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作者：农英高， 莫海玲， 于灿华
【摘要】 目的研究排石I号颗粒的质量控制标准。方法采用薄层色谱法对制剂中广金钱草、泽泻进行定性鉴别，采用高效液相色谱法测定排石I号颗粒中的绿原酸的含量。结果金钱草、泽泻的薄层色谱鉴别专属性强；绿原酸进样量在0.010 32～0.103 20 mg/ml 范围内呈良好的线性关系，r=0.999 8。平均回收率为99.95%，RSD =1.50% （n＝6）。结论 该方法简便、灵敏、准确、重现性好，可作为排石I号颗粒剂的质量控制标准。
【关键词】 排石I号颗粒； 金钱草； 泽泻； 绿原酸； 薄层色谱； 高效液相色谱
Abstract：ObjectiveTo establish the quality standards of Paishiyihao Granule.MethodsThe identification of Herba Desmodii Styracifolii, Rhzoma Alismatis were carried out by TLC. The content of chlorogenic acid was determined by HPLC. ResultsHerba Desmodii Styracifolii, Rhzoma Alismatis could be detected by TLC. A good linearity of chlorogenic acid was in the range of 0.010 32～0.103 20 mg/ml (r=0.999 8) and the average recovery of Chlorogenic acid was 99.95% ,RSD was 1.50% （n＝5）.ConclusionThis method is simple,sensitive, accurate and with good reproducibility and can be used for the quality control of Paishiyihao Granule.
Key words：Paishiyihao Granule； Herba Desmodii Styracifolii； Rhzoma Alismatis； Chlorogenic acid； TLC； HPLC
排石汤Ⅰ号是来源于临床经验方的我院自制制剂，由广金钱草、海金沙、泽泻、车前草、石韦等6味药材组成，具有清湿热、利尿、排石的功效。临床上主要用于尿路结石、肾盂肾炎和胆囊炎等，疗效显著。为了方便临床应用，将其开发为便于携带和服用的颗粒剂。为了控制该制剂的质量，保证临床用药安全有效，通过实验研究及参考文献，我们对方中的君药广金钱草、泽泻用薄层色谱法鉴别，并采用高效液相色谱法测定石韦中的绿原酸含量，本方法简便可行，准确可靠，能有效控制制剂质量。
1 仪器与试药
1.1 仪器 美国BECKMAN公司高效液相色谱仪，166紫外检测仪，125泵；电子天平（BP211D，Sartorius，德国）；美国BECKMAN DU640型紫外分光光度仪；德国Elma D78224型超声仪。
1.2 试药绿原酸对照品购自中国药品生物制品检定所；所用的中药药材均由广西南宁海峰中药饮片厂提供，经检验符合2005年版药典标准；排石I号颗粒（广西民族医院自制：批号060518 ，060720 ，060906 ）；除甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。
2 方法与结果
2.1 定性鉴别
2.1.1 广金钱草的薄层色谱鉴别［1］ 取本品5 g加水20 ml超声溶解，用稀盐酸调节pH至2，用醋酸乙酯提取2次，20 ml/次，合并醋酸乙酯提取液，蒸干，残渣加无水乙醇1 ml溶解，作为供试品溶液。取除广金钱草外同工艺制成的颗粒1 g，同法制备阴性对照液。另取广金钱草对照药材4 g，加水煮沸30 min，放冷，过滤，滤液浓缩至约20 ml，同法制备对照药材溶液。依次吸取上述溶液各10 μl，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯甲酸乙酯甲酸（5∶4∶1）为展开剂、展开、取出、晾干、喷以2%三氯化铝乙醇液在365 nm紫外光下观看，供试品与对照药材在相应的位置上显相同的荧光斑点。 阴性对照无干扰。见图1。
2.1.2 泽泻的薄层色谱鉴别［2］ 取本品5 g加水20 ml超声溶解，加入乙醚20 ml及饱和食盐水2 ml充分振荡，分取乙醚层，水层再依上法重复一次，合并乙醚层，挥干，残渣加醋酸乙酯1 ml使溶解，作为供试品溶液。取除泽泻外同工艺制成的颗粒5 g，同法制备阴性对照液。另取泽泻对照药材4 g ， 加水60 ml， 煮沸30 min ， 滤过，滤液浓缩至约20 ml，同法制成对照药材溶液。依次吸取上述3 种溶液各10 μl分别点于同一硅胶G 薄层板上，以甲苯∶醋酸乙酯∶甲酸（10∶6∶0. 2） 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10 % 硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰。见图2。
图1 广金钱草的薄层图谱（略）
图2 泽泻的薄层图谱 （略）
2.2 定量分析［3］
2.2.1 色谱条件与系统适应性实验 色谱柱Zorbax C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：乙腈-0.5 %磷酸溶液（11∶89），流速：1.0 ml·min-1，检测波长：326 nm，柱温：室温，进样量：20 μl。在此色谱条件下，绿原酸的保留时间约16 min，理论塔板数按绿原酸计算均不低于2 000。 2.2.2 溶液的制备
供试品溶液的制备：精密称取本品约5 g，置50 ml 棕色量瓶中，加50%甲醇20 ml ，超声处理30 min，放冷，加50%甲醇至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。
对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品约2mg，置50 ml 棕色量瓶中，加50% 甲醇溶解并稀释至刻度，制成每毫升约含40 μg 的溶液，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。
阴性对照溶液的制备：按处方及工艺制成缺石韦的排石I号颗粒，按“供试品溶液的制备”项下的制备方法，制备阴性对照溶液。
2.2.3 供试品、对照品、阴性对照品的 HPLC色谱比较 分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液，在上述色谱条件下进样20 μl，结果见图3，由图中可知样品中绿原酸峰与其他峰完全分离，分离度较好，阴性对照对绿原酸测定无干扰。
2.2.4 标准曲线的绘制 精密称取绿原酸对照品10.32 mg，置50 ml 棕色量瓶中，加50%甲醇溶液适量，超声处理30 min，放冷，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml置10 ml棕色量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，分别精密吸取20 μl，在上述色谱条件下，依法测定峰面积，以峰面积为纵坐标，绿原酸对照品浓度（mg·ml-1）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=884.655 7X-1.629 08，r=0.999 8。结果表明，绿原酸 在0.010 32 ～0.103 20 mg/ml 范围内有良好的线性关系。
2.2.5 精密度实验 精密吸取同一绿原酸对照品溶液20 μl，在上述色谱条件下平行测定5次，记录峰面积，结果RSD= 0.43% （n=5），说明本方法精密度良好。
2.2.6 稳定性的实验 取同一供试品溶液在0，2，4，6，8 h按上述色谱条件下，分别进样20 μl，测定绿原酸的峰面积，结果RSD= 0.9% （n=5），表明本法稳定性较好。
2.2.7 重复性实验 取同一批样品 5 份，分别按供试品溶液制备方法制备，依法测定绿原酸峰面积，结果RSD=1.47%（n=5），表明本法重复性良好。
a. 对照品 b. 样品 c. 空白
图3 高效液相色谱图（略）
2.2.8 加样回收率实验精密称取已知含量（批号060906）的样品约1 g共6份，分别置50 ml量瓶中，精密加入一定量的绿原酸对照品，按供试品溶液制备方法制备，并按以上色谱条件测定，计算绿原酸回收率，结果见表1。
表1 回收率实验结果（略）
2.2.9 样品的含量测定 取3批样品，分别按供试品溶液制备方法制备，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μl，按上述色谱条件下测定，按外标法计算绿原酸含量，结果见表3。
表3 样品测定结果（略）
3 讨论
排石I号颗粒为中药复方制剂，成分多，我们选用方中君药广金钱草、泽泻作定性鉴别，结果斑点清晰，阴性无干扰，专属性较强；绿原酸含量测定方法中，经多种比例流动相的反复筛选,选定流动相乙腈-0.5 %磷酸溶液（11∶89），用此流动相,样品中的绿原酸峰形好,与杂质峰分离度较好,保留时间适合。
方中的石韦具有利尿通淋、清热止血的功效，其所含主要成分绿原酸具有抗菌、抗病毒、利胆、保肝、降压、兴奋中枢神经系统等作用，并且可以增加肠胃蠕动能力，能促进胃液分泌及胆汁分泌等。因此，为了控制排石I号颗粒的质量，保证临床用药效果，制定绿原酸含量标准很有必要。
实验结果表明，本方法简便、准确，可以作为排石I号颗粒质量控制的标准。
【参考文献】
［1］ 肖 丹,周淑芳.复方金钱草口服液检验方法［J］.现代应用药学，1995,12(6)：13.
［2］ 熊带水,范宋玲,宁德山.利尿胶囊质量标准的研究［J］.中成药.2002,24(12)：928.
［3］ 国家药典委员会，中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社,2005：61. |
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发表于 2014-8-18 18:01:01
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