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作者：梁永平， 农小棉， 韦敏法
【摘要】 目的研究与建立新雪片的质量标准。方法采用薄层色谱法（TLC）对新雪片中穿心莲、栀子、冰片进行定性鉴别;采用反相高效相色谱法（RPHPLC）测定新雪片中栀子苷的含量。结果TLC专属性强。HPLC准确可靠。栀子苷在0.256～1.280 μg范围内呈良好线性关系（r=0.999 9），平均回收率为97.12%，RSD=1.43%（n=6）。结论 该方法可靠、准确，能有效地控制制剂质量。
【关键词】 新雪片； 栀子苷； 质量控制； 薄层色谱
Quality Standard for Xinxue Tablets
Abstract:ObjectiveTo eslablish and study the quality standard for Xinxue tablets.MethodsConnon Andrographis Herb,Cape Jasmine Jasmine Fruit,Borneol were identified by TLC,and Geniposede content in Tablets was determined by RP-HPLC.ResultsTLC method was specific. HPLC method was accurate and reliable.The Geniposede showed a good linear relationship in the range of 0.256～1.280 μg (r=0.999 9)and average recovery was 97.12%,RSD=1.43%(n=6).ConclusionThis method is reliable,accurate and can be used to control the quality of the preparation effectively.
Key words:Xinxue Tablets; Geniposede; Quality control; TLC
新雪片为《中华人民共和国卫生部药品标准（WS3B281397）·中药成方制剂》第14册所收载，后经国家药典委员会修订（药品标准颁布件零069），为国家非典指挥部指定的非典用药新雪颗粒的不同新剂型,由磁石、石膏、滑石、寒水石、硝石、芒硝、栀子、竹叶卷心、广升麻、穿心莲、珍珠层粉、沉香、冰片、人工牛黄14味组成，具有清热解毒功能，用于各种热性病之发热，如扁桃腺炎、上呼吸道炎、咽炎、气管炎、感冒所引起的高热，以及温热病之烦热不解。原标准中［鉴别］项只有3个理化鉴别，1个薄层色谱鉴别（胆酸、猪去氧胆酸），较简单，不足以控制药品质量。为此本文对新雪片的鉴别、含量测定进行研究，制订能控制药品质量的标准。现报道如下。
1 材料与仪器
LabALLiance高效液相色谱仪，Model500检测器；UP250H超声清洗 器（功率300 W，频率40 kHz，熊猫集团南京电子计量有限公司生产）；硅胶G（青岛海洋化工厂）；层析缸（20 cm×10 cm)；层析柱（内径10 mm)；ZF2型三用紫外分析仪（上海市安亭电子仪器厂）；栀子苷、穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、冰片对照品（中国检定所提供），样品及阴性样品（由广西药物研究自制）；甲醇（色谱纯）；水（重蒸水）；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 薄层色谱鉴别
2.1.1 栀子［1］取本品适量，研细，取约10 g。加甲醇50 ml，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇10 ml使溶解，转移至已处理好的柱子（活性炭0.5 g，100～200目中性氧化铝2 g，二者混合均匀后，湿法装柱，内径为1.5 cm)上，用甲醇100 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水20 ml使溶解，滤过，滤液用正丁醇振摇提取2次，40 ml/次，合并正丁醇液。用浓氨试液洗涤2次，10 ml/次。弃去洗液，再用水洗涤2次，20 ml/次，弃去水洗液，取正丁醇层液，蒸干，加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取栀子苷对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。再按处方比例，取缺栀子的其它药材按新雪片［制法］制备，再按供试品溶液的制备方法制备，所得溶液作为阴性对照溶液。照薄层色谱法［1］实验，吸取上述3种溶液各10 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-浓氨水（10∶4∶0.3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。结果见图1。
2.1.2 穿心莲［1］取本品适量，研细，取约5 g，加乙醇30 ml，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯对照品，加甲醇制成每毫升各含1 mg的混合溶液，作为对照品溶液。再按处方比例，取缺穿心莲的其它药材按新雪片［制法］制备，再按供试品溶液的制备方法制备，所得溶液作为阴性对照溶液。照薄层色谱法［1］实验，吸取供试品溶液与阴性对照溶液各10 μl，对照品溶液5 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇 （4∶3∶0.5）为展开剂，展开，取出晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置中，分别显相同颜色的斑点，阴性无干扰。结果见图2。
2.1.3 冰片取本品适量，研细，取约5 g，加乙醚30 ml，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取冰片对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。再按处方比例，取缺冰片的其它药材按新雪片［制法］制备，再按供试品溶液的制备方法制备，所得溶液作为阴性对照溶液。照薄层色谱法［1］实验，吸取上述3种溶液各5 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷醋酸乙酯（8.5：1.5）为展开剂，展开，取出晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。结果见图3。
2.2 含量测定
2.2.1 色谱条件与系统适应性实验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（20∶80）作为流动相；检测波长为238 nm。柱温（23±1℃），理论板数按栀子苷峰计算应不少于5 000。 图1 栀子TLC图谱（略）
图2 穿心莲TLC图谱（略）
图3 冰片TLC图谱（略）
2.2.2 线性关系考察精密称取栀子苷对照品12.8 mg，置100 ml量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液（0.128 mg·ml-1）。精密吸取对照品贮备液（0.128 mg·ml-1）1.0，2.0，2.5，3.0，4.0，5.0 ml溶液，分别置10 ml量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取各溶液20 μl，按上述色谱条件测定峰面积值。以峰面积值为纵坐标（Y），进样量（μg）为横坐标（X），绘制标准曲线，并求得回归方程为Y=7.27E5X-1.13E3,r=0.999 9。可见，栀子苷在0.256～1.28 μg（浓度1.28～64.0 μg·ml-1）间呈良好线性关系。
2.3 精密度实验取样品，按正文含量测定项下方法制成供试品溶液，在选定的色谱条件下，依法操作测定，重复进样6次，峰面积平均值为355159，RSD=0.59%。
2.4 稳定性实验取样品，按正文含量测定项下方法制成供试品溶液，分别在放置0，2，4，6，8，12，24 h后，依法测定，结果峰面积平均值为375006，RSD=0.29%。表明供试品溶液在24 h内稳定性好。
2.5 重复性实验取同一样品（批号060201）6份，精密称定：0.242，0.215 7，0.238 3，0.229 3，0.205 6，0.212 8 g。按供试品溶液的制备方法制备6份供试品溶液，依法测定，结果含量平均值为2.10 mg·g-1，RSD=0.85%。表明方法重复性较好。
2.6 加样回收率实验取已知含量的样品（批号060201，含量为2.1 mg/g）6份，精密称定，置锥形瓶中，分别精密加入栀子苷对照品（0.128 mg/ml）2 ml，按供试品溶液的制备方法制备，依法测定，计算回收率。结果见表1。表明本方法回收率较好。
表1 栀子苷回收率实验数据（略）
2.7 供试品溶液的制备及测定取本品，研细，取约0.2 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入50%甲醇20 ml，称定重量，超声处理40 min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，再用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，作为供试品溶液。另精密量取栀子苷对照品贮备液2 ml，置10 ml量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（每毫升含25.6 μg）。再按处方比例，取除栀子外的其它药材，按［制法］制备，然后按制供试品溶液方法制备，作为阴性对照溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μl，按上述的色谱条件注入液相色谱仪，照高效液相色谱法［1］测定，按外标法计算含量。结果见表2及图4～6。
3 讨论
新雪片是由磁石、石膏、寒水石、滑石、穿心莲、竹叶卷心、栀子、沉香、广升麻、芒硝、硝石、珍珠层粉、人工牛黄、冰片等14味药材组成，具有清热解毒功能，用于各种热性病之发热，如扁桃腺炎、上呼吸道炎、咽炎、气管炎、感冒所引起的高热以及温热病之烦热不解。方中石膏、寒水石、滑石为处方君药，都是矿物药材，难以制定薄层色谱和含量测定方法。穿心莲、栀子、竹叶卷心为方中臣药，穿心莲中的穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯在水中溶解度很低，而在穿心莲中含量亦较低，加上新雪片的制备方法为水提取，穿心莲药材绝大部分为水煮，只有极少部分为粉碎成粉末后压片而成，这就使得穿心莲内酯的含量在新雪片中的含量更低，故测定穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯意义不大，竹叶卷心其成分未详，栀子有明显的抗菌消炎作用，其主要有效成分为栀子苷，且为全部水提取，故选择栀子苷作为新雪片定性和定量的指标成分。
表2 6批新雪片样品测定数据（略）
图4 栀子苷对照品HPLC图（略）
图5 阴性对照品HPLC图（略）
图6 供试品HPLC图（略）
通过薄层色谱实验，确定了新雪片中栀子、穿心莲、冰片的薄层色谱鉴别方法，阴性对照表明其他成分对本法无干扰，说明该方法专属性较强，结果可靠。
本品参照《中国药典》2005年版Ⅰ部“栀子”及其制剂中栀子含量测定方法［1］及有关文献，并结合本品的性质特征，进行优化含量测定条件，建立本品栀子苷的含量的测定方法，并就该测定方法进行了方法学的研究。研究结果表明，本方法简便、灵敏、准确、专属性强，可作为控制新雪片的栀子苷含量方法。
【参考文献】
［1］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：173，189，附录VIB，附录VIQ. |
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发表于 2014-8-18 18:13:03
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