振通胶囊对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响

amy54321 · 发表于 2014-8-18 17:40:43

作者：满伟，王敬兰，占戈，王鑫国，曹刚

【摘要】  目的观察振通胶囊对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响。方法采用夹闭大鼠两侧颈总动脉（同时腹腔注射硝普钠）缺血45 min，再灌注30 min的方法复制大鼠脑缺血再灌注损伤模型。结果振通胶囊（0.07，0.14 g/kg）可明显升高脑缺血再灌注大鼠血清SOD，6ketoPGF1α含量，降低MDA，ET，TXB2及脑钙含量。结论振通胶囊对大鼠脑缺血再灌注损伤有明显保护作用。

【关键词】  振通胶囊；脑缺血再灌注损伤
　　振通胶囊是我们研制的治疗中风后遗症的中药复方制剂，由马钱子等中药组成。临床试用取得了良好的疗效。为探讨其作用机制，我们观察了其对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响。现报道如下。

　　1  材料与方法

　　1.1  药物和试剂振通胶囊（0.5 g/粒），由课题组提供，用0.5%的纤维素钠制成混悬液，备用；硝普钠，北京制药工业研究所实验厂，用无菌蒸馏水溶解；超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）试剂盒，南京建成生物工程公司；血栓素B2（TXB2）、6酮前列腺素F1α（6ketoPGF1α）、一氧化氮（NO）、内皮素（ET）试剂盒，解放军总医院科技开发中心放免所。

　　1.2  动物雄性Wistar大鼠，32只，体重（306±15）g，和平医院实验动物中心提供。

　　1.3  实验方法健康雄性Wistar大鼠32只，随机分为4组。分别为伪手术组（手术，但不结扎血管，不注射硝普钠）、脑缺血再灌注模型对照组、振通胶囊低剂量组（0.07 g/kg）、振通胶囊高剂量组（0.14 g/kg）。各给药组均灌胃给药，容量为1 ml/100 g体重。伪手术组及模型对照组灌服等量蒸馏水，连续7 d。在末次灌胃后2 h，在10%水合氯醛麻醉下（35 mg/kg，ip），分离并用无损伤动脉夹夹闭大鼠两侧颈总动脉，同时迅速腹腔注射硝普钠（2.5 mg/kg，ip），缺血45 min后，将颈总动脉松开，再灌注30 min。

　　1.4  指标检测方法

　　1.4.1 SOD，MDA含量的测定模型成功后，腹主动脉取血2 ml，3 000 r/min，4℃离心10 min，取血清按说明书方法测定其中SOD，MDA含量。

　　1.4.2 NO，ET含量测定模型成功后，腹主动脉取血2 ml，注入含10%EDTA-钠30 μl和抑肽酶40 μl的试管中，混匀，3 000 r/min，4℃离心10 min，取血浆按说明书用放免法测定其中NO，ET含量。

　　1.4.3 TXB2，6ketoPGF1α含量测定模型成功后，腹主动脉取血2 ml，放入加有消炎痛-EDTA·Na2液的试管中，即刻混匀，3 000 r/min，4℃离心10 min，取血浆按说明书用放免法测定其中TXB2，6ketoPGF1α含量。

　　1.4.4  脑组织钙含量测定灌注完毕后断头，开颅取右侧大脑皮层，用去离子水清洗后，烘干研末，经优级硝酸消化后按原子吸收分光光度法，以shimadzu AA680G型原子吸收分光光度计测定脑组织钙含量。

　　2  结果

　　2.1  对脑缺血再灌注大鼠血浆SOD，MDA的影响表1所示，脑缺血再灌注后，模型对照组大鼠血清SOD含量明显降低，MDA含量显著增高，与伪手术组相比差异显著（P＜0.01或P＜0.05）。振通胶囊（0.07，0.14 g/kg）组SOD含量均较模型对照组升高（P＜0.01），而MDA含量均较模型对照组降低（P＜0.01）。表明振通胶囊有升高脑缺血再灌注损伤大鼠血清SOD含量，降低MDA含量作用。

　　表1  对脑缺血再灌注大鼠血清SOD、MDA的影响（略）

　　与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

　　2.2  对脑缺血再灌注大鼠血浆NO和ET含量的影响表2所示，脑缺血再灌注后，模型对照组大鼠血液中ET含量明显升高，NO含量显著降低，与伪手术组相比差异显著（P＜0.05）。振通胶囊（0.07，0.14 g/kg）均能显著降低血液中ET含量，与模型对照组比较有显著差异（P＜0.05）。振通胶囊（0.07，0.14 g/kg）均有升高血液中NO含量的趋势，但与模型组比较，无统计学意义。

　　表2  对脑缺血再灌注大鼠血浆NO和ET含量的影响（略）

　　与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；n=8

　　2.3  振通胶囊对脑缺血再灌注大鼠血浆TXB2和6-keto-PGF1α含量的影响表3所示：缺血再灌注后，模型对照组大鼠血液中6-keto-PGF1α降低，同时伴有TXB2升高，与伪手术组相比差异显著（P＜0.01或P＜0.05）。振通胶囊（0.07，0.14 g/kg）均能显著升高6-keto-PGF1α，同时均能显著降低TXB2；与模型对照组相比有显著差异（P＜0.05或P＜0.01），且高剂量较低剂量效果为好，但无统计学意义。

　　2.4  对脑缺血再灌注大鼠脑组织钙含量的影响表5所示：缺血再灌注后，模型对照组大鼠脑组织钙含量显著高于伪手术组（P＜0.01）。振通胶囊（0.07，0.14 g/kg）均能显著降低脑组织钙含量（P＜0.05或P＜0.01），且高剂量较低剂量效果为好。　　3  讨论

　　脑缺血再灌注损伤是临床上常见的病理现象,氧自由基介导的自由基连锁反应是导致脑缺血再灌注损伤的重要原因。脑缺血再灌注中氧自由基代谢异常, 组织中氧自由基含量增多, 过多的氧自由基主要作用于生物膜不饱和脂肪酸, 发生脂质过氧化反应, 造成膜结构和功能的破坏, 引起神经元损害［1］。MDA作为氧自由基与生物膜不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应的代谢产物,其含量的变化间接反应脑组织中氧自由基的变化［2］。SOD可清除超氧阴离子,使细胞免受毒性自由基的损害,其含量的变化也反应体内抗氧化的能力。本实验显示，模型组在缺血再灌注后出现SOD降低，MDA增高，印证了在神经损伤中自由基的作用，而振通胶囊能通过升高SOD，降低MDA含量而起保护作用。

　　表3 对脑缺血再灌注大鼠血浆TXB2和6-keto-PGF1α含量的影响（略）

　　与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；n=8

　　表4  对脑缺血再灌注大鼠脑组织钙含量的影响（略）

　　与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01;n=8

　　内皮素(ET)是一种具有强烈缩血管作用的血管活性肽, ET-1广泛分布于中枢神经系统和血管内皮细胞中,与缺血性脑血管病有密切关系。实验表明 ET-1可产生剂量依赖性梗死灶和周围半暗带的形成［3］。目前认为,缺血性神经元坏死的最终途径是细胞内钙超载,ET-1可通过与其特异性受体结合,引起钙内流增加,同时激活磷脂酶C、水解磷脂酰肌醇产生三磷酸肌醇,促使肌质网内Ca2+释放,导致细胞内钙超载。另外ET-1还可刺激兴奋性氨基酸的释放,后者与其受体结合后进一步加重Ca2+内流,并促使自由基产生和导致缺血性脑水肿的形成［4］。因此,脑组织中ET-1的异常表达是缺血再灌注损伤的重要环节。NO是一种血管舒张因子，与ET共同调节血管的舒缩。ET有促进NO合成和释放的作用，而NO抑制ET的合成。本实验显示，缺血再灌注后ET升高而NO降低，二者平衡破坏可能是再灌注损伤的原因，而振通胶囊能降低ET含量，减少其损害作用，而对NO作用不明显，具体机制复杂有待进一步研究。

　　TXA2是花生四烯酸的重要代谢产物,它是一种强有力的血小板聚集物,有较强的促血凝作用,同时也是一种血管收缩物质，TXB2是其稳定的代谢产物。在血管内皮花生四烯酸则形成另一种强有力的血小板聚集抑制物PGI2, 是一种有效的扩张血管物质, 6-Keto-PGF1α是其稳定的代谢产物;TXB2和6-Keto-PGF1α活性很强,作用相反,在体内形成一精巧的调节系统。TXB2/6-Keto-PGF1α的平衡在维持正常的血小板功能、保护内皮细胞免受损伤有着重要的意义［5］。在脑缺血再灌注过程中,PGI2合成相对不足,TXA2产生过多,引起脑血管痉挛和血小板聚集及血管通透性改变,加重脑缺血和脑水肿形成,导致缺血后的延迟性低灌注损伤［6］。本实验表明,脑缺血再灌注时脑组织TXB2的含量明显升高,6-Keto-PGF1α含量明显降低。振通胶囊能显著提高脑缺血再灌注损伤大鼠脑6-Keto-PGF1α的含量，能显著降低大鼠脑TXB2含量，从而起到抗脑血管痉挛和改善脑血管通透性的作用。

　　脑缺血再灌注损伤中细胞内外钙平衡紊乱引发的神经元损伤主要有以下几个方面:①细胞外Ca2+大量内流入细胞内引发钙超载, Ca2+ 在线粒体集聚引起水肿,ATP 合成障碍, 破坏氧化磷酸化;②激活蛋白水解酶, 使细胞骨架崩解,细胞膜损伤, 激活脂酶产生毒性自由基, 攻击细胞膜;③核内集聚, 激活核酶使DNA 断裂, 染色体聚集、固缩;④在高尔基器内集聚引起水肿; 最终导致神经元变性坏死［7,8］。本实验显示，脑缺血再灌注损伤后脑组织钙含量升高，而振通胶囊能降低脑组织钙含量，且呈剂量依赖，说明它通过某种机制帮助恢复钙的平衡，减轻组织损害，具体机制既与上述对抗过氧化损伤、降低ET的损害作用、调节脑血管有关，又有更为复杂的机制。

　　综上所述，通过研究振通胶囊对脑缺血再灌注损伤作用，揭示了它对中风后遗症的治疗作用可能是通过对自由基、血栓素、内皮素及钙离子的影响起作用。

【参考文献】
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　　［4］ Chuang DM,Lin WW,Lee CY.Endothelin-induced activation of phosphoinositide turnover, calcium mobilization, and transmitter release in cultured neurons and neurally related cell types［J］.JCardiovasPhamacol,1991,17(supp17):85.

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