满山红止咳平喘有效成分的研究

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【摘要】  目的研究满山红中的止咳平喘活性化学成分。方法利用大孔吸附树脂、硅胶柱色谱等多种现代色谱分离成分，并根据理化常数和光谱分析进行结构鉴定。结果从满山红中分离得到了7种活性化合物，分别为杜鹃素(farrerol)，杨梅素(myricetin)，槲皮素(quercetin)，二氢槲皮素(taxifolin)，伞形花内酯(umbelliferone)，金丝桃苷(hyperine)，杜松脑(juniper camphor)。结论为下一步开发满山红抗咳喘新药提供了可靠的化学基础，且对修正以往认为满山红药材挥发油中以杜鹃酮为主要成分的观念提供了实验依据。

【关键词】  满山红 黄酮 二氢黄酮 香豆素 挥发油

　　Studies on the Active Compounds to Relieve Cough and Dyspnea from Rhododendron dauricum

　　Abstract：ObjectiveTo study the natural products to treat cough and dyspnea from Rhododendron dauricum.MethodsActive compounds were isolated by macroporous absorption resin，silica gel columns and other modern chromatographic method.Seven chemical constituents were identified on the basis of chemical methods and spectral evidences. ResultsFrom this plant, seven active compounds were isolated. They were determined as farrerol, myricetin ,quercetin, taxifolin, umbelliferone, hyperin and juniper camphor. ConclusionThe results supplied the researching base to develop the effective part of Folium Rhododendri Daurici as the new medicine.

　　Key words：Rhododendron dauricum L.;  Flavone;  Flavanone;  Coumarin;  Volatile oil

    满山红Rhododendron dauricum L.为杜鹃花科杜鹃属植物，药用其叶［1］。具有止咳、祛痰、平喘作用，疗效高，副作用小［2］，主要分布在东北地区。为了开发满山红以有效部位为药效物质基础的中药新药，本实验对满山红中的化学成分进行了提取分离和结构鉴定。通过利用溶剂法及多种现代色谱分离技术分离到了7种化合物，分别为杜鹃素(farrerol)，杨梅素(myricetin)，槲皮素(quercetin)，二氢槲皮素(taxifolin)，伞形花内酯(umbelliferone)，金丝桃苷(hyperoside)，杜松脑(juniper camphor)。尤其通过开展该药材挥发油中的高含量成分进行结晶法分离、鉴定及含量测定工作，对修正以往认为满山红药材挥发油中以杜鹃素为主要成分的观念提供了实验依据。

　　1  仪器和材料

    1H-NMR和13C-NMR谱及二维核磁共振谱用Burker Avance 400 MHz 型核磁共振波谱仪测定；样品纯化使用岛津LC-8A型高效液相色谱仪；熔点测定用XT5显微熔点仪(温度未校正)。薄层色谱用硅胶G、色谱用硅胶(200～300目)为青岛海洋化工厂生产中；AB-8型大孔吸附树脂为天津南开大学化工厂生产；薄层色谱用硅胶板为反相板(RP-18F254)为德国Merck公司产品。药材2004-09采集于黑龙江省牡丹江，经黑龙江中医药大学药学院王振月教授鉴定。

　　2  提取与分离

    满山红干燥叶适当粉碎，经水蒸气蒸馏收集总挥发油，挥发油经硅胶柱层析，石油醚-醋酸乙酯梯度洗脱，洗脱部分冷冻析出的晶体用经乙醚反复重结晶得到化合物Ⅶ。药材晾干用乙醇提取两次，回收溶剂后的水层加入氯仿进行二相回流，分取氯仿层进行分离鉴定得到化合物Ⅰ～化合物Ⅴ，剩余的水层，减压浓缩至适量，以AB－8大孔吸附树脂吸附，将大孔吸附树脂预处理完后，用30％乙醇进行洗脱，洗脱液经减压回收蒸干后上硅胶柱分离得到化合物Ⅵ。

　　3  结构鉴定

    化合物Ⅰ：淡黄色针状结晶， 淡黄色针状结晶，可溶于甲醇、乙醚和稀碱液，难溶于水，与四氢硼钠反应呈紫红色，证明为二氢黄酮类化合物。分子式C17H16O5。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：12.36（1H，s，OH）；9.55（2H，br.s，OH）；7.30（2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，H-6′），6.78（2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，H-5′），5.38（1H，dd，J=3.2Hz， J=12.4 Hz， H-2），3.16（1H，dd，J=12.4 Hz， J=17.2 Hz，H-3a），2.72（1H，dd，J=3.2 Hz，J=16.8 Hz，H-3b）。13C-NMR（DMSO-d6）δ：197.5(C=O)，162.9(C-9)，158.9(C-7)，158.1(C-5)，157.9(C-4′)，129.9(C-1′)，128.5(C-2′，C-6′)，115.7(C-3′，C-5′)，103.8(C-6)，103.07(C-8)，102.3(C-10)，78.5(C-2)，42.6(C-3)，8.1、8.8 (2×CH3)。与文献报道的杜鹃素的相应数据比较［3］ 基本一致，根据上述归属和解析鉴定化合物Ⅰ为杜鹃素（farrerol）。

    化合物Ⅱ：黄色针状结晶，mp 330 ℃(分解)。分子式为C15H10O8。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：12.51（1H，s，OH），10.74(1H，s，OH)，9.23(3H，m，OH)，8.83(1H，s，OH)，7.23(2H，s，H-2′和6′)，6.34(1H，d，J=1.76 Hz， H -8)，6.17(1H，d，J=1.76 Hz，H -6)。13C-NMR（DMSO-d6）δ：178.9(C-4)，163.4(C-7)，161.3(C-5)，156.7(C-9)，146.2(C-2)，145.0（C-3′），144.9(C-5′)，135.5（C-3），135.6（C-4′）120.8（C-1′），108.2(C-2′和6′)，103.5(C-10)，98.0(C-6)，93.7（C-8）。以上数据与文献报道的杨梅素相符［4］，故化合物Ⅱ为杨梅素(myricetin)。

    化合物Ⅲ：淡黄色粉末，mp 225～227℃。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：11.92（1H，s，OH），10.95(1H，s，OH)，9.06(1H，s，OH)，8.20(1H，s， OH)，7.24(1H，d，J=1.8 Hz， H -2′)，7.11(1H，dd，J=8.2 Hz，1.8Hz， H -6′)，7.05(1H，d，J=8.2 Hz， H-5′)5.96(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，5.92(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.22((1H，d，J=12.0 Hz，H-2)，4.67(1H，d，J=4.2 Hz，OH)，4.59(1H，dd，J=12.0 Hz，4.2 Hz，H-3)。13C-NMR（DMSO-d6）δ：199.6(C-4)，165.7(C-7)，165.3(C-5)，164.7(C-9)，146.2(C-4′)，145.8（C-3′），129.4(C-1′)，120.9（C-6′），116.3(C-2′)，115.7(C-5′)，101.0（C-10），97.5(C-8)，96.1(C-6)，84.4(C-2)，73.0(C-3)。以上数据与文献报道的二氢槲皮素一致［4］，故化合物Ⅲ为二氢槲皮素(taxifolin)。
    化合物Ⅳ：黄色针状结晶（MeOH），mp 313～314 ℃。HCl-Mg反应呈红色。1H-NMR和13C-NMR数据与文献报道的槲皮素一致［5］，故化合物Ⅳ为槲皮素（quercetin）。    化合物Ⅴ：淡黄色晶体，分子式C9H6O3，该化合物的1H-NMR，13C-NMR与文献报道的伞形花内酯一致［6］，故化合物Ⅴ为伞形花内酯(umbelliferone)。

    化合物Ⅵ：淡黄色针状结晶（MeOH），mp 233～235℃。HCl-Mg反应呈红色，Molish反应呈现紫色环，说明该化合物为黄酮苷类化合物。且该化合物经酸水解后薄层仅可以检出D-半乳糖。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：7.65（1H，dd，J=6.8、2.0 Hz，H-6′），7.54（1H，d， J=2.0 Hz，H-2′），6.83（1H，d，J=6.8 Hz，H-5′），6.18（1H，d，J=2.0 Hz，H-6），6.38（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），5.40（1H，d，J=7.0 Hz，H-1〞 半乳糖）。13C-NMR（DMSO-d6 ，DEPT）177.4(C-4)，164.6(C-7)，161.2(C-5)，156.3(C-2)，156.2(C-9)，148.5(C-4〞)，144.8(C-3′)，133.5(C-3)，122.0(C-1′)，121.1(C-6′)，116.0(C-5′)，115.2(C-2′)，103.8(C-10)，101.9(C-1〝)，98.8（C-6），93.6（C-8），75.8（C-5"），73.2(C-3")，71.2(C-2")，67.9(C-4")，60.1(C-6") 1H-NMR和13C-NMR数据与文献报道的金丝桃苷的相应数据进行比较［7，8］两者基本一致，根据上述归属和解析鉴定化合物Ⅵ为金丝桃苷（Hyperin）。

    化合物Ⅶ：无色针状结晶(Et2O)，mp:164～166℃， 分子式:C15H26O。由来源及碳谱中给出15个碳推测可能为倍半萜类化合物。根据化合物的1H-NMR ，13C-NMR 和二维H-H COSY、HSQC（见表1）及HMBC相关关系结构图（见图1），对化合物各个碳原子及其所连接的质子的化学位移进行归属。1H-NMR（DMSO-d6，400MHz）δ: 0.94(3H，s，15-CH3) ；1.04(1H，m，H-1)；1.10(1H，d，J=3 Hz，H-8)；1.11(3H，s，H-14)；1.13(1H，bs，H-10)；1.29(1H，m，H-6)；1.37(1H，m，H-8)；1.40(1H，m，H-1)； 1.53(2H，m，H-7)；1.62(1H，bs，H-4)；1.64(3H，s，13-CH3)；1.67(3H，s，12-CH3)；1.78(1H，m，H-6)；1.88(1H，t，J=12Hz，H-2)；2.47(1H，dt，J=2.4 Hz，12 Hz， H-2)；2.80(1H，dd，J=16 Hz，2 Hz，H-4)。13C-NMR（DMSO-d6）δ： 131.4（C-3），121.0（C-11），72.3（C-5），55.6（C-10），45.3（C-1），43.6（C-6），41.0(C-8)，34.8(C-9)， 25.5(C-2)，24.6(C-4)， 22.1(C-14)，20.2(C-7)，20.0(C-12和 13)，18.1(C-15)。根据以上结果表明化合物Ⅶ为杜松脑(juniper camphor)。表1  杜松脑的HSQC数据图（略）



【参考文献】
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