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【摘要】 目的用高效液相色谱法（HPLC）法测定妇乐糖浆中大黄素与大黄酚含量。方法色谱柱：Kromasil C18色谱柱，流动相：甲醇0.1%磷酸（85∶15），检测波长254 nm，流速1.0 ml·min-1。结果大黄素在0.021～0.53 μg，大黄酚在0.019～0. 35 μg范围内呈良好的线性关系。平均回收率大黄素为100.6%，（RSD=2.5%，n=6），大黄酚为101.1%，RSD=（1.5%，n=6）。结论 该方法灵敏，方便，分离良好，结果满意。
【关键词】 妇乐糖浆 大黄素 大黄酚 高效液相色谱法
Determination of the Contents of Emodin and Chrysophanol in Fule Syrup by HPLC
LUO Yi，HUANG Zhuoqian
Guangxi Institute for Food and Drug Control, Nanning, 530001, China
Abstract：ObjectiveTo determine the contents of emodin and chrysophanol in Fule Syrup by HPLC.MethodsThe Kromasil C18 Column（250 mm×4.6 mm，5 μm）was used,the mobile phase was methanol-0.1% phosphoric acid(85∶15),the detective wavelength was at 254 nm，the flow rate was 1.0 ml·min-1.ResultsThe linear ranges of emodin and chrysophanol were at 0.021～0.53 μg and 0.019～0. 35 μg respectively,the average recoveries(n=9) were 100.9% and 101.1% with RSD 2.4% and 1.6% respectively.ConclusionThis method is sensitive and accurate.
Key words：Fule Syrup； Emodin； Chrysophanol； HPLC
妇乐糖浆由忍冬藤、大血藤、大黄（制）等10味药组成，具有清热凉血，消肿止痛之功，用于盆腔炎、附件炎、子宫内膜炎等引起的带下、腹痛。由妇乐冲剂改变剂型而成。原剂型质量标准简单，无含量测定项。我们参照有关文献［1］，对方中大黄所含有效成分大黄素和大黄酚的含量进行了试验研究。
1 仪器与试药
1.1 仪器
美国Waters 2695 高效液相色谱仪；2996二极管阵列检测器；Empower色谱工作站；MILLI-PROA纯水处理器。
1.2 试药大黄素对照品（批号：110756-200110，供含量测定用）、大黄酚对照品（批号：0796-200005，供含量测定用），对照品均由中国药品生物制品检定所提供，甲醇为色谱纯，水为高纯水，其它试剂均为分析纯。妇乐糖浆：由贵港市冠峰制药有限公司提供。
2 方法与结果
2.1 色谱条件Kromasil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）。流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(85∶15)；柱温：35℃；流速为1 ml·min-1 ，进样量20 μl；检测波长254 nm；要求理论板数不低于3000。在此条件下，大黄素、大黄酚与其他组分完全分离。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取大黄素和大黄酚对照品用甲醇配制成含大黄素和大黄酚各3 μg·ml-1的混合溶液。
2.3 供试品溶液的制备取本品1 g， 精密称定， 置具塞锥形瓶中， 加入10%盐酸溶液∶乙醇（3∶1）20 ml，超声处理（功率400 W，频率42 kHz）3 min，再加三氯甲烷20 ml，加热回流60 min，立即冷却，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取3次，30 ml/次，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 缺大黄阴性对照品溶液按处方及制备工艺制备不含大黄的阴性对照样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。 2.5 专属性实验照上述色谱条件分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各20 μl注入色谱仪得到供试品在与大黄素和大黄酚对照品保留时间相同的位置上有相同特征的色谱峰，而阴性对照品溶液在此保留时间无色谱峰。如图1～3。
2.6 线性关系考察
2.6.1 精密称取大黄素对照品10.61 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。精密吸取贮备液0.5 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，备用；再精密吸取贮备液0.3，0.5，1.0，2.0，3.0，5.0 ml，分别置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，备用。
2.6.2 精密称取大黄酚对照品9.40 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。精密吸取贮备液0.5 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，备用；再精密吸取贮备液0.3，0.5，1.0，2.0，3.0，5.0 ml，分别置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，备用。
2.6.3 分别精密吸取以上对照品溶液各10 μl，注入液相色谱仪进行测定。以对照品进样量为横坐标（X），峰面积积分值为纵坐标（Y）绘制标准曲线，则回归方程为：大黄素对照品的回归方程：Y = 3.724 × 106X＋5.230×103，r= 1.000 0 ，大黄酚对照品的回归方程：Y= 7.493 3×103 X-54.919，r= 0.999 9,结果表明大黄素在0.021～0.53 μg范围内时，与大黄素峰面积呈良好的线性关系；大黄酚在0.019～0.35 μg范围内时，与大黄酚峰面积呈良好的线性关系。
2.7 精密度实验精密吸取供试品溶液（批号20050103）20 μl，重复进样5次，按上述色谱条件测定峰面积。大黄素峰面积均值为370 461，RSD为0.5%，大黄酚素峰面积均值为353 876， RSD为0.3%。
2.8 重复性实验取同批（批号20050103）样品5份，按“2.3”项下方法制备，进样20μl，测定。大黄素平均含量为22.5 μg·g-1，RSD 2.2%，大黄酚平均含量为21.7 μg·g-1，RSD 2.0%。
2.9 稳定性实验
分别于0，2，4，8，12，24 h精密吸取供试品溶液（批号20050103）20 μl，按上述色谱条件测定峰面积，大黄素峰面积均值为371 802，RSD为0.5%，大黄酚峰面积均值为355 220， RSD为0.4%，结果表明大黄素和大黄酚在24 h内稳定。
2.10 回收率实验
采取加样回收法。精密称取已知含量的供试品（批号20050103）6份，加入一定量的大黄素和大黄酚对照品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定。大黄素的平均回收率为100.6%，RSD2.5%；大黄酚的平均回收率为100.1%，RSD1.5%。
2.11 样品测定
取样品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，精密量取20 μl测定，按外标法计算含量，结果见表1。表1 妇乐糖浆中大黄素和大黄酚含量测定结果（略）
3 讨论
将大黄素和大黄酚的对照品溶液分别于200～400 nm扫描其紫外吸收，大黄素在290 nm有最大吸收，大黄酚在258 nm有最大吸收，但两者均在258 nm处有较大吸收，同时参照有关文献［1］，故选择254 nm为测定波长。
供试品制备时对不同浓度的盐酸及不同水解时间进行条件摸索，而以10%盐酸溶液∶乙醇（3∶1）20 ml水解60 min为最佳。实验结果显示采用本提取方法，对测定干扰小，两种成分分离效果好。可以作为妇乐糖浆含量测定指标。
【参考文献】
［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：328. |
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发表于 2014-8-19 20:01:10
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