羟基积雪草苷与积雪草苷对LPS诱导大鼠发热模型的影响

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         作者：章卓 万敬员 罗福玲 李洪钟 周岐新

【摘要】  目的观察积雪草苷和羟基积雪草苷的解热作用，并比较两者在解热作用上的差异。方法将80只SD大鼠随机分为空白组、模型组（LPS 100 μg/kg）、溶酶对照组（羧甲基纤维素钠）、积雪草苷5，15，45 mg/kg、羟基积雪草苷10，20，40 mg/kg、对乙酰氨基酚50 mg/kg组。腹腔注射LPS（100 μg/kg）建立SD大鼠发热模型,绘制各组平均体温变化曲线，比较测量体温与基础体温差值ΔT。 结果羟基积雪草苷（10，20，40 mg/kg）与积雪草苷(5,15,45 mg/kg)对LPS诱导的SD大鼠发热模型体温有显著的降温作用(P＜0.05）。结论 羟基积雪草苷和积雪草苷对LPS诱导的SD大鼠发热模型的体温均有降温作用，积雪草苷在某些时间点（如LPS注射5 h后）降温效应优于羟基积雪草苷。

【关键词】  羟基积雪草苷； 积雪草苷； 脂多糖； 大鼠； 发热
　　　The Effect of Asiaticoside and Madecassoside on LPS- Induced Febrile Response in Rats

　　　Abstract:ObjectiveTo observe  whether asiaticoside(AS) or madecassoside (MD) can reduce the fever induced by LPS, and compare the difference of the hypothermia effect between AS and MD. Methods80 rats were randomly divided into AS 5,15, 45 mg/kg, MD10,20, 40 mg/kg,positive control group,model group, normal group and vehicle group, intraperitoneal LPS(100 μg/kg) induced fever in rats.The mean curves of change rate of colonic temperature induced by LPS were observed and the febrile response in various groups were compared.ResultsThe febrile responses are markedly triphasic or biphasic temperature curve in SD rats model group.Both MD and AS induced the fever significantly(P＜0.05).ConclusionMD and AS have the effect of hypothermia in SD rats fever model which induced by LPS and AS are surpass to MD in few time point.

　　Key words：Asiaticoside；  Madecassoside；  Lipopolysaccharide；  Rats；  Febrile
   
　　积雪草作为传统药物治病已有数千年的历史，广泛分布于长江流域以南各地；在亚洲的马来西亚、印度、非洲的毛里求斯和马达加斯加等地也有广泛分布。民间主要用于治疗外感风热、胸膜炎、小便短赤、泌尿系感染、断肠草中毒、脱肛等。羟基积雪草苷(madecassoside ，MD)和积雪草苷（asiaticoside，AS）均为积雪草（centella）提取物三萜皂苷的主要成分之一。本实验设计主要分析积雪草的两种提取物对LPS诱导的SD大鼠发热模型体温的影响，并比较这两种提取物对体温的影响有无差异。

　　1  材料

　　1.1  动物SD大鼠，180～220 g，10周龄，均为清洁级雄性，重庆医科大学动物中心提供［合格证号：SYXK(渝)2002007］。

　　1.2   试剂和器材AS(广西昌洲天然产物开发有限公司，批号20061478,纯度95%)；MD(广西昌洲天然产物开发有限公司，批号20060518,纯度90%)；对乙酰氨基酚［中国医药（上海）集团化学试剂有限公司，批号20050578］；脂多糖（Escherichcacoli endotoxin 055：B5,L2880,Sigma）；MC-107 BW型电脑数字型体温计，欧姆龙（大连）有限公司。

　　2  方法

　　2.1  分组与给药将SD大鼠随机分为空白组、模型组（LPS100 μg/kg）、溶酶对照组（羧甲基纤维素钠）、积雪草苷5，15，45 mg/kg组、羟基积雪草苷10，20，40 mg/kg组、对乙酰氨基酚50 mg/kg等10组，每组8只。积雪草苷和羟基积雪草苷均溶解于0.5%羧基纤维素钠。药物组连续灌胃3 d，溶酶对照组给予等量羧甲基纤维素钠，空白组和模型组给予等量蒸馏水。

　　2.2  体温测定将大鼠按组分装于10只鼠笼中饲养，动物自由饮食饮水，在清洁、消毒、湿度55%，室温(24±2)℃环境中饲养2 d，保持每天光照12 h （8：00～20：00）。实验前6 h禁食不禁饮，实验时让动物排空大便。在安静，室温固定于25℃的房间下测定体温，空调维持室温。每次测量体温前将少许石蜡油涂在大鼠肛门处，防止插伤，每天保持在同一时间和地点测量体温，测量时在体温表2.5 cm处作一标记线，保证每次测量深度一致。测量时动作尽量轻柔防止体温应激性升高。连续测3 d基础体温，以平均体温为基础温度值，并描绘正常体温曲线，体温超过38℃或连续两次体温相差0.5℃的动物剔除不用。在实验前30 min，连续测3次体温，1次10 min，剔除应激的高体温数值。连同基础平均值作为基础描计点。

　　2.3   模型的建立和观察指标实验前6 h禁食不禁水，模型组、药物组、溶酶对照组于末次灌胃后1次性腹腔注射LPS 100 μg/kg，刺激后测量1次/30 min，连续监测6 h。绘制各组各时间点平均体温变化曲线，最大上升高度ΔT（发热时的体温和基础体温的差值,℃）变化。

　　2.4   统计学方法实验数据以±s表示，数据分析组内比较采用单因素方差分析，组间比较采用t检验。P<0.05表示有统计学差异。统计学数据用SPSS12.0软件分析处理。         作者：章卓 万敬员 罗福玲 李洪钟 周岐新

【摘要】  目的观察积雪草苷和羟基积雪草苷的解热作用，并比较两者在解热作用上的差异。方法将80只SD大鼠随机分为空白组、模型组（LPS 100 μg/kg）、溶酶对照组（羧甲基纤维素钠）、积雪草苷5，15，45 mg/kg、羟基积雪草苷10，20，40 mg/kg、对乙酰氨基酚50 mg/kg组。腹腔注射LPS（100 μg/kg）建立SD大鼠发热模型,绘制各组平均体温变化曲线，比较测量体温与基础体温差值ΔT。 结果羟基积雪草苷（10，20，40 mg/kg）与积雪草苷(5,15,45 mg/kg)对LPS诱导的SD大鼠发热模型体温有显著的降温作用(P＜0.05）。结论 羟基积雪草苷和积雪草苷对LPS诱导的SD大鼠发热模型的体温均有降温作用，积雪草苷在某些时间点（如LPS注射5 h后）降温效应优于羟基积雪草苷。

【关键词】  羟基积雪草苷； 积雪草苷； 脂多糖； 大鼠； 发热
　　　The Effect of Asiaticoside and Madecassoside on LPS- Induced Febrile Response in Rats

　　　Abstract:ObjectiveTo observe  whether asiaticoside(AS) or madecassoside (MD) can reduce the fever induced by LPS, and compare the difference of the hypothermia effect between AS and MD. Methods80 rats were randomly divided into AS 5,15, 45 mg/kg, MD10,20, 40 mg/kg,positive control group,model group, normal group and vehicle group, intraperitoneal LPS(100 μg/kg) induced fever in rats.The mean curves of change rate of colonic temperature induced by LPS were observed and the febrile response in various groups were compared.ResultsThe febrile responses are markedly triphasic or biphasic temperature curve in SD rats model group.Both MD and AS induced the fever significantly(P＜0.05).ConclusionMD and AS have the effect of hypothermia in SD rats fever model which induced by LPS and AS are surpass to MD in few time point.

　　Key words：Asiaticoside；  Madecassoside；  Lipopolysaccharide；  Rats；  Febrile
   
　　积雪草作为传统药物治病已有数千年的历史，广泛分布于长江流域以南各地；在亚洲的马来西亚、印度、非洲的毛里求斯和马达加斯加等地也有广泛分布。民间主要用于治疗外感风热、胸膜炎、小便短赤、泌尿系感染、断肠草中毒、脱肛等。羟基积雪草苷(madecassoside ，MD)和积雪草苷（asiaticoside，AS）均为积雪草（centella）提取物三萜皂苷的主要成分之一。本实验设计主要分析积雪草的两种提取物对LPS诱导的SD大鼠发热模型体温的影响，并比较这两种提取物对体温的影响有无差异。

　　1  材料

　　1.1  动物SD大鼠，180～220 g，10周龄，均为清洁级雄性，重庆医科大学动物中心提供［合格证号：SYXK(渝)2002007］。

　　1.2   试剂和器材AS(广西昌洲天然产物开发有限公司，批号20061478,纯度95%)；MD(广西昌洲天然产物开发有限公司，批号20060518,纯度90%)；对乙酰氨基酚［中国医药（上海）集团化学试剂有限公司，批号20050578］；脂多糖（Escherichcacoli endotoxin 055：B5,L2880,Sigma）；MC-107 BW型电脑数字型体温计，欧姆龙（大连）有限公司。

　　2  方法

　　2.1  分组与给药将SD大鼠随机分为空白组、模型组（LPS100 μg/kg）、溶酶对照组（羧甲基纤维素钠）、积雪草苷5，15，45 mg/kg组、羟基积雪草苷10，20，40 mg/kg组、对乙酰氨基酚50 mg/kg等10组，每组8只。积雪草苷和羟基积雪草苷均溶解于0.5%羧基纤维素钠。药物组连续灌胃3 d，溶酶对照组给予等量羧甲基纤维素钠，空白组和模型组给予等量蒸馏水。

　　2.2  体温测定将大鼠按组分装于10只鼠笼中饲养，动物自由饮食饮水，在清洁、消毒、湿度55%，室温(24±2)℃环境中饲养2 d，保持每天光照12 h （8：00～20：00）。实验前6 h禁食不禁饮，实验时让动物排空大便。在安静，室温固定于25℃的房间下测定体温，空调维持室温。每次测量体温前将少许石蜡油涂在大鼠肛门处，防止插伤，每天保持在同一时间和地点测量体温，测量时在体温表2.5 cm处作一标记线，保证每次测量深度一致。测量时动作尽量轻柔防止体温应激性升高。连续测3 d基础体温，以平均体温为基础温度值，并描绘正常体温曲线，体温超过38℃或连续两次体温相差0.5℃的动物剔除不用。在实验前30 min，连续测3次体温，1次10 min，剔除应激的高体温数值。连同基础平均值作为基础描计点。

　　2.3   模型的建立和观察指标实验前6 h禁食不禁水，模型组、药物组、溶酶对照组于末次灌胃后1次性腹腔注射LPS 100 μg/kg，刺激后测量1次/30 min，连续监测6 h。绘制各组各时间点平均体温变化曲线，最大上升高度ΔT（发热时的体温和基础体温的差值,℃）变化。

　　2.4   统计学方法实验数据以±s表示，数据分析组内比较采用单因素方差分析，组间比较采用t检验。P<0.05表示有统计学差异。统计学数据用SPSS12.0软件分析处理。　　3  结果
   
　　见表1～2，图1～5。

　　表1  积雪草苷对LPS（100 μg/kg）诱导SD大鼠发热体温的影响 （略）
　
　　同模型组比较，★P＜0.05；同空白组比较，▲P＜0.05；n=8

　　表2  羟基积雪草苷对LPS（100 μg/kg）诱导SD大鼠发热体温的影响（略）

　　同模型组比较，★P＜0.05;同空白组比较，◆P＜0.05；n=8

　　图1  积雪草苷对LPS（100 μg/kg）诱导SD大鼠发热体温的影响（略）

　　图2  羟基积雪草苷对LPS（100 μg/kg）诱导SD大鼠发热体温的影响（略）

　　4  讨论
   
　　积雪草始载于《神农本草经》，列为中品，具有清热利湿、解毒消肿的功效，临床上多用于治疗跌打损伤、皮肤病等。积雪草苷和羟基积雪草苷均为积雪草（centella）提取物三萜皂苷的主要成分之一［1］， 目前研究较多，但是两者对发热的研究尚未见报道，本实验针对其清热解毒的特性观察其有无解热作用并对其解热效应作一简单比较。

　　图3  积雪草苷和羟基积雪草苷高剂量组对LPS诱导SD大鼠体温影响比较（略）

　　图4  积雪草苷和羟基积雪草苷中剂量组对LPS诱导SD大鼠体温影响比（略）

　　图5  积雪草苷和羟基积雪草苷低剂量组对LPS诱导SD大鼠体温影响比较（略）
   
　　发热是临床常见的症状之一，引起发热的原因很多，脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）是诱导发热的常见原因。LPS是革兰阴性菌内毒素（endotoxin,ET）的活性成分。目前LPS诱导的大鼠发热模型比较常用。LPS引起发热是由血液循环中内热源（endogenous,EP）所介导的，LPS通过激活单核巨噬细胞，诱生EP释放入血而发热。影响大鼠发热的因素很多，其中室温、LPS的剂量、动物对LPS的反应最为常见［1］。LPS致发热的剂量从10～250 μg/kg不等，微量的（0.1 μg/kg）的LPS就能够引起剂量依耐性发热，LPS致发热表现为双相热或三相热，降低剂量则表现为单相热，反复注射易出现耐受性。一般常用的剂量为10，20，100 μg/kg［2］。本实验经预试后选择的剂量是100 μg/kg。室温对大鼠的影响很大，适宜温度为（22±2）℃。为了保证室温的稳定性，本实验在空调房间进行，用空调调整室温，室温维持在（25±2）℃，比文献室温略微偏高。
   
　　结果显示大鼠注射LPS（100 μg/kg）后引起的发热为多相热，主要为三相热，并伴有寒战、精神萎靡、轻微腹泻等症状。正常组大鼠注射生理盐水后0.5～1 h出现轻微应激性体温升高但不明显。由于第一相热是由应激和大鼠的个体差异引起，因此一相热不作比较。模型组在4，6 h出现明显的发热峰，最大峰值为2.008℃。积雪草苷高、中、低剂量组和羟基积雪草苷高、中、低剂量组均明显降低体温（P＜0.05），对三相热都有降温作用，对第二相降温效应最明显（见图1～2）。在多数时间点上两者降温效应无明显差异（P＞0.05）。大剂量积雪草苷在对二相热降温作用优于羟基积雪草苷。中剂量的积雪草苷在2～3 h ΔT小于羟基积雪草苷，但对二相和三相热上无明显差异，小剂量羟基积雪草苷ΔT小于积雪草苷，但无统计学意义（见图3～5）。结论显示羟基积雪草苷和积雪草苷呈剂量依耐性降温，是有效的解热药物，大剂量积雪草苷在对三相热上优于羟基积雪草苷。其机制值得进一步研究。

【参考文献】
  　　［1］ 赵宇新，李曼玲，冯伟红，等.积雪草的研究进展［J］.中国中医药信息杂志，2002，9（8）：81.

　　［2］ Alla Y.Rudaya,Alexandre A,Steiner,Jared R.Robbins et al.Thermoregulatory Responses To Lipopolysaccharide In The Mouseependence On The Dose And Ambient Temperature［J］.Am J Physlol Regulatory Integrative Comp-Physiol，2005，289：1244.

　　［3］ Andre J A Romanovsky,Vladimir A Kulchitsky,Chridtopher T Simons,et al.Methodology Of Fever Research:Why Are Polyphasic Fevers Ofen Thought To Be Biphasic［J］.Am J Physiol,1998,275(1)：R332.