高效液相色谱法测定消糖灵胶囊中格列本脲的含量

amy54321 · 发表于 2014-8-19 21:24:35

【摘要】  目的探讨用高效液相色谱（HPLC）法测定消糖灵胶囊中格列本脲的含量。方法采用HP ODS-Hypersil 色谱柱(4.6 mm×200 mm，5μm ) ，柱温：20℃, 流动相为甲醇-0.005 mol/L磷酸二氢胺（pH3.5，70∶30），流速0.8 ml/min，检测波长300 nm 。结果格列本脲在0.141 ～2.25μg范围内呈较好的线性关系（r=0.999 9, n=5），平均回收率为99.18 % ，RSD为1.72 %(n=3)。结论高效液相色谱法测定格列本脲简便、快捷、灵敏，可以作为消糖灵胶囊含量的测定方法。
　

【关键词】  消糖灵胶囊格列本脲盐酸小檗碱高效液相色谱

　　Determination of Glibenclamide in XiaoTangLing Capsules by HPLC

　　CUI Zhe， GUO Jianpeng

　　1.The Hospital of Yanbian University,Yanji,Jilin  133000,China；

　　2. Pharmacy College of Yanbian University, Yanji,Jilin 133000,China

　　AbstractObjectiveTo research the methods of determination of Glibenclamide content in XiaoTangLing capsules by HPLC. MethodsHP ODS-Hypersil chromatographic column (4.6 mm×200 mm，5 μm ) was used to determine the content of Glibenclamide under the temperature of 20℃. Mobile phase: The ratio of methanol and 0.005mol/L phosphoric acid dihydroamine was 70:30 under the pH3.5. Flow rate: 0.8 ml / min. The wavelength of detection：300 nm. ResultsIn the range from 0.141μg to 2.25μg, Glibenclamide appeared fine linear correlation（r=0.999 9, n=5）. The average recovery was 99.18 %，RSD= 1.72%(n=3). ConclusionHPLC method has some advantages, such as convenient, swift, sensitive, so HPLC can be used as a suitable method for determination of XiaoTangLing capsule.

　　Key wordsXiaoTangLing capsule; Glibenclamide; HPLC

消糖灵胶囊收载于《部颁标准》（WS3-B-2026），由人参、黄连、黄芪等11味中药加格列本脲组成，具有益气养阴，清热泻火，益肾缩尿的功效，用于治疗糖尿病。方中格列本脲是临床上应用广泛的降糖类合成药物，同时也具有一定的毒性和不良反应，因此很有必要对其含量进行准确的测定。为了提高制剂质量标准，拟采用高效液相色谱法测定格列本脲作为本品的含量测定方法。

　　1  仪器与试药

惠普HP1100高效液相色谱仪，HP1100色谱工作站；Sartorious CP225-D型电子天平（万分之一，德国SatoriUs公司）。
消糖灵胶囊（延边大学药剂学实验室制备，批号：040603，040605，040607），格列本脲对照品，（批号040411上海友思生物技术有限公司）；甲醇（色谱纯）；水为重蒸水；其他试剂均为分析纯。

　　2  方法与结果。

　　2. 1  色谱条件

　　色谱柱为HP ODS-Hypersil (4.6 mm×200 mm，5μm )，柱温为20℃, 流动相为甲醇-0.005mol/L磷酸二氢胺（pH3.5,70：30），流速为0.8 ml / min，检测波长为300 nm。

　　2.2  对照品溶液的制备

　　精密称取格列本脲对照品适量，加甲醇制成每毫升含格列本脲225μg的溶液，摇匀，作为对照品贮备液。

　　2.3  供试品溶液的制备

　　取消糖灵胶囊内容物，研细（过80目筛），精密称取0.5 g，置50 ml量瓶中，加甲醇40 ml，超声处理30 min（功率250 W，频率33 kHz），加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

　　2.4  阴性对照溶液的制备

　　取阴性样品（不含格列本脲）5 g，按“供试品溶液的制备”项方法制备，即得阴性对照溶液。

　　2.5 系统适用性实验

　　照上述色谱条件，吸取上述3种溶液各10 μl，分别注入液相色谱仪。得到格列本脲对照品、供试品及阴性对照品的色谱图（见图1～3），供试品在与对照品相应位置上有一相同的色谱峰，阴性对照品在此保留时间附近无干扰。计算格列本脲的理论板数大于5000，分离度大于1.5。

　　2.6  线性关系考察

　　分别精密量取对照品贮备液适量配成225，112.5，56.2，28.1，14.1 μg/ml溶液，摇匀，各精密吸取10 ml进样。按上述色谱条件测定峰面积积分值，以峰面积积分值为纵坐标(y)，以格列本脲进样量（μg）为横坐标(x)，绘制标准曲线，得回归方程：y=446.46x+8.48 , r=0.999 9，格列本脲在0.141～2.25 μg范围内呈良好的线性关系。　2.7  检测量以S/N≥3时的进样量为最低检出量，测得格列本脲最低检出量约10 μg。

　　2.8  精密度实验

　　取同一对照品溶液，重复进样5次，记录峰面积积分值，计算RSD=1.07%，表明本法精密度良好。

　　2.9  稳定性实验

　　取同一供试品溶液分别于1，2，4，6，8进样，记录峰面积积分值，计算RSD=1.77%，表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。

　　2.10 重现性实验

　　取同一批样品按“供试品溶液的制备”项下方法，制成5份供试品溶液，测定，记录峰面积积分值，计算格列本脲平均含量为1.62 mg/g，RSD为1.47%，表明本法的重现性良好。

　　2.11  加样回收率实验

　　精密称取9份同一批已测知含量的样品，每份约0.5 g，分别加入格列本脲对照品适量，按“供试品溶液的制备”项下方法，制备供试品溶液，测定，由公式：加样回收率（%）= ［（测得量－样品原有量）/ 加入量］× 100%，计算回收率。结果见表1。表1  加样回收率测定结果（略）

　　2.12  样品测定

　　分别取不同批号消糖灵胶囊，按“供试品溶液的制备”项方法，制备供试品溶液，按上述色谱条件依法测定。结果见表2。表2  样品中格列本脲的含量（略）

　　3  讨论

　　3.1  样品前处理方法选择

　　消糖灵胶囊是由多味中药和格列本脲组成的复方制剂，测定干扰大，故对提取方法及提取时间分别进行了考察。结果，在所考察的回流提取法、超声提取法、连续回流提取法三者中，采用本法对有效成分格列本脲的提取效果最优。

　　3.2 测定波长的选择

　　经紫外分光光度计扫描，格列本脲在300 nm波长处有最大吸收，故选择测定波长为300 nm。

　　3.3  流动相的选择［1，2］

　　曾试验比较甲醇-0.005 mol/L磷酸二氢胺（pH3.5,65∶35）和甲醇-0.005 mol/L磷酸二氢胺（pH3.5，70∶30 ）两种流动相，结果，甲醇-0.005 mol/L磷酸二氢胺（pH3.5,70∶30）分离效果较好，保留时间适中，故选择甲醇：0.005 mol/L磷酸二氢胺（70∶30）为流动相。

【参考文献】
  　　［1］吴静,扬青.HPLC法测定复方二甲双胍片中格列本脲的含量［J］.安徽医药，2003，7（3）：223.

　　［2］张秀玲,王样.格列本脲及其片剂的HPLC测定［J］.中国医药工业杂志，1997，28（1）：33.

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