补肾益精颗粒提取工艺的研究

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【摘要】  目的优化补肾益精颗粒的提取制备工艺。方法以淫羊藿苷的含量为指标，通过渗漉实验和正交设计回流实验筛选最佳提取条件。结果渗漉提取的最佳工艺为用70 %乙醇作溶剂，浸渍48 h后，以1～3 ml/min的速度缓缓渗漉。正交设计实验最佳回流工艺为：用8倍量50 %乙醇，提取1次3 h。结论正交设计回流实验优选得到的淫羊藿乙醇回流法的提取工艺条件稳定可行。

【关键词】  补肾益精颗粒 淫羊藿苷 渗漉法 正交实验

　　Optimization of Extracting Process for Bushenyijing Granules by Orthogonal Test

　　Abstract：ObjectiveTo optimize the extracting process for Bushenyijing Granules. MethodsWith content of icariin as the inspection indicators, percolation method and orthogonal test were designed for optimization of extracting process for Bushenyijing Granules. Orthogonal test was used to investigate the influence of four extracting factors (concentration of alcohol (A), alcohol volume (B), extracting time (C) and times of extracting (D)) on the extracting process.ResultsThe optimum percolation method was that the medicinal material was percolated at 1 to 3 ml/min after soaked for 48 hours in 70% alcohol. The optimum extracting process was A2D1C3B2, i.e. the 50% alcohol volume being 8 times of the weight of medicinal material, extraction for 1 times and 3 hours each time.ConclusionOptimization of extracting process for Bushenyijing Granules by orthogonal test is a simple, quick and accurate method.

　　Key words：Bushenyijing Granules;  Icariin;  Percolation method;  Orthogonal test

    补肾益精颗粒全方由淫羊藿、蛇床子、当归、川芎、小茴香、五味子、补骨脂等7味药材组成，具有补肾壮阳，活血填精等功效。本实验中我们按照中药新药研制的要求，在依据处方的中医药理论和分析处方中各味药之间的关系并结合剂型制备需要的基础上，分别采用渗漉法和正交设计回流实验，以淫羊藿苷收率为指标，对补肾益精颗粒的提取工艺进行了优化。

　　1  器材

　　1.1  材料和试剂

　　淫羊藿、蛇床子、当归、川芎、小茴香、五味子、补骨脂等药材均购自浙江华东医药股份有限公司药材参茸分公司，并经由刘骅副研究员鉴定。淫羊藿苷对照品(批号0737-200111) 购于中国药品生物制品检定所。其余试剂均为国产分析纯。

　　1.2  仪器Agilent 1100高效液相色谱仪（美国Agilent科技公司），旋转蒸发仪（Re-52AA，上海亚荣生化仪器厂）。

　　2  方法和结果

　　2.1  淫羊藿苷含量测定方法

　　2.1.1  色谱条件淫羊藿苷的含量采用高效液相色谱法测定［1，2］。色谱柱为Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流动相为乙腈-水（V/V = 30∶70）；检测波长为270 nm；流速1 ml/min。按淫羊藿苷峰计算理论板数应不低于1 500。

　　2.1.2  标准曲线的制备精密称取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每毫升含40 μg的对照品储备液。临用时配成不同浓度对照品液，精密吸取对照品溶液10 μl，按设定的色谱条件制定标准曲线，结果显示在0.09～23 μg/ml的浓度范围内，淫羊藿苷的吸收度（Y）与浓度（X）呈良好的线性关系，其回归方程为Y= 0.038 7 X + 0.000 1(r= 0.999 9)。5次的日内精密度和日间精密度分别为1.74%和2.11%。

　　2.1.3  供试品溶液的制备提取所得药液2 ml，置分液漏斗中，用醋酸乙酯萃取4次，10 ml/次，合并醋酸乙酯层。蒸干，残渣用10 ml甲醇溶解，滤过，即得。　　2.1.4  样品的检测精密吸取供试品溶液10 μl，注入液相色谱仪，测定。峰面积代入标准曲线，计算各供试品中淫羊藿苷的含量。

　　2.2  渗漉实验设计依据《中华人民共和国药典》2005版Ⅰ部所录照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法［3］。按处方比例称取药材184.4 g，用30%，50%，70%乙醇作溶剂，浸渍48 h后，以1～3 ml/min的速度缓缓渗漉，收集渗漉液。以总淫羊藿苷收率作为考察指标，结果显示3种条件下淫羊藿苷含量分别为46.57，58.46和64.32 mg。根据实验结果可知补肾益精颗粒渗漉提取的最佳工艺为用70%乙醇作溶剂，浸渍48 h后，以1～3 ml/min的速度缓缓渗漉。

　　2.3  回流法正交实验设计回流提取过程中，综合考虑影响提取效果的多种因素，采用乙醇浓度(A)，溶媒用量(B)，提取时间(C)及提取次数(D)等因素(见表1)进行考察，按L9(34)正交设计进行试验［4，5］，以淫羊藿苷收率作为考察指标，对最佳回流提取工艺进行优化筛选。结果见表 2。表1  回流法正交实验因素水平（略）表2  回流法正交实验（略）

    淫羊藿苷乙醇回流法的实验结果及方差分析(表2)可知，影响淫羊藿苷提取的主次因素为A > D > C > B，即乙醇浓度>提取次数>提取时间>溶媒用量。最佳回流工艺为：A2D1C3B2。2.4  验证实验根据筛选得到的最佳工艺提取5批样品，184. 4 g药材中淫羊藿苷含量的平均值为103.16 mg。此结果表明，采用最佳提取工艺提取补肾益精颗粒中的淫羊藿苷提取率较高。

　　3  讨论

    淫羊藿的主要有效成分是淫羊藿苷类、黄酮类等，此类成分易溶于水、甲醇、乙醇等溶媒，故可采用乙醇回流法、碱提取法、水提醇沉法等方法提取，但水提醇沉法浓缩时间过长，有效成分破坏大，且无效杂质成分多。碱提取法因提取或浓缩过程中会发生碱性水解，引起苷类成分水解使有效成分提取量减少，而乙醇回流法浓缩时间较短，pH值适中，苷类成分损失较少。因此，根据有关资料和预实验，我们采用渗漉法和乙醇回流法提取淫羊藿的有效成分，并通过正交设计实验对主要影响因素进行了研究，优选出最佳提取工艺条件。由实验结果分析可知，渗漉提取消耗大量酒精，耗时长，应选择乙醇回流提取法，影响淫羊藿苷提取的主次因素为A>D>C>B，即乙醇浓度>提取次数>提取时间>溶媒用量。最佳回流工艺为：A2D1C3B2，验证实验进一步证明该工艺稳定可行，因此筛选得到的最佳提取工艺条件为：用8倍量50％乙醇，提取1次3 h。

【参考文献】
  　　［1］陈洪宝, 李彩荣, 杨庆胜，等. 高效液相色谱法测定元胡止痛片中延胡索乙素的含量［J］. 时珍国医国药, 2006, 17(9): 1701.

　　［2］江永南，姚彩霞，黄趣碧. 淫羊藿黄芪口服液的工艺研究［J］．广东药学, 2000, 10(4): 27.

　　［3］国家药典委员会. 中国药典，Ⅰ部［S］. 北京: 化学工业出版社, 2005：101.

　　［4］张雪琼, 石召华, 熊富良. 正交实验法优选胆舒的提取工艺［J］. 时珍国医国药, 2006, 17(4): 591.

　　［5］程建明, 井山林. 延胡索中延胡索乙素不同提取方法的比较研究［J］. 时珍国医国药, 2006, 17(7): 1236.