安神补心丸中地西泮的鉴别

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【摘要】  目的利用薄层色谱法和高效液相色谱（HPLC）法鉴别安神补心丸中是否添加了地西泮。方法采用薄层色谱法、HPLC法鉴别。结果供试品中未检出地西泮。结论 薄层色谱鉴别方法简便可靠， HPLC法更灵敏精确，两种鉴别方法都可为打击在安神补心类中药中擅自添加地西泮成分的违法行为提供有力依据。

【关键词】  安神补心丸 地西泮 薄层色谱法 高效液相色谱法

    安神补心丸［1］是由丹参、五味子（蒸）、石菖蒲、合欢皮、菟丝子、墨旱莲、地黄等10味中药所组成的一种中药丸剂，它具有养心安神的功效，临床广泛用于阴血不足引起的心悸失眠，头晕耳鸣。此药特别受到一些失眠患者的青睐，人们通常比较信赖中药制剂，认为服用安全，毒副作用小，而对中成药制剂持有的态度往往是敬而远之，能不用就不用。一些不法分子为了充分拓宽市场，牟取暴利而不择手段，在中药制剂中人为添加了地西泮。地西泮［2］是属于苯二氮卓类抗焦虑药，对焦虑性失眠疗效极佳，但长期应用可致耐受与依赖性，突然停药有戒断症状出现。新生儿、哺乳期妇女、孕妇忌用。因此，此违法行为存在着严重的危险性。笔者抽检了北京市某药厂生产的安神补心丸，经检验结果发现此药中未添加地西泮，广大患者可以安心服用，现将抽验结果以及所建立的测定方法介绍如下。

　　1  仪器和材料

    R200D型电子分析天平（德国塞多利斯公司）；UV-1型三用紫外分析仪（上海顾村电光仪器厂）；Agilent 1100型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；UV2450型紫外/可见分光光度计（日本岛津公司）；硅胶GF254薄层板（青岛海洋化工厂分厂）；环己烷、醋酸乙酯、三氯甲烷、丙酮（分析纯，均为北京化学试剂公司）；甲醇（色谱醇）；地西泮对照品（中国药品生物制品检定所，批号：115－9302）；安神补心丸；水为纯化水。

　　2  方法与结果

　　2.1   薄层色谱法

　　2.1.1  供试品溶液的制备

　　将安神补心丸15丸，研碎，取细粉适量加三氯甲烷适量溶解，配成浓度为2 mg/ml的溶液，振摇，滤过，滤液作为供试品溶液。

　　2.1.2  对照品溶液的制备

　　称取地西泮对照品适量，置2 ml容量瓶中，加三氯甲烷溶解并稀释至刻度，制成每毫升含2 mg的溶液，作为对照品溶液。

　　2.1.3   混合溶液的制备供试品溶液＋对照品溶液取安神补心丸细粉适量（约5丸），地西泮对照品适量（约20 mg），加三氯甲烷10 ml，超声处理15 min，滤过，滤液作为混合溶液。

　　2.1.4  薄层鉴别

　　吸取供试品溶液、对照品溶液各5 μl，混合溶液2 μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以环己烷∶醋酸乙酯∶三氯甲烷（6∶3∶1）为展开剂展开，取出晾干后，置紫外光灯下观察，在254nm处混合溶液与地西泮对照品相应的位置均显示紫红色的斑点，供试品相应位置无上述斑点。见图1。

　　2.2   HPLC法

　　2.2.1  色谱条件

　　色谱柱ZORBAX C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相：甲醇－水（50∶50）；流速为1.0 ml/min；检测波长为254 nm；进样量为20 μl。　2.2.2  对照品溶液的制备

　　称取地西泮对照品适量，置25 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，配成浓度为0.02 mg/ml的溶液，作为对照品溶液。

　　2.2.3   供试品溶液的制备

　　取安神补心丸5丸，研碎，加丙酮10 ml超声处理10 min,滤过，取滤液挥干，加甲醇10 ml溶解,用微孔滤膜（0.45 μm）滤过即得。

　　2.2.4   混合溶液的制备（供试品溶液＋对照品溶液）

　　取安神补心丸细粉适量（约5丸），地西泮对照品适量（约20 mg），加丙酮10 ml超声处理10 min,滤过，取滤液挥干，加甲醇10   ml溶解,用微孔滤膜（0.45 μm）滤过即得。

　　2.2.5   HPLC鉴别

　　对照品溶液中，地西泮的出峰时间为20.1min,混合溶液中同样发现在相同时间出峰的色谱峰，并且此峰与其它杂质峰也能得到较好分离，而供试品溶液中未发现相同时间出峰的色谱峰。见图2。

　　3  讨论

    如果使用硅胶G薄层板，可采用如下操作：将硅胶G薄层板在105℃下活化30 min，分别点供试品溶液、对照品溶液各5 μl，混合溶液2 μl，用环己烷：醋酸乙酯：三氯甲烷（6∶3∶1）为展开剂展开，先在层析池中饱和5min,然后展开，展距约15 cm。取出，挥尽展开剂，依次喷稀硫酸溶液、碘化铋钾试液显色。混合溶液与地西泮对照品相应的位置均显示砖红色的斑点，供试品相应位置无上述斑点。与使用硅胶G薄层板相比，采用GF254薄层板方法显色过程简单且斑点更为清晰。

    对HPLC法中的流动相的比例进行了多次筛选，分别以甲醇-水为30∶70，40∶60，50∶50，60∶40和70∶30进行实验，结果表明，选择甲醇-水（50∶50）色谱峰峰形及分离度良好。

    薄层色谱法实验通过比较供试品和对照品的荧光斑点，确保了定性结果的准确性，整个分析方法具有简便的特点，并且斑点清晰，专属性及重现性好；HPLC法比薄层色谱法更加灵敏、准确、可靠，因此，在使用薄层色谱法检测出某成分的存在后，可进一步使用HPLC法进行确认。

    薄层色谱法和HPLC法都可作为安神补心类中药制剂中擅自添加地西泮的有效鉴别方法，能为此类假药的查处提供有力的技术参考依据。

【参考文献】
  　　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：452.

　　［2］陈新谦，金有豫，汤 光.新编药物学，第15版［M］.北京：人民卫生出版社，2001：253.