叶下珠有效部位总提取物对比格犬的长期毒性实验

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【摘要】  目的观察叶下珠有效部位总提取物长期毒性实验可能造成对机体的毒性反应。方法叶下珠有效部位总提取物 470，210，90 mg/kg 每天口服给药1次；连续给药45，90，180 d及停药后30 d，观察对比格（Beagle）犬生长发育以及血液学常规、血液生化指标、心电图的影响；以及连续给药180 d和停药后30 d对主要脏器体重比、主要脏器病理形态的影响。结果对生长发育、血液学常规、心电图均无影响。90 mg/kg：连续给药90 d，BUN，TP，Glu升髙明显，T-CHO下降；但给药180 d及停药后30 d均恢复正常。210，470 mg/kg：ALT，ALP，Glu均显著升髙，TP，Alb，T-CHO显者下降；肝细胞轻度浊肿、空泡变性。但上述毒性改变均于停药后30 d恢复正常。结论 90 mg/kg组为安全剂量；210 mg/kg以上剂量为中毒剂量；停药后可恢复正常。

【关键词】  叶下珠提取物 长期毒性

　　Study on the Chronic Toxicity of Total Extracts of Yexiazhu(TEY) in Beagle Dog

　　Abstract：ObjectiveTo observe the chronic toxicity of TEY in Beagle dog.MethodsRats of three experimental groups were i.g. TEY at dose of 1280 mg/(kg·d)，640 mg/(kg·d)and 320 mg/(kg·d), respectively，6 days per week for 6 months．Rats of control group were given distilled water at the same volume．Growth of rats were observed．Indexes of hematology and blood biochemistry were measured．Ratio of viscera to body were measured and the major organs were examined by the pathology．All these tests were carried out three and six months after i.g. and one month after stopping i.g．ResultsThe outer appearance and behavior, weights, the indexes of hematology and blood biochemistry were normal. The organ coefficient, the cardiogram, the pathological examination had no significant difference by comparing with control group.ConclusionTEY has no significant toxicity for long - term administration to rats.

　　Key words：Total extracts of Yexiazhu (TEY) in beagle dog；  Chronic toxicity in beagle dog

    笔者先后曾报道叶下珠有效部位总提取物一般药理作用［1］，对大鼠长期毒性实验结果［2］，均未发现本品对机体的毒性反应。国內外均未见有关叶下珠长期毒性实验的研究报道，为更准确探讨长期服用本品对机体的毒性反应，本研究报道叶下珠有效部位总提取物对Beagle犬长期毒性实验结果。

　　1  材料

　　1.1  药物叶下珠有效部位总提取物(下简称叶下珠)。每克相当于34 g原生药。 药物溶于水批号：9601。四川省中药研究所药化室提供。

　　1.2  动物Beagle犬，4～6月龄；雌8雄12；体重3～6 kg/只左右。 动物标准：一级；合格证号：川实动管质第63； 四川养麝研究所供。 饲料：按四川养麝研究所提供的饲料配方配制。

　　1.3  设施一级标准，合格证号为医动字24103115号。地点：四川实验动物中心。室温控制在16～29℃，相对湿度为70%～75%。

　　1.4  试剂丙氨酸氨基转移酶(ALT)，批号961101；门冬氨酸氨基转移酶(AST)， 批号 961101；碱性磷酸酶(ALP)，批号961101；尿素氮(BUN)，批号961014；肌酐(Cr)，批号961022；总蛋白(TP)，批号 961007；白蛋 白(Alb)，批号961007；葡萄糖(Glu)，批号961101；总胆固醇(T-CHO) ，批号960627。以上检测试剂盒均由重庆医学试剂研制所提供。
    隐血试纸(大、小便)，批号96010315；三联试纸(pH、蛋白、葡萄糖)，  批号96040212。由广州越秀区东方新科技研究所产。

　　1.5   仪器UV-730半自动生化分析仪，日本岛津产；心电图机(ECG-6511)，上海光电仪器股份有限公司产；电子天平：EB-3200D型，日本SHIMADZU产；光  镜：德国LEITZ产。

　　2  方法［1～3］

　　2.1   动物分组20条健康犬随机分成4组，受试药组设大、中、 小3个剂量组，（剂量分别为：470，210，90 mg/kg，分别相当于拟用临床剂量的47，21，9倍）；另设正常对照组，每组5只，雌雄均有。动物单笼饲养， 每天定时笼外自由活动2 h。药前饲养7 d，适应环境。

    受试药物各剂量组和正常对照组于用药180 d各剖杀3只(2♂1♀)，停 药后30 d各剖杀2只(1♂1♀)。

　　2.2  给药途径

　　每天上午以少量饲料与受试药拌饲。吃完后再饲喂饲料。每周按体重调整用药量1次。

　　2.3  检测项目及检测时间

　　实验犬于用药前，用药45 d、3个月、6个月及停药后30 d， 抽静  脉血检查血液学、血液生化学、 尿常规等。 各项指标检测方法分别为： ALT、AST，赖氏法；Crea，碱性苦味酸法；BUN，二乙酰乙肟法；ALP，磷酸苯二钠法；TP，双缩脲法；Alb，溴甲酚绿法；T-CHO，氧化酶法；Glu，GOD-POD法。尿常规用试纸法。心电图，在站立清醒状态下测二导联心电  图。用药过程中每天观察动物外观症状，包括食欲，大、小便，毛色，活  动情况。定时称体重。药后6个月及停药后30 d分别处理两批动物。 于抽  血后股动脉放血处死动物。解剖后肉眼观察各主要脏器有无病变，同时取心、肝、脾、肺、肾、胃、十二指肠、甲状腺、胸腺、肾上腺、前列腺、 睾丸、附睾、子宫、卵巢等脏器称重；所有脏器10%甲醛固定，石腊切片，HE染色；光 镜检查病变。所有数据以t检验处理。

　　3  结果

　　3.1  一般状况给药180 d期间及恢复期各剂量组、 正常犬的行为、  活动、摄食、饮水、毛色、眼、耳、鼻、口及分泌物、大小便未见异常。  药前、给药45，90，180 d及停药后30 d检查尿液隐血、蛋白质、葡萄糖   均为阴性，pH 6～8，均在正常范围。

　　3.2  对犬体重的影响

　　结果见表1。结果显示各剂量组和正常对照组的犬基本保持同步增长的变化。给药期间及恢复期，药物对体重基本无影响。表1  叶下珠有效部位总提取物对Beagle犬长期毒性实验体重变化(略)　　3.3   对犬血象的影响

　　前肢静脉采血，检查血液学6项指标结果见表2～5。表2  叶下珠有效部位总提取物对Beagle犬长期毒性实验药前血液学指标检查结果(略)表3  叶下珠有效部位总提取物对Beagle犬长期毒性实验给药90 d血液学指标检查结果(略)表4  叶下珠有效部位总提取物对Beagle犬长期毒性实验给药180 d血液学指标检查结果(略)表5  叶下珠有效部位总提取物对Beagle犬长期毒性实验停药后30 d血液学指标检查结果(略)

　　结果显示，给药90 d，小剂量组的白细胞总数较正常对照犬有明显下降，但与剂   量未显相关。大、中剂量组的凝血时间比正常对照组明显减少。给药 180 d小剂量组的凝血时间则明显延长，但均在3 min范围内，且停药后30 d恢复。可以认为各剂量组对血象未产生影响。

　　3.4  对犬血液生化指标的影响

　　血液生化指标检查10项结果见表6～9。结果显示给药45 d仅发现大剂量组肌酐偏高，其余各剂量组10项指标均未出现异常。 表6  对Beagle犬血液生化的影响药前0 d(略)表7  对Beagle犬血液生化的影响药后90 d (略)表8  对Beagle犬血液生化的影响药后180 d(略)表9  对Beagle犬血液生化的影响(略)

    给药90 d：大剂量组ALT，ALP显著升高(P<0.05)；大、中剂量组 Alb  均显著下降(P<0.01或P<0.05)；大、中、小剂量组的T-CHO 明显下降( P<0.01)；小剂量组的 BUN显著升高(P<0.01)，但与剂量未显相关； 大、 中、小剂量血糖均明显增高(P<0.05)。

    给药180 d：大、中剂量ALT都升高(P<0.01或P<0.05)；而大、中剂量  TP则明显下降(P<0.05或P<0.05)；大剂量T-CHO也明显下降(P<0.05)；大中剂量Glu则显著增高。

    上述各项指标，停药后30 d恢复正常。说明其改变是可逆的。大、中剂量出现毒性反应，小剂量基本是正常的。

　　3.5  对犬心电图、心率的影响

　　给药45，90，180 d及停药后30 d，用ECG-6511 心电图机测定清醒状态下站立式的标准Ⅱ导联犬心电图，结果见表10。结果显示，各剂  量组心率、心电图均未见异常。表10  对Beagle犬心电图的影响(略)

　　3.6   对犬脏器体重比的影响

　　股动脉放血处死动物。首先剖取甲状腺、胸腺、肾上腺；剖腹检查胸  腔、腹腔、盆腔，未发现积液、炎症；先后剖取心、肺、肝、脾、肾、胃、 十二指肠、睾丸、附睾、前列腺、卵巢、子宫，并用EB-3200D型电子天平  称量。脏器体重比结果按t检验统计处理。结果见表11。表11  对Beagle犬脏器指数的影响(略)
         
　　①主要脏器脾、肺、脑、肾上腺、胸腺、甲状腺、睾丸、前列腺、子  宫、卵巢的脏器体重比均未出现异常。

    ②心脏体重比：大、小剂量组未见异常，中剂量组明显减小，但停药后   恢复。病理切片未发现病变。

　　③肝脏体重比：大、中剂量组未见异常；小剂量组偏大，停药后恢复，  病理切片未发现病变。

    ④肾脏体重比:3个剂量组药后180 d均未发现异常，但停药后30 d，大剂量组偏大，病理切片检查结果未发现病变。鉴于心、肝、肾脏器体重比异常均发现在个别剂量组，与剂量大小不 相关，且停药后恢复，其病理切片光镜检查又未发现病变，我们确定该药  对脏器体重比未产生影响。

　　3.7  主要脏器光镜病理形态学检查结果见表12～13。表12  对Beagle犬肝脏组织病理检查结果（略）表13  对Beagle犬甲状腺、子宫、肾上腺组织病理检查结果（略）

    结果显示：
     
　　①各剂量组心、肾、脑、肺、脾、胃、十二指肠、卵巢、睾丸、附睾、  前列腺、肾上腺、胸腺、甲状腺均未发现毒理病变。
   
　　②肝脏病理切片检查结果：小剂量组与正常对照组相似，未发现病变； 大、中剂量组肝细胞发现轻度细胞浊肿，空泡变性，个别动物汇管区纤维增生，病变程度与剂量相关。但停药后基本恢复。

     ③子宫病理切片光镜检查发现：中剂量组与正常对照组相似，未发现病变。大、小剂量组各有个别雌犬子宫肌层增厚，但增厚的肌细胞大小正 常，停药后基本恢复。与子宫相关的卵巢病理切片镜检均有不同时期卵泡，说明不影响排卵。

      ④病理切片光镜检查发现大剂量组有1只甲状腺桥本氏变，另1只有子宫肌瘤，小剂量组1只有肾上腺囊肿1个，以上改变均为自发，与药物无关。

　　4  结论

    犬长期口服大、中、小剂量毒性实验证明：①小剂量为无毒性剂量；②大、中剂量为中毒剂量，主要表现为：ALT，ALP显著升高， TP ，Alb，T-CHO下降，Glu增高，肝细胞轻度浊肿、空泡变性； 但上述毒性改变停药后30 d均恢复。

【参考文献】
  　　［1］ 温志坚，周永禄，曹 毓.叶下珠有效部位总提取物一般药理作用研究［J］.时珍国医国药，2007，18（5）：1120.

　　［2］温志坚，彭龙玲，杨亚斯.叶下珠有效部位总提取物对大鼠长期毒性实验［J］.时珍国医国药，2007，18（4）：853.

　　［3］李仪奎.中药药理实验方法学［M］.上海：上海科学技术出版社，1991：532，562.