂枝、白芍、大枣、生姜与黄芪不同配伍的共煎水提液中，各因素对黄芪中黄芪皂苷提取率的影响，并确定因素及因素交互作用的影响程度。方法应用正交设计法对影响因素进行考察，以不同配伍中去除黄芪为对照，采用紫外分光光度法测定含量。结果从单因素角度考虑，白芍对黄芪皂苷提取率影响最大，其次为大枣、桂枝。因素交互作用中，生姜和大枣的协同作用对黄芪皂苷提取率影响最大，次为白芍和桂枝、白芍和生姜、白芍和大枣。结论统计分析表明，仅生姜和大枣的协同作用对黄芪皂苷提取有显著影响（P＜0.05）。

【关键词】  黄芪皂苷； 正交设计； 黄芪桂枝五物汤

　　Influence of the Different Combination of Huangqi on the Quantity of Huangqi Playodin in Huangqi Guizhi Wuwu Tang

　　　Abstract：ObjectiveTo study the influence of the factors to the extraction rate of saponins from hot water extraction of herb composition in HuangQi Guizhi WuWu Tang containing Ramulus Cinnamomi, Raidix Paeoniae Alba, Fructrs Jujubae, Rhizoma Zingiberis Recens and Radix Astragali and to decide the facts and the interacts among factors.MethodsThe influence factors were explored with orthogonal design method and the astragalus-freed samples in different formula as control. The content was detected by UV-Vis spectrophotometer.ResultsWhen considered with single factor, Raidix Paeoniae Alba affected on the extraction rate of tragaloside most, followed by Fructrs Jujubae and Ramulus Cinnamomi. In the interact among factors, the concordinated action by Rhizoma Zingiberis Recens and Fructrs Jujubae affected on the extraction rate of tragaloside most, then Raidix Paeoniae Alba and Ramulus Cinnamomi, Raidix Paeoniae Alba and Rhizoma Zingiberis Recens, Raidix Paeoniae Alba and Fructrs Jujubae. ConclusionStatistic analysis showed that only the concordinated action between Rhizoma Zingiberis Recens and Fructrs Jujubae obviously affected the extraction rate of tragaloside （P<0.05）.

　　Key words：Astragaloside；  Orthogonal；  HuangQi Guizhi WuWu Tang
   
　　黄芪桂枝五物汤出自《金匮要略·血痹虚劳病·脉证并治》篇，其药物组成为黄芪、桂枝、白芍、生姜、大枣。具有益气和血、调和营卫之功。主要用于治疗血痹虚劳之证［1］，为历代医家推崇的著名方剂之一。
   
　　本实验采用香草醛-浓硫酸比色法［2］，引入正交设计，合理安排方中桂枝、白芍、大枣、生姜与黄芪配伍。测量水煎液中黄芪皂苷煎出率，探讨各因素及两两交互作用对黄芪皂苷提取的率影响程度。

　　1  药品与材料

　　1.1  仪器FA-4000电子天平（上海精科天平厂），UT1800紫外分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。

　　1.2  试剂黄芪甲苷标准品（中国药品生物制剂检定所）98%硫酸、无水乙醇、正丁醇、均为分析纯；72%硫酸、10%香草醛无水乙醇为自制；香草醛(天津市光复精细化工研究所)。

　　1.3  中药材黄芪（蒙古黄芪）、白芍（安徽白芍）、桂枝（广西桂枝）、干姜（四川干姜）均购自药店，大枣为市售，经药学系生药教研室鉴定，符合2000版《中国药典》标准。

　　2  方法与结果

　　2.1  实验方案为考察白芍、桂枝、生姜、大枣及两两协同作用对黄芪皂苷煎出率的影响，合理安排各因素、因素水平，采用正交设计安排试验。设置四个因素、两水平；以黄芪皂苷提取率作为考察指标。选用L16（215）做表头设计：表2～3。

　　2.1.1  因素水平见表1。

　　表1  因素水平（略）

　　2.1.2  表头设计L16（215）正交表见表2。

　　表2  表头设计（略）　　2.2  标准溶液的制备［2］精密称取105℃下干燥恒重的黄芪甲苷标准品0.004 8 g，用无水乙醇定容至10 ml，摇匀，备用。精密量取上述标准溶液0.00，0.05，0.10，0.15，0.20，0.25，0.30  ml。分别补充无水乙醇至0.6 ml，加入新鲜配制的8%香草醛无水乙醇溶液0.75 ml，摇匀，于冰水浴中缓缓加入72%硫酸7.5 ml，摇匀，放入62℃恒温水浴锅中保温20 min，冰水浴冷却放至室温，摇匀，置比色皿中，1号管做空白对照，在538nm处测得吸光度。得线性方程 y = 1.030 7x + 0.007 3,r=0.999 3。

　　2.3  黄芪皂苷提取取药品准确称重，加10倍量水，浸泡过夜，煮沸，水浴回流2 h，倾出水煎液。再加入8倍量水，煮沸，水浴回流1 h。合并两次水煎液，在电热炉上常压浓缩至约50 ml，加入90%乙醇200 ml ，冷藏过夜。抽滤，去除药渣及沉淀物。减压蒸馏除去乙醇至无醇味，同时对乙醇回收。得水提液50 ml，用饱和水正丁醇萃取4次，每次1/2水提液体积；合并4次正丁醇液，定容至100 ml，摇匀。精密吸取上述正丁醇液3 ml，水浴挥干正丁醇，无水乙醇溶解定容至10 ml。

　　2.4  供试品处理按表2称取药品，同时对应称取去除黄芪作空白对照，平行操作。样品处理方法同2.3项。精密吸取定容液，按标准溶液制备项下，自“分别补充无水乙醇至0.6ml……”，得吸光度值。结果见表3。

　　2.5  数据处理结果见表4。

　　表3  不同正交配伍黄芪皂苷的吸光度值（略）

　　表4  黄芪皂苷提取率（略）

　　3  讨论
   
　　本实验首次尝试用正交设计法［3］对黄芪桂枝五物汤中有效成分进行研究，正交设计法是按正交设计表，将一个复方中的药物（因素）和剂量（水平）按一定规律设置，以最少的实验次数，得到最佳的实验结果，是目前药理实验中常用的一种设计方法。该方法以每味药作为一个因子，以给药剂量为水平。
   
　　由表4数据可知，黄芪与各药配伍混煎时，黄芪皂苷提取率大多比黄芪单煎高。如：黄芪+白芍+大枣、黄芪+白芍+生姜、黄芪+白芍；少数与单煎时黄芪皂苷提取率相当。如：黄芪+生姜+大枣、黄芪+桂枝+大枣。对正交表直观分析表明：白芍、大枣、生姜、桂枝对黄芪皂苷煎出率的影响依次减小。两两交互作用中，生姜+大枣对黄芪皂苷提取率影响最大；其次，白芍+大枣、白芍+生姜、白芍+桂枝；桂枝+大枣、桂枝+生姜影响效果最小。
   
　　正交实验数据统计分析表明，仅生姜+大枣对黄芪皂苷煎出率有显著影响（P＜0.05）,具有统计学意义。
   
　　这种结果的原因可能是由于两两因素交互作用时，两个因素间发生复杂的化学反应，或因素间的作用使对方成分煎出受影响，进而增加或降低黄芪皂苷提取率。各配方的黄芪皂苷提取有较大差异，此又进一步说明，中药汤剂在制备过程中，各配伍药材所含化学成分之间在其加热条件下发生了复杂的理化反应，这种复杂的理化反应正是黄芪皂苷煎出率发生变化的主要原因。

【参考文献】
  　　［1］ 黄仰模.金匮要略讲义［M］.北京：人民卫生出版社,2003：71.

　　［2］ 李 江，李颖倩.黄芪甲苷分析方法研究概况［J］.北京中医，2004,(4):50.

　　［3］ 王瑞辉.中医药科研方法［M］.西安：第四军医大学出版社，2004：88.