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【摘要】 目的建立六灵解毒丸质量标准。方法采用TLC法对牛黄进行了鉴别,用HPLC法测定华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量。采用ZorbaX C18柱，流动相为乙腈-0.5%磷酸二氢钾溶液(35∶65)（用磷酸调PH值为3.2）,检测波长为296 nm。结果TLC色谱斑点清晰。华蟾酥毒基在0.311 6～2.492 8 μg之间呈良好的线性关系，脂蟾毒配基在0.309 6～2.476 8 μg之间呈良好的线性关系。华蟾酥毒基平均回收率为99.18%，RSD=1.55%。脂蟾毒配基平均回收率为103.30%，RSD=1.73%。结论 所建立的方法简便可行，重现性好，为六灵解毒丸质量控制提供了方法。
【关键词】 六灵解毒丸 华蟾酥毒基 脂蟾毒配基 质量标准
Quality Standard for Liulingjiedu Pill
Abstract：ObjectiveTo establish a quality standard for Liulingjiedu pill.Methods Calculus bovis in this medicine was identified by TLC. Cinobufagin and Resibufogenin in Linlingjiedu pill were determined by HPLC, using Zorbax C18 column and CH3CN∶KH2PO4：35∶65（adjust pH3.2） as the mobile phase. The detective wavelength was 296 nm.ResultsThe TLC spots developed were quite clear. Cinobufagin and resibufogenin showed a good linear relationship at a range of 0.3116 ～ 2.492 8 μg and 0.309 6 ～2.476 8 μg.The average recovery of Cinobufagin was 99.18 % and RSD was 1.55 %. The average recovery of Resibufogenin was 103.30% and RSD was 1.73 %.ConclusionThe method can be used for the quality control of Liulingjiedu pill.
Key words iulingjiedu pill； Cinobufagin； Resibufogenin； Quality standard
六灵解毒丸为部颁药品标准中药成方制剂收载品种，具有清热解毒、消肿止痛的功效。临床广泛用于咽喉疾病。蟾酥为方中主要药物，也为毒性药材。为更好地控制药品质量，根据国家药品标准提高质量标准行动计划的有关要求，增加了牛黄的薄层色谱鉴别和华蟾酥毒基、脂蟾毒配基的含量测定。
1 仪器与试药
AL204万分之一电子天平(梅特勒公司)；Agilent1100高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)；KQ100B型超声波清洗器(昆山市超声器有限公司)；华蟾酥毒基和脂蟾毒配基标准品(购于中国药品生物制品检定所，批号为110803200504和07189306，供含量测定)；乙腈、甲醇、磷酸为色谱纯，磷酸二氢钾为分析纯。
2 方法与结果
2.1 牛黄的薄层鉴别［1，4］取本品约2 g，研细，置10 ml量瓶中，加10%冰醋酸乙醇溶液适量，充分振摇后，加10%冰醋酸乙醇溶液定容至刻度，静置24 h，取上清液作为供试品溶液。取牛黄对照药材0.1 g，同法制得对照药材溶液。再取胆酸对照品，加10%冰醋酸乙醇溶液制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。取除牛黄外的药材，按照样品制备工艺制成阴性对照样品，再取阴性对照样品按照供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液吸取上述溶液各5 μl，分别点于同一块硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯-甲醇-冰醋酸 (6∶32∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。
2.2 含量测定
2.2.1 色谱条件［1～3］以乙腈-0.5%磷酸二氢钾溶液(35∶65)（用磷酸调pH值为3.2）为流动相；检测波长296 nm；理论板数按华蟾酥毒基、脂蟾毒配基峰计算应分别不低于4 000。
2.2.2 标准曲线的制备精密称取华蟾酥毒基对照品适量，加甲醇制成浓度为0.155 8 mg/ml的对照品溶液，分别进样2，4，8，12，16，20 μl。精密称取脂蟾毒配基对照品适量，加甲醇制成浓度为0.1548 mg/ml的对照品溶液，分别进样2，4，8，12，16，20 μl。以对照品浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制成工作曲线，计算得华蟾酥毒基回归方程为：y = 771x +30(r=0.999 9)，脂蟾毒配基回归方程为：y = 794.6x-10.1(r=0.999 9)。结果表明，华蟾酥毒基在0.311 6～2.492 8 μg之间呈良好的线性关系，脂蟾毒配基在0.309 6～2.476 8 μg之间呈良好的线性关系。 2.2.3 供试品溶液的制备取六灵解毒丸样品约90 mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10 ml，称定重量，超声处理50 min(功率250W，频率40 kHz)，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.4 精密度实验取同一供试品溶液，分别进样测定6次，华蟾酥毒基峰面积积分值的RSD为0.62%，脂蟾毒配基峰面积积分值的RSD为0.95%，表明仪器有很好的精密度。
2.2.5 重复性实验取同一批六灵解毒丸样品6份，按照供试品溶液的制备方法分别处理，测定华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的平均总含量为12.0116 mg/g，RSD为1.69%。结果表明重复性良好。2.2.6 稳定性实验取同一样品溶液，分别在0，1，2，4，8，12 h测定，样品含量的RSD＝0.83%。表明样品在12 h内稳定。
2.2.7 加样回收率实验采用加样回收法，取已知华蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量的六灵解毒丸（华蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量分别为5.804 3 mg/g和6.207 2 mg/g）6份，每份约50 mg，精密称定，分别添加2 ml华蟾酥毒基和脂蟾毒配基混合对照品溶液（浓度分别为0.152 9 mg/ml和0.145 8 mg/ml），置于10 ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，超声处理(功率250W，频率40 kHz)40 min，放冷，用甲醇定容至刻度，滤过，取续滤液，分别进样20 μl，计算回收率。华蟾酥毒基平均回收率为99.18%，RSD=1.55%；脂蟾毒配基平均回收率为103.30%，RSD=1.73%。结果见表1～2。表1 华蟾酥毒基回收实验结果（略）表2 脂蟾毒配基回收率实验结果（略）
2.2.8 样品含量测定取六灵解毒丸样品约90 mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相10 ml，称定重量，摇匀，超声处理4 min(功率250W，频率40 kHz)，放冷后，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，进样20 μl。
用上述条件测定了3批六灵解毒丸中的华蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量。结果见表3。表3 样品含量测定结果（略）
3 讨论
供试品溶液制备方法试验中, 对提取方法，提取溶剂、提取时间及溶剂用量进行了筛选。实验结果表明样品以流动相为溶剂, 超声提取时间为40 min即可。
用HPLC法测定六灵解毒丸中的华蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量, 方法先进, 操作简便, 结果准确,可作为六灵解毒丸的质量控制方法。
【参考文献】
［1］国家药典委员会，中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：205.
［2］冯 琳，袁 成，王景祥.HPLC法测定蟾酥及制剂含量的研究［J］.药物分析杂志，1993,13(6)： 383.
［3］李向日，林瑞超.RP-HPLC 法测定牛黄消炎片中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量［J］.中国医药学报，2004,19(5)：312
［4］刘亚蓉，刘海青，吕 东.中成药中牛黄与人工牛黄的薄层鉴别［J］.西北药学杂志，1995,10(6) :251. |
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发表于 2014-8-19 21:43:16
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