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【摘要】 目的优选黄芩中黄芩素的提取工艺。方法通过正交实验以黄芩素作为指标考察4个因素（溶剂类型，提取时间，提取方法，提取次数）、3个水平对提取效果的影响，以反相高效液相色谱（RPHPLC）法测定黄芩素的含量。结果黄芩素的最佳提取工艺为A2B1C2D3，即采用冷浸法，用水作为提取溶剂，提取90 min，共提取4 次。结论溶剂的类型对黄芩素的提取影响最大，该研究确定的黄芩素的提取工艺合理、可行。
【关键词】 正交实验 黄芩 黄芩素 提取工艺
Orthogonal Test on Extracting Technology of Baicalein of Scutellaria baicalensis
Abstract：ObjectiveTo optimize the extract conditions for baicalein of Scutellaria baicalensis. MethodsThe orthogonal design with three levels of four factors including solvent , extracting time , extracting methods and extracting times were adopted , the contents of baicalein were determined by RPHPLC. ResultsThe optimum extracting conditions were A2B1C2D3 , that was cold-maceration, water as the solvents and to extract for 90 min and totally for 4 times .ConclusionThe solvents greatly influenced the extraction of baicalein . The extract technology of baicalein is feasible and reasonable .
Key words：Orthogonal test; Scutellaria baicalensis; Baicalein; Extract technology
黄芩是常用中药，为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis的根，具有清热燥湿、泻火解毒、止血安胎等功效［1］。黄芩素(Baicalein)为黄芩苷的苷元，也是黄芩主要有效成分之一，具有多种药理作用，在临床上主要用于抗菌消炎和抗感染，用来治疗呼吸道感染、急性扁桃体炎、咽炎、慢性阻塞性肺病、传染性肝炎、急慢性胃肠炎及细菌性痢疾、肾盂肾炎等，并显示出了较好的疗效［2］，也有研究发现黄芩苷元比其苷作用强［3］。现有研究多是进行了黄芩苷的提取工艺研究，未见有对黄芩素方面的研究。作者采用L9(34)正交实验法，以RP-HPLC测定黄芩中黄芩素含量，优选出黄芩素的最佳提取工艺条件，为实际生产和临床应用提供科学依据。
1 仪器与药品
Agilent 1100LC色谱系统。黄芩药材购自河南省药材公司，由郑州大学药学院潘成学副教授鉴定为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis的根，黄芩素对照品（购自中国生物检定所）。试剂：甲醇(色谱纯)、甲醇(分析纯)、超纯水、蒸馏水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱为 Kromasil C18柱，流动相为甲醇－水(65∶35，含0.6%三乙胺，加磷酸调pH 2.6)；检测波长275 nm；柱温为室温 ；流速l.0 ml/min。在该色谱条件下，黄芩素与其他成分有较好分离，见图1。
2.2 正交设计正交实验设计选用L9(34)正交实验表，以黄芩素含量为指标，选取提取方法、溶剂、提取时间、提取次数对其影响。因素水平见表1。
表1 因素水平（略）
2.3 对照品溶液的制备
精密称取黄芩素对照品0.90 mg，先用甲醇定溶至5 ml，后取0.5 ml加甲醇定溶于10 ml容量瓶中，即得0.009 mg/ml的对照品贮备液。
2.4 供试品溶液的制备
取干燥黄芩粗品，粉碎后过14目筛，每次精密称取5 g，根据正交设计实验进行提取，提取物先用甲醇定容置100 ml容量瓶中，然后取0.1 ml用甲醇稀释置10ml容量瓶中，用0.45 μm微孔滤膜过滤,取续滤液，作为供试品溶液。
2.5 标准曲线的制备
取黄芩素对照品贮备液制成浓度分别为0.675，0.900，2.250，4.500，6.75，9.000 μg/ml，进样20μl。以峰面积为横坐标，黄芩素浓度（μg/ml）为纵坐标，进行线性回归，得方程为：Y=0.014 4X+0.269 6，r=0.999 4。结果表明在0.675～9.000 μg/ml范围内，黄芩素浓度与峰面积呈良好的线性关系，其色谱图见图1。2.6 稳定性考察 吸取4号样品液和对照品溶液分别于0 ，2 ，4 ，6 ，8 ，10 h进样20 μl，得样品液峰面积RSD=2.56 %(n=6)，对照品溶液峰面积的RSD=2.45%(n=6)，表明样品及对照品在10 h内稳定性较好。 2.7 正交实验及结果分析实验结果通过正交实验提取及含量测定后，直观分析结果（见表2）表明：影响黄芩中黄芩素提取的主要因素为B（溶剂），其次是D（提取次数），由计算得出其最佳提取工艺为A2B1C2D3，即采用冷浸法，用水作为提取溶剂，提取90 min，共提取4次。表2 正交实验设计（略）
2.8 最佳工艺验证实验按照正交实验优选出的黄芩最佳提取工艺，对黄芩中黄芩素的提取进行验证实验考察。黄芩素提取率平均为5.12%（n=3），与正交实验最大值接近，方法可行。
3 讨论
通过采用甲醇水、甲醇0.2%磷酸、甲醇0.6%磷酸、甲醇水（含0.6%三乙胺，加磷酸调pH）等不同溶剂系统及不同比例为流动相进行试验，确定流动相为甲醇水 (65∶35，含0.6%三乙胺，加磷酸调pH＝2.6)，样品峰能得到了较好的分离。
黄芩素为黄酮类化合物，其结构中具有邻三酚羟基，易被氧化成对醌结构，所以对照品溶液通常要冰箱保存，并且在一定时间内尽快操作。
由本研究结果可知，溶剂的类型对黄芩素的提取影响最大，从其结构分析和溶解度实验来看，虽然黄芩素水溶性不大，但蒸馏水比其他溶剂的提取率都高，其原因可能是一部分黄酮苷类发生水解生成了黄芩素，尤其非加热方法（超声法和冷浸法），使得植物体内原存的水解黄芩苷等的葡萄糖醛酸酶能较好地发挥水解作用。
笔者也进行了冷浸法用水作为溶剂、提取120 min、提取4次（实验Ⅰ）及冷浸法用水作为溶剂、提取90 min、提取5次的实验（实验Ⅱ）。采用实验Ⅰ和Ⅱ中的提取工艺，结果黄芩素的提取率分别为4.90%（n=3）和5.11%（n=3）,故采用本正交实验所确定的提取工艺合理、经济适用。
【参考文献】
［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］..北京：化学工业出版社，2005：212.
［2］张喜平，李宗芳，刘效恭.黄芩素的药理学研究概况［J］.中国药理学通报，2001， 17(6)：711.
［3］胡世林，冯学峰. 黄芩研究的某些新进展［J］.中国药学杂志，2001，36（11）：728 |
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发表于 2014-8-19 21:54:02
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