细辛与维拉帕米镇痛协同作用的实验研究

amy54321

  【摘要】  目的研究细辛与维拉帕米的镇痛协同作用，为临床联合用药提供理论依据。方法采用小鼠醋酸扭体实验及热板法致痛实验观测实验药物镇痛作用，并用神经盒、多媒体MS-302系统观察其对蟾蜍坐骨神经动作电位的影响。结果细辛及A-V复方制剂对醋酸致小鼠腹痛、热板法致小鼠足痛均有明显的镇痛作用并能抑制蟾蜍坐骨神经动作电位的传导。维拉帕米有弱的镇痛作用，无坐骨神经动作电位阻滞作用。A-V复方制剂的镇痛及抑制神经动作电位传导作用均大于其组分细辛和维拉帕米。结论细辛和维拉帕米有镇痛协同作用。
【关键词】  细辛； 维拉帕米； 镇痛作用

　　Research of Analgesia Synergism of Asarum and Verapami

　　Abstract：ObjectiveTo research synergetic analgesic effect of Asarum and Verapamil, in order to apply theoretical evidence for clinical administration.MethodsAdopt acetic acid turning body experiment and hot board method inducing pain experiment to observe their synergetic effect, and the influence of action potential of toad sciatic nerve by nerve chamber,multi-media MS-302 system.ResultsAsarum and A-V compound have remarkable analgesic effect of the pain of mice induced by acetic acid turning body and the hot-plate test . Both can inhibit action potential transmission of toad sciatic nerve. Verpamil has faint analgesic effect but can not inhibit action potential transmission of toad sciatic nerve. A-V compound has greater effect of analgesia and inhabiting nerve action potential transmission than its components Asarum and Verapamil.Conclusion Asarum and Verapamil have analgesia synergism.

　　Key words：Asarum;  Verapamil;  Analgesia effect
   
　　细辛(Asarum)，又名小辛，细草，辽细辛，为马兜铃科植物。性味辛、温。具祛风散寒，通窍止痛，温肺化饮之功效。主要成分含挥发油，油中含丁香油酚甲醚，优藏茴香酮Eucarvone，大黄樟醚Safrole，β-蒎烯。细辛醚Asaricin，细辛酮Asaryl-Ketone。另含N-异丁基十二碳四烯胺及消旋去甲乌药碱等。现代中药药理手册记载［1］，细辛挥发油腹腔注射有明显的中枢抑制作用，细辛醇浸剂对蛙坐骨神经丛、豚鼠皮内神经末梢及人舌黏膜均有局麻作用。近年来有资料报道钙拮抗剂对镇痛药具有协同作用［2］。因此，笔者研究了细辛和钙通道拮抗剂维拉帕米(verapamil)的镇痛协同作用，为临床联合用药提供理论依据。

　　1  材料

　　1.1  药品和试剂细辛（购于宜昌中心人民医院中药房）；Verapamil（江苏省连云港制药厂生产）； 硫化钠（仙桃市第一化工厂出品）；醋酸（沈阳试剂厂出品）。

　　1.2  动物昆明种小鼠；蟾蜍。

　　1.3  仪器超级恒温器，重庆试验设备厂制造；YSD-4药理、生理实验多用仪，蚌埠无线电二厂制造。

　　2  方法

　　2.1  对醋酸所致小鼠扭体反应的影响 用扭体法［3，4］：昆明种小鼠18～22 g，雌雄兼用，先用0.6%醋酸对小鼠腹腔注射，并记录15 min内扭体次数，以该扭体次数作为痛阈值，并以此挑选合格小鼠，凡15 min内扭体次数多于60次或少于10次者弃之不用。对符合标准的小鼠按扭体次数的多少依次编号，再按每6只痛阈值相近的小鼠作为一个配伍组，分别随机分配到4个不同的实验组：即对照组、细辛-维拉帕米（Asarum-Verapamil，A-V）复方组、4%细辛组、Verapamil组，使每个实验组均有10只小鼠，共40只。一周后，开始实验，实验前一天，用0.8%硫化钠对所有实验小鼠的腹壁脱毛，范围为2 cm×2cm。此为外用涂药部位。实验时将一定量的药液（约0.1 ml）涂于小鼠腹壁。40 min后，分别腹腔注射0.6%醋酸0.2 ml/只，同时记录小鼠出现扭体反应的潜伏期及15 min内扭体次数。统计处理，不同实验组之间的比较采取先进行方差齐性检验，方差齐则进行方差分析F检验，P值＜0.05，再进行两两比较。　2.2  对蟾蜍坐骨神经动作电位的影响蟾蜍，处死后，剖腹除去内脏，暴露腰椎两侧坐骨神经丛，钝性分离神经到小腿，立即放入任氏液中备用。记录神经动作电位：将神经放入神经盒中屏蔽，通过神经盒与多媒体MS-302系统连接，由实验模块进入，记录神经动作电位。波均设置为3。测量动作电位波的波幅APA与波宽APD。然后在神经上（刺激端与记录端之间）放加药的棉球（棉球大小尽量一致），所加药液量约0.05 ml。于加药后1，5，10 min观察并记录波形变化及动作电位波消失的时间。统计处理，以配对检验比较各组给药前后动作电位振幅的变化；以单因素方差分析判断各给药组之间动作电位的消失时间。

　　2.3  对热板致痛的镇痛作用用热板法［5］：昆明种雌性小鼠，18～22 g。用CS501型超级恒温器，调节恒温水浴的水温为（55±0.5）℃。将小鼠放入恒温器的铁筒浴槽中，记录自放入铁筒至小鼠舔后足的时间（s），以此作为痛阈值。先预选痛阈值合格的小鼠，即痛阈值为10～30 s的小鼠，不合格者弃之。按痛阈值大小依次编号，将痛阈值相近的6只小鼠，作为一个配伍组，分别随机分配到4个实验组中（即对照组、4%A-V组、4%细辛组、维拉帕米组）。每个实验组11只小鼠，共44只。24 h后开始实验，各组给药前再测一次痛阈值，将此痛阈值与该只小鼠挑选时的痛阈值取平均值，以平均值作为该只小鼠给药前正常痛阈值。然后各组腹腔注射不同药物，给药量0.1 ml/10 g。分别于给药后15，30，60，90 min测其痛阈值。

　　3  结果

　　3.1  对醋酸所致小鼠扭体反应的影响结果见表1。

　　表1  对醋酸所致小鼠扭体反应的影响（略）

　　与对照组比较，*P<0.05， **P<0.001；n=10
   
　　由表1可以看出，各给药组与对照组的潜伏期比较无差别。而各给药组与对照组的15 min内扭体次数相比明显减少，说明各给药组均有一定镇痛作用。A-V组与细辛组和维拉帕米组的扭体次数无明显统计学差异，但均数的绝对值较小，说明细辛和维拉帕米有一定的镇痛协同作用。

　　3.2  对蟾蜍坐骨神经动作电位振幅的影响结果见表2。
   
　　表2结果显示，A-V组神经动作电位振幅于给药后1 min开始减小，约3 min左右逐渐消失；细辛组于1 min时振幅减小不明显，约4 min左右消失；维拉帕米组给药前后无变化；普鲁卡因组作用较缓慢，1 min时无变化，10 min时才使振幅明显减小，动作电位消失时间为（24.8±5.6） min。各给药组使动作电位消失的时间比较显示，A-V组比其组分细辛和维拉帕米均快，提示二者有镇痛协同作用。另外，从表2中还可以看出，细辛以及A-V组动作电位消失时间均比普鲁卡因快，说明它们的对神经的作用比后者快而强，其机理不明。可能它们的渗透作用比普鲁卡因强，见效快，也可能它们与普鲁卡因有着不同的作用和作用机理。维拉帕米动作电位不消失，说明维拉帕米无神经干阻滞作用，但它能增强细辛对蟾蜍坐骨神经的阻滞作用。

　　3.3  对热板致痛的镇痛作用结果见表3。

　　表2  对蟾蜍坐骨神经动作电位振幅的影响（略）

　　与给药前比较，*P＜0.05； 与普鲁卡因阳性对照组比较，△P＜0.001；n=5

　　表3  对热板致痛的镇痛作用（略）

　　与给药前比较，*P＜0.05，**P＜0.01；n=11
   
　　由上表可见，除维拉帕米酊组外，各给药组于给药后15 min时的痛阈值与给药前比较虽无明显差异，但有增大趋势。30 min后及至60 min和90 min的痛阈值明显增大，说明他们的镇痛作用大约于15分钟左右开始发挥作用，至少维持90 min以上。除维拉帕米酊组外，各给药组与对照组比较，均在30 min和60 min时有明显差异；仅A-V组在15 min即与对照组有差别，其它组仅有增大趋势；90 min时A-V组和4%细辛组仅有增大趋势。虽然维拉帕米酊组对热板致痛无明显的镇痛作用，但A-V组的镇痛作用明显大于细辛组，说明细辛与维拉帕米酊配伍对热板致痛有协同镇痛作用。　　4  讨论
   
　　近年来有不少资料报道钙拮抗剂（calcium channel blocker, CCB）有镇痛作用，并能增强阿片类药物的镇痛作用［6，7］。认为Ca2+可通过不同途径调控镇痛［8］。在外周，Ca2+与伤害性感受器的兴奋及冲动沿Aδ，C类纤维的传导有关，抑制Ca2+内流可提高感受器兴奋阈。在中枢，内源性抗痛物质的作用也与Ca2+有关，而且阿片受体和电压敏感性钙通道（VSCC）具有功能性偶联［8］。
   
　　本研究发现，细辛及A-V复方制剂对醋酸致小鼠腹痛、热板法致小鼠足痛均有明显的镇痛作用并能抑制蟾蜍坐骨神经动作电位的传导。维拉帕米有弱的镇痛作用，无坐骨神经动作电位阻滞作用。A-V复方制剂的镇痛及抑制神经动作电位传导作用均大于其组分细辛和维拉帕米酊。说明细辛和维拉帕米酊有镇痛协同作用。
   
　　维拉帕米酊对细辛有镇痛协同作用，其机理可能与维拉帕米酊增强阿片类药物镇痛作用不同。因为，有资料研究表明细辛的镇痛作用来自其局麻作用［1］。局麻药的作用机理通常是在神经细胞膜内侧阻滞Na+通道，干扰神经冲动在神经纤维上的传导而产生的局麻作用，与Ca2+、内源性抗痛物质及阿片受体均无关。根据神经电生理理论，神经动作电位的形成也没有Ca2+直接参与［9，10］。因此，我们认为钙拮抗剂维拉帕米酊对细辛的镇痛协同作用机理以及细辛镇痛作用的机理都有待进一步研究。

【参考文献】
  　　［1］ 梅全喜，毕焕新.现代中药药理手册，第1版［M］.北京：中国中医药出版社，1998，10：37.

　　［2］ 胡兴云，刘颖涛，万德宁.维拉帕米增强曲马多镇痛作用的实验研究［J］.中国药理学通报，1998，14（2）：170.

　　［3］ 胡兴云，刘颖涛.钙通道拮抗剂增强大鼠曲马多镇痛［J］.中国疼痛医学杂志，1998,4（2）：98.

　　［4］ 马传庚，陈志武.钙离子对疼痛调控的影响［J］.中国药理学通报，1992,8：78.

　　［5］ 金有豫.药理学，第5版［M］.北京：人民卫生出版社2001:92.

　　［6］ Pereira IT, Prado WA, Dos-Reis MP. Enhancement of the epidural morphine-induced analgesia by systemic nifedipine［J］. Pain,1993;53:344.

　　［7］ Pozo ED,Ruiz-Gaycia C,Baeyens JM. Analgesic effects of diltiazem and verapamil after central and peripheral administration in the hot-plate test［J］. Gen Pharmac,1990，21:681.

　　［8］ Attali B,Says D,Nah SY et al. κ Opiate agonists inhibit Ca2+ influx in rat spind corddorsal root ganglion cocultures［J］.J Biol Chem,1989，264:247.

　　［9］ 姚泰.生理学，第5版［M］.北京：人民卫生出版社 2001:28.

　　［10］ 朱敏娟，任凌云，杨经文.维拉帕米对臂丛神经阻滞中吗啡镇痛作用的影响［J］.中国实用中西医杂志 2004；4（17）：2997