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作者：梁新丽 廖正根 高秀蛟 张萍
【摘要】 目的观察注射用盐酸槐定碱是否具有血管刺激性、溶血和过敏性反应。方法家兔耳缘静脉注射注射用盐酸槐定碱8.3 ml/kg，qd×5 d，停药96 h后对注射部位做病理组织学检查；体外不同浓度的注射用盐酸槐定碱0.1～0.5 ml在5 ml兔红细胞混悬液中放置0.25～24 h，观察对兔红细胞悬液的溶血作用及有无红细胞凝聚作用；给豚鼠隔日腹腔注射不同浓度注射用盐酸槐定碱0.5 ml，连续注射3次，分别在第1次注射后第14天及21天从静脉给予注射用盐酸槐定碱1 ml，观察30 min内是否出现过敏反应；取大鼠，背部皮内注射含IgE的抗血清，24 h后静脉注射含注射用盐酸槐定碱的0.8%伊文思兰溶液1 ml攻击，30 min后处死动物，观察注射点皮肤蓝色反应斑点直径。结果注射用盐酸槐定碱对家兔血管内皮没有损伤和刺激作用；对兔红细胞没有致溶血作用和凝聚作用；豚鼠未出现过敏反应。结论注射用盐酸槐定碱用药血管没有刺激性反应，无溶血及红细胞凝聚现象，对豚鼠无致敏作用且大鼠无同种被动皮肤过敏作用。制剂有关安全性检测结果符合新药申报要求。
【关键词】 注射用盐酸槐定碱； 血管刺激； 溶血； 全身主动过敏反应； 被动皮肤过敏；
Experimental Studies of Sophoridine Hydrochloride for Injection on Vascular Stimulation, Hemolysis, and Sensitization
Abstract：Objective To observe whether Sophoridine Hydrochloride for Injection has vascular stimulation,hemolyzation,agglutination and sensitization. MethodsThe vascular stimulative assay of Sophoridine Hydrochloride for Injection was injected to rabbit at the dose of 8.3 mg·kg - 1 , qd for 5 d. Pathology histology examine of injection place after stoping remedy 96 hours was made.Hemolyzation or agglutination of it in vitro was set at the concent ration of 0. 1～0. 5 ml for 0. 5～24 h. The allergic reaction on guinea pig in vivo and rat in skin were performed.ResultsIt showed that the Sophoridine Hydrochloride for Injection had no vascular irritation and injury effect on rabbit vascular endothelial cell. No evidences of hemolyzation and aggregation on rabbit erythrocyte in vitro,and no allergic reaction on guinea pig in vivo and rat skin were observed. ConclusionThere is no vascular stimulation on rabbit vascular endothelial cell and sensitization on guinea pig in vivo, sensitization on rat in skin, and no hemolyzation oragglutination on rabbit red blood cells in vitro. These results of preparation safety will fit the new drugs application requirements.
Key words：Sophoridine Hydrochloride for Injection; Stimulation of vas cular; Hemolysis; ASA; PCA
妇科恶性肿瘤是最常见的肿瘤之一,它严重影响了妇女的生活质量和生命时间。槐定碱是从苦豆子中提取的单体生物碱，纯度高达99．5％ 以上，槐定碱(Sophoridine)及其制剂盐酸槐定碱注射液(Sophoridine Hydrochloride Injection) 是由江西中医学院研制、拥有自主知识产权国家一类抗癌新药，已于20050822获国家食品药品监督管理局(SFDA)颁发的新药证书及药品批准文号。盐酸槐定碱注射液临床上用于恶性滋养细胞瘤、恶性淋巴瘤、消化道癌、肺癌、鼻咽癌、鼻腔鳞癌、乳腺癌等恶性肿瘤。疗效确切，毒副作用极低，不降低红细胞，不抑制骨髓。与同类产品比较，可明显降低患者治疗痛苦和辅助治疗的经济负担。注射用盐酸槐定碱是以人工槐定碱为原料制成的冻干粉针剂，本研究按照国家药品监督管理局注射剂研制指导原则有关安全性试验项目要求进行了血管刺激、溶血、过敏实验,为临床应用提供依据［1］。
1 材料
1.1 药物注射用盐酸槐定碱：江西中医学院中药现代制剂教育部重点实验室提供。
5%葡萄糖注射液，四川科伦，批号：060219E；甲醛，上海实意化学试剂有限公司，批号：20050328；白蛋白，上海伯奥生物科技有限公司，批号：050114；牛血清白蛋白，上海伯奥生物科技有限公司，批号：050119；白百破三联疫苗，武汉生物制品研究所，批号：20060202-4；伊文思兰，中国医药(集团)上海化学试剂公司，批号：F20030114。
1.2 受试动物 日本大耳白家兔，体重2～3 kg，雌雄兼用，由南京市江宁区青龙山动物繁殖场供给；荷兰豚鼠，体重200～250 g，雄性，由南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供，许可证号：SCXK（苏）2002～0027。 SD大鼠，体重180～220 g，雄性，购于上海斯莱克实验动物责任有限公司，动物合格证号：SCXKC（沪2003－0003）。
2 方法［2～6］
2.1 血管刺激性实验实验开始前，动物预先饲养1周以观察其活动表现，动物室温度22～24℃，湿度40%～60%，取家兔3只，右侧耳缘静脉以无菌操作方法注射浓度为10 mg/ml的注射用盐酸槐定碱8.3 ml/kg，左侧耳缘静脉注射等体积5%葡萄糖注射液，1次/d，连续给药5 d。上述两组均分别于末次给药后96 h，肉眼观察注射部位有无红肿、充血等刺激现象，处死动物，以耳缘静脉注射点至向心方向，连续取3段血管连同周围组织，每段1 cm，用10％甲醛溶液固定，常规脱水，石蜡包埋，切5 μm薄片，HE染色，光镜下做组织学检查，另一侧对照血管也同法处理。
2.2 溶血实验
2.2.1 2％兔红细胞混悬液制备取健康家兔1只，自心脏取血约20 ml，置于三角瓶中，用玻璃棒搅拌，除去纤维蛋白，然后将血移入刻度离心管内，加入生理盐水10 ml，混匀后离心5 min（2 000～2 500 r/min），去除上清液，再加生理盐水混匀离心，反复洗涤3～4次，至上清液无色透明，将所得红细胞按其容积用生理盐水稀释成2%的混悬液。
2.2.2 方法取干净试管7支，编号排列于试管架上，按表1配比量依次加入2%兔红细胞混悬液和生理盐水，混匀后，置于37℃恒温箱中30 min，然后分别加入不同量的药液（第6管为阴性对照管，第7管为阳性对照管），摇匀，置37℃恒温箱中进行温育，观察15，30，45 min，1，2，3，24 h有无溶血及凝集情况。
表1 注射用盐酸槐定碱的溶血性实验（略）
结果判定：
全溶血：溶液澄明红色，管底无细胞残留。
部分溶血：溶液澄明红色或棕色，管底有少量红细胞残留。
无溶血：红细胞全部下沉，上层液体无色澄明。
凝集：虽不溶血，但出现红细胞凝集，振摇后不能分散。
2.3 全身主动过敏实验实验开始前，动物预先饲养1周以观察其活动表现，动物室温度22～24℃，湿度40%～60%，取48只健康雄性豚鼠，随机分成 5％葡萄糖注射液组、阳性药物组（白蛋白组）、注射用盐酸槐定碱大剂量组、小剂量组，每组12只。分别给各组豚鼠隔日腹腔注射5％葡萄糖注射液、白蛋白25 mg/kg，注射用盐酸槐定碱4，16 mg/kg，体积为0.5 ml，共注射3次，然后每组内分成两批，于第1次给药后14 d及21 d分别静脉注射5％葡萄糖注射液、白蛋白50 mg/kg，注射用盐酸槐定碱16 ，64 mg/kg，体积为1 ml，观察豚鼠在静脉注射后30 min内有无表2中的兴奋不安、抓鼻、竖毛、呼吸困难、痉挛、休克甚至死亡等过敏反应症状。 表2 过敏反应症状（略）
2.4 被动皮肤过敏实验
2.4.1 大鼠含IgE的抗血清制备取4只健康雄性SD大鼠，按注射剂大鼠同种被动皮肤过敏试验的要求，分别腹腔注射5%葡萄糖注射液、牛血清白蛋白25 mg/kg，注射用盐酸槐定碱4，16 mg/kg，同时腹腔注射白百破三联疫苗1 ml/只，隔日1次、共3次。11 d后眼眶取血，分离血清，－20℃保存，备用。
2.4.2 大鼠同种被动皮肤过敏反应实验实验开始前，动物预先饲养1周以观察其活动表现，动物室温度22～24℃，湿度40%～60%，取18只健康雄性SD大鼠，随机分为5%葡萄糖组、阳性组（牛血清白蛋白组）、注射用盐酸槐定碱大剂量组和小剂量组。分别在各组大鼠背中线两侧距脊柱约1.5 cm处备皮，4 cm×4 cm。
取上述含IgE的抗血清，用5%葡萄糖注射液按1∶2，1∶4，1∶8，1∶16比例分别稀释成4个稀释度，将稀释的抗血清按逆时针方向（左上-左下-右下-右上）皮内注射于大鼠背部预先备皮部位，每一稀释度注射一个点，每点注射0.1 ml。致敏24 h后，各组静脉注射与致敏剂量相同的激发抗原加等量的0.8％伊文思兰染料共1 ml，进行激发。30 min后处死各组大鼠，测量皮肤内层的蓝色反应斑直径，直径大于5 mm者判定为阳性。不规则斑点的直径为长径与短径之和。
3 结果
3.1 血管刺激性实验给药组3只家兔耳缘静脉注射部位均未见红肿、充血等刺激现象。光镜病理组织学检查：注射用槐定碱给药组和5％葡萄糖对照组家兔耳缘静脉注射部位血管结构完整，血管内皮细胞无肿胀、变性、坏死，管壁无炎细胞浸润，管腔内无血栓形成。
3.2 溶血性实验 在0.25～3 h及24 h内除第7管（阳性对照管）溶液呈现澄明红色，其余6管均末见澄明红色，且红细胞全部下沉，上层液体无色澄明，经振摇后红细胞能均匀分散。表明注射用盐酸槐定碱无溶血及无凝集作用。
3.3 全身主动过敏实验 5％葡萄糖注射液组、注射用盐酸槐定碱大、小剂量组在静脉给药30 min后，豚鼠活动正常，未出现1～20级反应症状，判定为过敏反应阴性。而阳性药组豚鼠出现痉挛、抽搐、休克死亡，判定为过敏反应极强阳性。
3.4 被动皮肤过敏实验注射用盐酸槐定碱大、小剂量组、5％葡萄糖注射液组大鼠背部皮肤均未见蓝色反应斑点。阳性组注射部位皮肤均不同程度的出现蓝色斑点反应， 其中1∶16处有3例出现蓝斑，1∶8处有4例出现蓝斑，1∶4与1∶2处6例均出现蓝斑，蓝斑直径均大于5 mm，判定为阳性反应。结果表明：注射用盐酸槐定碱无同种被动皮肤致敏作用。
4 讨论
本实验采用的方法简便、准确、可靠，4项指标检测注射用盐酸槐定碱均未出现阳性结果，说明注射用盐酸槐定碱对血管无刺激性，无溶血作用，全身主动过敏反应阴性，无同种被动皮肤致敏作用。表明注射用盐酸槐定碱安全性好，可供临床应用。
【参考文献】
［1］ 李雪梅，吴运光，潘达鑫，等.新型抗肿瘤药槐定碱［J］.中国新药杂志，2006，15（8）：654.
［2］ 陈正爱，王 丹，李美子.香丹注射液安全性实验报告［J］.时珍国医国药，2006，17（2）：185.
［3］ 徐正哲，金东洙，陈正爱.熊胆冻干粉针剂安全性实验报告［J］.时珍国医国药，2006，17（8）：1523.
［4］ 陈 奇.中药药理研究方法学，第2版［M］.北京：人民卫生出版社，2006：157.
［5］ 王治乔，袁伯俊.新药临床前安全性评价与实践［M］.军事医学科学出版社 ，1997：164.
［6］ 刘朝阳，杜庆成，张俊英，等.阿替洛尔注射液对血管刺激、溶血和过敏的实验研究［J］.中国新药与临床杂志，2004，23（3）：133. |
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发表于 2014-8-18 17:44:26
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