山萸肉饮片中黄曲霉毒素B1含量及限度的研究

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作者：许闽， 张振凌，吴筱菁， 李朋丽， 李琪玲

【摘要】  目的测定山萸肉饮片中黄曲霉毒素B1（AFB1）的含量并建立限度标准。方法间接竞争酶联免疫吸附法（ELISA）。结果山萸肉饮片均有不同程度的污染黄曲霉毒素B1（AFB1），炮制后降低，但都在国家规定的食品类AFB1限度范围之内。结论 山萸肉饮片中黄曲霉毒素B1 的含量限度标准初步确定为≤5 μg/kg，与国家食品类限度标准相同。

【关键词】  山萸肉； 酶联免疫吸附法； 黄曲霉毒素

　　Abstract：ObjectiveTo assay the content of AFB1 in cut crude drug of Fructus corni so as to establish the standard limitation.MethodsEnzyme Linked Immunosobent(ELIA).ResultsThere is aniso-degree contaminated by AFB1 in crude drug of Fructus corni,but processing drugs could degrade the content of AFB1,the content of AFB1 still remained within nation rated foodstuff convariety AFB1 circumscription.ConclusionThe standard of AFB1 content’s limitation in cut crude drug of Fructus corni is initial determined≤5 μg/kg.It is identical to the nation foodstuff convariety limitation standard.

　　Key words：Fructus corni;  Enzyme linked immunosorbentassay;  AFB1
   
　　黄曲霉毒素是目前致癌物质中危害较大的一种。1982年，国家颁布规定用薄层层析法测定食品中AFB1允许量的标准［1］。酶联免疫吸附法（ELISA）是近10～20年出现的一种新技术，具有特异性强、分析时间短的特点，而且其灵敏度与TLC或HPLC相当或更高，样品制备简单［2］。本研究采用文献报道的间接竞争酶联免疫吸附法［3］对河南地区不同产地的山萸肉进行测定，并在检测结果的基础上初步确定河南产区山萸肉的黄曲霉毒素B1的限度标准。

　　1  仪器与试药

　　1.1  仪器EAB1-2000黄曲霉毒素测定仪、BS210S型电子天平、LDZX-40SCI型高压灭菌器，H11B11—600BS电热恒温培养箱、GS101-2D电热风干燥器。

　　1.2  试剂黄曲霉毒素酶联免疫试剂盒（按试剂盒常规配置，无锡市艾赛生物技术有限责任公司，批号20051206）；黄酒（濮阳亚光制药厂）。

　　1.3  药材山萸肉为河南不同产地产品，购自郑州市航海路药材市场，经河南中医学院鉴定教研室陈随清教授鉴定为山茱萸科山茱萸Cornus  officinalis  Sieb.et Zucc的干燥成熟果肉。

　　1.4  样品前处理

　　1.4.1  山萸肉的制备取山萸肉原药材检净，去核及果梗，80℃低温干燥，打成粗粉，过筛，备用。

　　1.4.2  山萸肉常压制品的制备取山萸肉生品，加入黄酒，闷润，蒸透取出，烘干，打粉，过筛，备用。

　　1.4.3  山萸肉加压酒制品的制备取山萸肉生品，加入黄酒，闷润，高压蒸制，取出，烘干，打粉，过筛，备用。

　　2  方法与结果

　　2.1  样品液的制备取不同产地、不同炮制山萸肉肉饮片粗粉5.0 g，置100 ml具塞瓶中，准确加入25.0 ml水（1∶1）溶液，振摇15 min，过滤，弃去1/4的初滤液，即得。将试剂盒平衡至室温，用洗涤液洗板2次，洗液不得溢出，每次间隔1 min，在吸水纸上拍干，1～3号孔为标准对照孔，其余为样品孔，按所列依次加入配制好的溶液及待测样品稀释液。放置30 min，取出反应板，用E洗涤液洗板5次，洗液不得溢出，间隔2 min/次，拍干。每孔加入50 μl底物液F（a）G（b） 摇匀，37℃放置15 min，目测法测定。　　表1  样品液加入黄曲霉素酶联免疫试剂盒操作情况（略）

　　2.2  结果判断先比较1～3孔颜色，若3号最深，2号次之，1号孔接近无色，说明标准准确，比较样品孔与2号孔的颜色，若浅者，则为阳性，若深者，则为阴性。

　　2.3  仪器法测定每孔分别加入终止液50 μl，然后用酶标测定仪在450 nm波长处测定各孔的吸光度A值。结果河南产区山萸肉均不有同程度的黄曲霉毒素B1污染，其含量在0.217～7.406 μg·kg-1范围内，除实验室陈品中黄曲霉毒素B1含量略高外，其余均在5 μg·kg-1以下。

　　3  讨论

　　3.1  山萸肉是茱萸和果实经去核以后的果肉及果皮部分，富含糖类成分。产地加工常用手工和自然干燥方法，加上贮藏保管不当，常常引起发霉。作为贵重药的山萸肉，临床应用或者制备六味地黄丸等中成药生产常常打成粉末应用，因此建立山萸肉饮片的黄曲霉毒素限量标准有一定意义。

　　3.2  山萸肉AFB1定性及含量测定结果表时，山萸肉中含有一定量的AFB1，样品吸光度值超过阳性吸光度值，说明山萸肉中AFB1含量均小于5 μg/kg，此限度标准是国家食品标准，因此山萸肉AFB1限度标准可与食品标准通用，即AFB1的含量限度标准初步确定为≤5 μg/kg，与食品AFB1限度相同。

　　3.3  山萸肉中黄曲霉毒素B1生品含量和酒炙品含量有一定差别，并且炮制后含量降低，说明炮制对山萸肉中黄曲霉毒素含量有一定影响。但是因为黄曲霉毒素B1是一种耐高温的毒素，一般的炮制方法对其没有彻底破坏作用，因此炮制品中黄曲霉毒素B1的仍有一定含量。

【参考文献】
  　　［1］ 中国预防医学科学院.食品卫生国家标准［S］.北京：中国标准出版社，1992：81.

　　［2］ 宓晓黎，成恒嵩，黄曲霉毒素分析方法研究进展［J］.粮食与饲料工业，1994，10：41.

　　［3］ 杜平华，杨晓峰.间接竞争酶联免疫吸附法分析检测中药中黄曲霉毒素B1的研究［J］.药物分析杂志，1995，15（2）：34.